全 文 ：HPLC法测定山蜡梅中东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱
白会强1 ,2 ,蔡少华2 ,徐 　亮2 ,何明珍1 ,张小娟1 ,冯育林1 ,2 3 ① ,王跃生1 ,杨世林1 ,2
(11 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ,江西 南昌 　330006 ; 21 江西中医学院 ,江西 南昌 　330006)
摘 　要 :目的 　建立高效液相色谱法同时测定山蜡梅中东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱量的方法。方法 　Hypersil
ODS 柱 (250 mm ×416 mm ,25μm) ;流动相为甲醇2水 ,梯度洗脱 ;检测波长为 348、376、222 nm ;体积流量为 1 mL/
min。结果 　山蜡梅叶中东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱达到基线分离且线性关系良好 ,线性范围为 10102～50110、
10104～50120、10104～50120μg/ mL ,平均加样回收率分别为 97113 %、96168 %、97122 %。结论 　本方法用于山蜡
梅中东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱的定量测定 ,具有快捷、简便、准确的特点 ,能够多成分综合评价该药材。
关键词 :山蜡梅 ;东莨菪素 ;槲皮素 ;夏蜡梅碱 ;高效液相色谱法
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320486202
　　山蜡梅 Chi monant hun ni tens Oliv1 为我国特
有的蜡梅科蜡梅属植物 ,主要分布于亚热带湿润的
常绿落叶阔叶混交林地带 ,遍及我国西南部浙江、湖
北、湖南、四川、广东、广西、江西等省区。药用部位
为其干燥叶 ,其中含有丰富的挥发油 ,可以泡茶饮
用 ,民间用于治疗感冒咳嗽[1 ,2 ] 。《中国药典》1977
年版记载“山蜡梅叶”及其制剂“山蜡梅茶”用于治疗
感冒和流行性感冒。近年对山蜡梅化学成分研究有
少量报道[3 ,4 ] ,为了合理评价和开发利用该药用资
源 ,探讨了用高效液相色谱方法同时测定东莨菪素、
槲皮素、夏蜡梅碱 3 个化学成分的量 ,取得了较满意
的结果。
1 　仪器与试药
Agilent —1100 系列高效液相色谱仪 (美国安捷
伦公司) ;DAD 检测器 ; Tp —1200 电子天平 (湘仪天
平仪器设备有限公司 ) ; MILL I2Q 型超纯水仪
(MILL IPORE) ; KQ —250 超声清洗仪 (昆山市超声
仪器有限公司) 。
东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱对照品由中药固体
制剂制造技术国家工程研究中心提供 ,质量分数均
大于 98 %。甲醇为色谱纯 ,水为超纯水。
山蜡梅叶采自江西婺源 ,经江西中医学院杨世
林教授鉴定为蜡梅科 (Calycant haceae) 山蜡梅 Chi2
monant hun ni tens Oliv1 。
2 　方法与结果
2. 1 　色谱条件[5 ] : 色谱柱为 Hypersil ODS ( 250
mm ×416 mm ,25μm) ;流动相为甲醇 (A)2水 (B) 梯
度洗脱 ,B 相 0～10 min 70 % ,10. 01～20 min 55 % ,
20. 01～30 min 35 % ;检测波长为 348、376、222 nm ;
体积流量为 1 mL/ min ,柱温 30 ℃,进样量 :10μL 。
2. 2 　对照品溶液的制备 :精密称取东莨菪素、槲皮
素、夏蜡梅碱对照品 5101、5102、5102 mg ,置于 50
mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀后即得
混合对照品溶液。
2. 3 　供试品溶液的制备 :精密称取山蜡梅叶 5 g ,置
于 500 mL 圆底烧瓶中 ,50 %乙醇回流提取两次 ,每
次 2 h ,每次加入 50 %乙醇 200 mL ,合并提取液 ,浓
缩至干 ,甲醇溶解 ,置于 100 mL 量瓶中 ,并稀释至
刻度即得供试品溶液。
2. 4 　线性关系考察 :分别精密吸取东莨菪素、槲皮
素、夏蜡梅碱对照品溶液 110、210、310、410、510 mL ,
分别置于 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,进
样 10μL ,测定峰面积。以峰面积平均值和质量浓度
进行回归处理 ,结果东莨菪素在 10102～50110μg/
mL 线性良好 ,回归方程为 Y = 29 736 X - 24. 46 , r =
0. 999 7 ;槲皮素在 10. 04～50. 20μg/ mL线性良好 ,回
归方程为 Y = 16 283 X - 214. 5 , r = 0. 999 8 ;夏蜡梅碱
在 10. 04～50. 20μg/ mL 线性良好 ,回归方程为 Y =
2 013 X + 89. 29 , r = 0. 999 4。
2. 5 　精密度试验 :山蜡梅叶制备供试品溶液 ,进样
10μL ,连续进样 6 次 ,测定峰面积 ,计算得东莨菪
素、槲皮素、夏蜡梅碱峰面积积分值的 RSD 分别为
0198 %、1121 %、1136 %。
2. 6 　稳定性试验 :山蜡梅叶制备供试品溶液 ,分别
·684· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206222　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“十一五”科技支撑计划课题 (2006BAI06A01201) ;国家“十一五”科技支撑计划课题 (2006BAI06A18209) ;江西省卫生厅中医
药科研计划课题 (2008A060)
作者简介 :白会强 (1984 —) ,男 ,陕西省神木人 ,硕士研究生 ,研究方向为中药新药及质量标准研究。E2mail :angelsignemail @126. com3 通讯作者　冯育林　Tel : (0791) 7119632 　E2mail :fengyulin2003 @hot mail . com
于 0、2、4、8、12、24 h 进样 10μL 进行分析 ,测定色
谱峰面积 ,计算得东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱峰面
积积分值的 RSD 分别为 1116 %、1128 %、0194 %。
2. 7 　重现性试验 :山蜡梅叶 5 份 ,制备供试品溶液 ,
进样测定 ,计算得东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱峰面
积积分值的 RSD 分别为 1121 %、1145 %、1133 %。
2. 8 　加样回收率试验 :精密称取山蜡梅叶 5 g ,精密
加入适量混合对照品 ,制备供试品溶液 ,依法测定 ,
计算 , 结果平均加样回收率分别为 97113 %、
96168 %、97122 % ,RSD 为 1157 %、1152 %、1127 %。
( n = 3)
2. 9 　样品的测定 :取 5 批山蜡梅叶 ,制备供试品溶
液 ,进样测定峰面积 ,每批重复测定 3 次 ,按回归方
程计算东莨菪素、槲皮素、夏蜡梅碱的质量分数 ,结
果见表 1。色谱图见图 1。
表 1 　样品中东莨菪素、夏蜡梅碱、槲皮素的测定结果( n = 5)
Table 1 　Determination of scopoletin , calycanthine , and
quercetin in C. nitens ( n = 5)
样　品 东莨菪素/ % 夏蜡梅碱/ % 槲皮素/ %
20080912 0. 016 0. 110 1. 189
20080913 0. 020 0. 133 1. 522
20080915 0. 017 0. 116 1. 266
20080917 0. 019 0. 120 1. 349
20080920 0. 014 0. 119 1. 244
S12东莨菪素　S22槲皮素　S32夏蜡梅碱
S12scopoletin 　S22quercetin 　S32calycant hine
图 1 　样品溶液( A)和混合对照品( B)的 HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of sample solution ( A)
and mixture reference substance ( B)
3 　讨论
本研究采用甲醇2水梯度洗脱 ,多波长检测 ,得
到较好的分离度 ,且保留时间适当。方法学考察发
现本方法可以很好地测定山蜡梅叶中东莨菪素、槲
皮素和夏蜡梅碱 ,可以为山蜡梅的质量控制提供参
考和依据。
实验比较了流动相甲醇2水 ( 20101～30 min ,
70 ∶30) 、甲醇2水 (20101～30 min ,65 ∶35) 、甲醇2
水 (20101～30 min ,60 ∶40) ,结果显示第 1 种流动
相所得待检色谱峰有严重的拖尾现象 ,影响色谱峰
的分离 ;第 2 种流动相所得色谱峰峰形对称性较好 ,
分离度良好可使夏蜡梅碱与槲皮素、东莨菪素及其
他成分获得基线分离 ;第 3 种流动相所得色谱峰峰
形对称性差 ,综合考虑选择甲醇2水 ( 20101 ～ 30
min ,65 ∶35)为本实验流动相。
东莨菪素、槲皮素和夏蜡梅碱峰分别体现了山
蜡梅的药材质量 ,分别在 348、376、222 nm 为最大
吸收。所以在进行定量测定时 ,采用了 3 个波长的
HPL C 数据 ,即东莨菪素峰采用波长 348 nm 的峰
面积 ,槲皮素峰采用波长 376 nm 的峰面积 ,夏蜡梅
碱峰采用波长 222 nm 的峰面积。
比较了 190～400 nm 波长下的色谱图 ,结果
348 nm 波长下 ,色谱峰型较好 ,分离情况良好 ;东莨
菪素峰、槲皮素峰、夏蜡梅碱峰相对保留时间 RSD
均小于 1 % ,表明色谱峰在 HPL C 图谱中相对位置
稳定。
参考文献 :
[ 1 ] 　肖炳坤 ,刘耀明1 蜡梅属植物分类 ,化学成分和药理作用研究
进展[J ]1现代中药研究与实践 ,2003 ,17 (2) :592611
[ 2 ] 　肖炳坤 ,黄荣清 ,骆传环1 山蜡梅叶中蜡梅碱和山蜡梅碱的分
析与鉴定[J ]1质谱学报 ,2004 ,25 (10) :592601
[ 3 ] 　肖炳坤 ,刘耀明 ,冯淑香 ,等 1 山蜡梅叶的化学成分研究 ( Ⅰ)
[J ]1中草药 ,2005 ,36 (2) :18721891
[ 4 ] 　孙丽红 ,何明珍 ,冯育林 ,等1 山蜡梅中的化学成分研究[J ]1中
草药 ,2009 ,40 (8) :1214212161
[ 5 ] 　纪兰菊 ,陈　怡 ,陈桂堔 ,等115 种獐牙菜属植物中主要药用成
分的高效液相色谱法含量测定 [J ]1 西北植物学报 , 2004 , 24
(7) :1298213021
《中草药》杂志售过刊信息
　　《中草药》杂志编辑部尚存部分过刊合订本 ,包括 :197421975 年、1976 年、1979 年、1988 - 1993 年 (80 元/ 年) ,1996、
1997 年 (110 元/ 年) 、1998 年 (120 元/ 年) 、1999 年 (135 元/ 年) 、2000 年 (180 元/ 年) 、2001 - 2003 年 (200 元/ 年) 、2004
年 (220 元/ 年) 、2005 年 (260 元/ 年) 、2006 年 (280 元/ 年) 2009 年 (350 元/ 年) 、2007 年 (280 元/ 年) 、2008 年 (280 元/
年) 、2009 年 (400 元/ 年) 。1996 年增刊 (50 元) 、1997 年增刊 (45 元) 、1998 年增刊 (55 元) 、1999 年增刊 (70 元) 、2000 年
增刊 (70 元) 、2001 年增刊 (70 元) 、2002 年增刊 (65 元) 、2003 年增刊 (65 元) 、2004 年增刊 (65 元) 、2005 年增刊 (65 元) 、
2006 年增刊 (65 元) 、2007 年增刊 (65 元) 、2008 年增刊 (55 元) 、2009 年增刊 (55 元) 。欢迎订购。订阅者请直接与《中
草药》杂志编辑部联系。
电话 : (022) 27474913 　23006821 　　　传真 : (022) 23006821 　　　E2mail :zcy @tip rpress. com
·784·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月