全 文 ：24 h 进样测定 ,每次 60μL ,计算峰面积的 RSD 值 ,
结果绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的
分别为 1164 %、1169 %、1158 %、1139 % ,表明供试
品溶液在 24 h 内稳定。
219 　回收率试验 :取批号为 080901 样品 ,精密称
取 1 g ,按样品溶液处理方法制备吴茱萸汁 ,重复 6
份 ,分别加入绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸
次碱对照品 61823、71885、01421、01382 mg ,按上述
色谱条件测定 ,计算加样回收率 ,结果绿原酸、吴茱
萸内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱的回收率分别为
96111 %、109186 %、98178 %、98165 % ,RSD 分别为
1108 %、2116 %、1172 %、2106 %。
2110 　样品测定 :取 5 批样品 ,每批平行 3 份 ,制备
供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,外标法计算 ,各
成分的测定结果见表 2。
表 2 　吴茱萸汁中各成分的测定结果( n = 3)
Table 2 　Determination of every component in
Fructus Evodiae juice ( n = 3)
批号
绿原酸/
(mg ·g - 1)
吴茱萸内酯/
(mg ·g - 1)
吴茱萸碱/
(mg ·g - 1)
吴茱萸次碱/
(mg ·g - 1)
080901 61855 71969 01 407 01391
080902 61751 81080 01 408 01407
080903 61300 81259 01 447 01403
080904 61636 81376 01 384 01348
080905 61646 81479 01 383 01351
3 　讨论
实验中对绿原酸、吴茱萸内酯、吴茱萸碱、吴茱
萸次碱进行全波长扫描发现 ,绿原酸在 324 nm 有
最大吸收 ,吴茱萸内酯在 205 nm 有最大吸收 ,且在
其他波长吸收很弱 ,吴茱萸碱和吴茱萸次碱在 225
nm 处有最大吸收 ;为便与检测 ,且考虑到样品中各
成分含量不高 ,故选用 205、225、324 nm 同时测定
吴茱萸汁中成分。该方法准确、可靠、重现性好 ,可
以用于辅料吴茱萸汁的质量控制。
在吴茱萸汁的制备过程中 ,采用了正交试验优
选出的吴茱萸最佳水提工艺 ,即加入 16 倍量的水 ,
提取 3 次 ,每次 115 h。实验中发现 ,不宜将吴茱萸
药材粉得太细 ,否则在水煎煮过程中易起泡且会影
响吴茱萸中有效成分的溶出 ,此结论也与文献报道
一致[7 ] 。本实验中未粉碎 ,在提取前浸泡 30 min 后
加热提取 ,效果较好。
萸黄连作为一种传统的炮制工艺 ,能一直沿用
至今 ,可见其临床疗效确切 ;但是 ,迄今为止仍未有
对萸黄连及其辅料进行质量控制的统一标准 ,这给
辅料生产制备带来了随意性 ,工艺不规范、质量不明
确 ,其质量好坏无从考证和判断。这样 ,严重影响了
辅料的质量和其在主药中所发挥的作用。因此 ,为
提高辅料的质量 ,开展辅料制备工艺规范化研究 ,并
制定出切实可行的质量标准意义重大。本研究对吴
茱萸汁进行成分分析和质量控制为萸黄连炮制辅料
的质量标准的制定提供了重要依据。
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化瘀通脉汤的 HPLC指纹图谱研究
马 　瑛 ,刘　芳 ,柴士伟
①
(天津中医药大学第一附属医院 ,天津 　300193)
摘 　要 :目的 　建立化瘀通脉汤剂的高效液相色谱指纹图谱 ,以评价化瘀通脉汤剂的质量。方法 　采用大连依利特
Hypersil ODS2 C18色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相 :乙腈20105 %甲酸 ,梯度洗脱 ;体积流量 :110 mL/ min ;检
测波长 :280 nm ;柱温 :30 ℃;进样量 :20μL 。测定了 12 批化瘀通脉汤剂并进行指纹图谱分析。结果 　建立了丹参
水溶性成分指纹图谱共有模式 ,显示 14 个共有峰 ,指认了阿魏酸、丹酚酸B 2 个特征峰。结论 　指纹图谱色谱图中
·893· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009210230　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :马　瑛 (1969 —) ,女 ,天津人 ,副主任药师 ,硕士 ,主要从事中药鉴定、临床药学等。
Tel :13821150121 　E2mail : jubo @sohu1com
各个峰分离度较好 ,特征明显 ,可做为化瘀通脉汤的质量控制标准。
关键词 :化瘀通脉汤 ;阿魏酸 ;丹酚酸 B ;指纹图谱 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320398203
　　化瘀通脉汤是天津中医药大学第一附属医院的
医院制剂 ,由丹参、川芎、当归、鸡血藤组成 ,具有活
血、化瘀、通脉的功效 ,在治疗神经性疼痛、不稳定性
心绞痛、颈椎病、静脉血栓等具有良好疗效[1～5 ] 。药
理实验表明化瘀通脉汤有降低血浆 ET21、ICAM21
及提高血浆 NO 水平的作用[ 5 ] 。近年来对化瘀通脉
汤质量标准也进行了相关研究[6 ] 。指纹图谱用于中
药制剂的质量控制的研究报道较多[7 ,8 ] 。本实验拟
采用中药指纹图谱技术对化瘀通脉汤化学成分的数
量、种类和各成分的量进行控制 ,从而实现从宏观和
整体角度全面控制化瘀通脉汤的质量。
1 　仪器与材料
Waters 600 E 液相色谱仪 (配有 UV 检测器、四
元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器 , Empower
工作站 ,美国 Waters 公司) 。A X205 分析天平 (瑞
士 Mettler Toledo 公司) 。
甲醇、乙腈为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 ,水
为超纯水 ,丹酚酸 B、阿魏酸对照品购于中国药品生
物制品检定所 ,化瘀通脉汤均来源于天津中医药大
学第一附属医院煎药室。
2 　方法与结果
211 　对照品溶液的制备 :精密称取阿魏酸对照品 5
mg ,置 25 mL 量瓶中 ,用 50 %甲醇溶解 ,并稀释至刻
度 ,摇匀 ,即得。精密称取丹酚酸 B 对照品 5 mg ,置
25 mL 量瓶中 ,用水溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
212 　供试品溶液的制备 :取化瘀通脉汤 100 mL ,减
压浓缩至干 ,加 50 %甲醇溶解 ,定容至 25 mL 。进
样前用 0145μm 滤膜滤过。
213 　色谱条件 :大连依利特 Hypersil ODS2 C18 色
谱柱 ( 250 mm ×416 mm , 5 μm) ; 流动相 : 乙腈2
0105 %甲酸 (梯度洗脱) ;体积流量 :110 mL/ min ;检
测波长 :280 nm ;柱温 :30 ℃;进样量 :20μL 。
214 　方法学考察
21411 　精密度试验 :分别吸取供试品溶液 (批号
090512)各20μL ,连续进样5次 ,结果14个共有峰保留时
间的 RSD均小于 3 % ,相对峰面积的 RSD均小于 3 %。
21412 　稳定性试验 :取供试品溶液 (批号 090512)
20μL ,分别在 0、4、8、12、24、48 h 进样 6 次。结果
14 个共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 3 % ,相对
峰面积的 RSD 均小于 5 % ,说明 48 h 内供试品溶液
稳定性较好。
21413 　重现性试验 :取供试品溶液 (批号 090512) 5
份 ,制备供试品溶液 ,取供试品溶液 20μL ,依法进
样分析 ,结果 14 个共有峰保留时间的 RSD 均小于
3 % ,相对峰面积的 RSD 均小于 5 %。
215 　对照指纹图谱的绘制和相似度分析 :对 12 批
批次化瘀通脉汤进行指纹图谱分析 ,采用国家药监
局推荐使用的“计算机辅助中药指纹图谱相似度计
算软件”对测定结果进行拟合 ,得到化瘀通脉的指纹
图谱共有模式 (图 1、2) 。所建立的对照指纹图谱包
含 14 个共有峰。对 12 批样品进行相似度检测 ,结
果表明样品的相似度均在 0192 以上 ,见表 1。
图 1 　12 批化瘀通脉汤的指纹图谱
Fig. 1 　Fingerprint of 12 batches of Huayu Tongmai Decoction
图 2 　化瘀通脉汤共有模式图谱
Fig. 2 　Common f ingerprint of Huayu Tongmai Decoction
表 1 　不同批次化瘀通脉汤指纹图谱与共有模式比较的
相似度
Table 1 　Comparison of Resemblance among Huayu Tongmai
Decoction from different batches with mutual mode
批号 相似度 批号 相似度
1 01921 7 01932
2 01937 8 01956
3 01921 9 01967
4 01988 10 01921
5 01981 11 01927
6 01926 12 01974
216 　指纹图谱的建立 :分析 12 批化瘀通脉汤 ,第 4
号样品与对照指纹图谱有最好的相似性 ,相似度
01988 ,表示可作为化瘀通脉汤的指纹图谱。色谱图
中 6 号峰为阿魏酸 ,9 号峰为丹酚酸 B (图 3) 。以图
中 6 号峰为参照峰 ,12 批化瘀通脉汤 14 个共有峰
的相对保留时间和相对峰面积见表 2、3。
·993·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
图 3 　阿魏酸( A)和丹酚酸 B( B)对照品的 HPLC色谱图
Fig. 3 　HPLC Chromatograms of ferulic acid ( A)
and salvianolic acid B reference substance ( B)
3 　讨论
在实验过程中 ,考察了 230、250、270、280、290
nm 的指纹色谱图 ,结果表明 ,在 280 nm 下检测到
的色谱指纹图谱信息量大 ,特征性强 ,具有较好的代
表性 ,且不同成分的响应值较为均匀 ,因此选择 280
nm 作为检测波长。
表 2 　化瘀通脉汤指纹图谱中各共有峰的相对保留时间
Table 2 　Relative retention time of common peaks in f ingerprints of Huayu Tongmai Decoction
样品
各峰相对保留时间
1 2 3 4 5 6 (s) 7 8 9 10 11 12 13 14
1 0118 01 27 0133 01 49 0156 11 00 1124 11 33 1144 11 56 1159 11 72 1190 21 36
2 0118 01 27 0134 01 50 0157 11 00 1124 11 32 1143 11 55 1158 11 70 1187 21 33
3 0118 01 27 0133 01 49 0156 11 00 1124 11 33 1144 11 56 1159 11 71 1188 21 35
4 0117 01 27 0133 — 0156 11 00 — 11 33 1144 11 56 1159 11 70 1188 21 34
5 0117 01 27 0133 01 49 0156 11 00 1124 11 33 1143 11 56 1159 11 71 1187 21 35
6 0118 01 26 0134 01 49 0157 11 00 1124 11 33 1144 11 56 1159 11 71 1188 21 36
7 0118 01 27 0133 01 49 0155 11 00 1124 11 32 1143 11 56 1157 11 71 1189 21 34
8 0118 01 26 0133 01 49 0156 11 00 1124 11 34 1144 11 55 1159 11 72 1188 21 35
9 0117 01 27 0133 01 49 0155 11 00 1123 11 33 1142 11 56 1159 11 72 1189 21 35
10 0118 01 27 0134 — — 11 00 1124 11 33 1144 11 55 1158 11 71 1188 21 36
11 0118 01 27 0133 01 50 0157 11 00 1124 11 33 1144 11 56 1159 11 72 1189 21 34
12 0118 01 27 0134 01 49 0155 11 00 1124 11 32 1143 11 55 1159 11 71 1188 21 34
平均值 0118 01 27 0133 01 49 0156 11 00 1124 11 33 1144 11 56 1159 11 71 1188 21 35
表 3 　化瘀通脉汤指纹图谱中各共有峰的相对峰面积
Table 3 　Relative peak area of common peaks in f ingerprints of Huayu Tongmai Decoction
样品
各峰相对峰面积
1 2 3 4 5 6 (s) 7 8 9 10 11 12 13 14
1 0166 01 54 0144 11 03 0125 11 00 0133 01 51 2141 01 17 2133 01 05 0110 01 12
2 0183 01 49 0157 01 74 0141 11 00 0159 01 76 3102 01 49 2184 01 12 0108 01 19
3 1102 01 96 0165 11 94 0126 11 00 0169 01 64 2106 01 14 3113 01 08 0112 01 16
4 0164 01 58 0145 01 95 0121 11 00 0135 01 57 2151 01 16 2123 01 05 0111 01 14
5 0146 01 47 0141 — 0119 11 00 — 01 43 1158 01 18 0100 01 06 0108 01 11
6 1134 01 12 0182 11 96 0131 11 00 0167 01 69 2154 01 19 3151 01 09 0107 01 15
7 0132 01 20 0134 01 78 0131 11 00 0122 01 47 2154 01 27 1117 01 12 0119 01 14
8 0137 01 24 0128 01 53 0120 11 00 0118 01 50 2184 01 20 1151 01 04 0105 01 10
9 0172 01 56 0162 11 27 0134 11 00 0148 01 60 2162 01 26 2142 01 07 0107 01 09
10 0151 01 61 0146 — — 11 00 0157 01 42 2159 01 13 2121 01 06 0109 01 13
11 0139 01 28 0131 01 64 0127 11 00 0125 01 42 2179 01 23 2114 01 06 0109 01 14
12 0173 01 61 0154 11 01 0132 11 00 0139 01 54 2181 01 19 2129 01 06 0112 01 09
　　通过对化瘀通脉汤的 H PL C 指纹图谱研究 ,为
化瘀通脉汤的物质基础提供了部分数据 ,同时为其
汤剂中各水溶性成分的稳定性提供了参考 ,为化瘀
通脉汤质量控制提供了科学和全面的方法。
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