全 文 ：表 5 　生品、常压蒸、高压蒸样品中马钱苷、52羟甲基糠醛的
测定
Table 5 　Determination of loganin and 52HMF in processed
products of Fructus Corni steamed at pressure
and high pressure
样　品 马钱苷量/ % 52羟甲基糠醛/ %
生品　　　 0180 —
常压蒸制品 0163 0137
高压蒸制品 0172 0147
3 　讨论
笔者另外进行了山茱萸不同炮制品对小鼠补益
作用的实验研究。结果表明 ,常压蒸酒萸肉、高压蒸
酒萸肉均能增强补益作用 ,两者的补益效果无显著
性差异 ,但与同剂量的生品比较 ,两者补益作用均增
强 (另文发表) 。采用高压蒸制法炮制山茱萸 ,操作
简便 ,压力、时间、温度等便于控制 ,既提高了工作效
率 ,又减少了药汁的损失。与常压蒸制方法相比 ,高
压酒蒸山茱萸的成分及药效均未发生明显变化 ,而
高压蒸制明显降低了能耗 ,节约了时间。故此方法
既不违背传统的炮制原理 ,又符合药材炮制的现代
要求 ,可推广用于大规模生产。
参考文献 :
[ 1 ] 　贾　岗 ,邵玉蓝 ,张　云 ,等1 山茱萸炮制历史沿革及现代研究
[J ]1 中草药 ,2009 ,40 (增刊) :692711
[ 2 ] 　余宗亮 ,蔡宝昌 ,丁　霞1 正交实验优选山茱萸炮制工艺[J ]1
中药新药与临床药理 ,2006 ,17 (2) :13521371
[ 3 ] 　呼海涛 ,张振凌1 酒蒸山萸肉炮制工艺研究 [J ]1 中外健康文
摘 ,2007 ,4 (12) :1656216571
[ 4 ] 　刘　波 ,江崇湖 ,朱冬梅1 酒蒸山萸肉炮制工艺的研究[J ]1 山
东中医杂志 ,2007 ,26 (9) :63426351
[ 5 ] 　宋　崎 ,周小初 ,宋　英 ,等1 正交设计法优化酒萸肉炮制工艺
条件[J ]1 上海中医药杂志 ,2008 ,42 (6) :852871
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定及生物活性研究[J ]1 中国中药杂志 ,2008 ,33 (4) :39223961
[ 7 ] 　中国药典[ S]1 一部120051
[ 8 ] 　杜伟峰 ,蔡　皓 ,丁 　霞 ,等1 RP2HPL C 法测定山茱萸生品和
酒制品中没食子酸、52羟甲基糠醛、莫诺苷和马钱素[J ]1 中草
药 ,2008 ,39 (12) :1813218151
HPLC法测定六味地黄片中马钱苷和丹皮酚
魏惠珍1 ,邱伟华2 ,饶 　毅1 ,2 3 ① ,陈银芳2 ,陈燕军2 ,杜艳龙1
(11 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 ,江西 南昌 　330006 ; 21 江西中医学院 ,江西 南昌 　330006)
摘 　要 :目的 　建立六味地黄片中马钱苷、丹皮酚的测定方法。方法 　采用高效液相色谱法同时测定六味地黄片
中马钱苷、丹皮酚。色谱条件 : Hypersil ODS2 C18色谱柱 (250 mm ×416mm , 5μm) ;流动相 :甲醇2水梯度洗脱 ;检
测波长 :238 nm。结果 　马钱苷和丹皮酚的线性范围分别为 2147～988180μg ( r = 01999 7) 、1158～633160μg ( r =
01999 9) ,平均回收率分别为 10012 %(RSD 为 2140 % , n = 6) 、99180 %(RSD 为 1156 % , n = 6) 。结论 　该方法操作
简便、准确 ,重现性好 ,有利于提高六味地黄片制剂的质量控制水平。
关键词 :六味地黄片 ;马钱苷 ;丹皮酚 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320405203
　　在六味地黄方的所有剂型中 ,各剂型制备工艺
差异较大 ,如蜜丸为六味药材粉末加炼蜜制丸而成 ,
而片剂为山茱萸、茯苓、牡丹皮粉碎成细粉 ,熟地黄
等其余 3 味药材水煎煮、浓缩成膏 ,与上述细粉混
匀、制粒、压片成型。组成相同而剂型不同的六味地
黄方其化学成分的种类和量必定存在差别[1 ] ,而化
学成分是其发挥疗效的物质基础 ,其中马钱苷具有
增强机体免疫能力等生理活性 ,丹皮酚具有抗炎、镇
痛、解痉等药理作用[2 ] 。六味地黄片为其剂型之一 ,
中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第八
册六味地黄片项下采用紫外分光光度法测定丹皮
酚 ,该法专属性不强。故本实验采用 HPL C 法进行
六味地黄片中马钱苷和丹皮酚的同时测定 ,在现有
质量标准的基础上增加了主要活性成分马钱苷的检
测 ,实现了多个成分同时控制 ,进而完善六味地黄方
产品的质量控制体系 ,确保其疗效。
1 　仪器与试药
Waters 2695 高效液相色谱仪 (美国 Waters 公
司) ;Waters 2996 二极管阵列检测器 (美国 Waters
公司) ; Empower 色谱工作站 ; Millipore 超纯水仪
(Millipore 公司) ;A R5120 型电子分析天平 (奥豪斯
国际贸易 (上海)有限公司) ;AB104 —N 型电子分析
·504·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009207223　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :江西省自然科学基金资助项目 (0640168)
作者简介 :魏惠珍 (1965 —) ,女 ,江西南昌人 ,副主任药师 ,硕士生导师 ,长期从事中药质量控制研究。
Tel : (0791) 7119651 　Fax : (0791) 7119609 　E2mail :weihuizhen_101 @1261com3 通讯作者　饶　毅　Tel : (0791) 7119609 　E2mail : raoyi99 @1261com
天平 (梅特勒2托利多仪器 (上海 ) 有限公司 ) ;
AU W220D 型电子分析天平 (日本岛津公司) ; KQ —
250DB 型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限
公司) 。
甲醇 (上海振兴化工一厂 ,色谱纯) ,甲醇 (上海
振兴化工一厂 ,分析纯) ,Millipore 超纯水 ;马钱苷、
丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,批
号分别为 1116402200503、1107082200506 ;六味地黄
片 (吉林龙泰制药股份有限公司 ,批号 20060501 ;江
西济民可信药业有限公司 ,批号 070501、080101 ;规
格 :每 8 片相当于原药材 414 g) 。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :依利特 Hypersil ODS2 C18 色谱柱
(250 mm ×416 mm ,5μm) ;柱温 :室温 ;流动相 :甲
醇 (A)2水 (B) ,梯度洗脱程序为 :0～10 min ,10 %～
15 %A ;10～20 min ,15 %～40 %A :20～25 min ,40 %～
40 %A ;检测波长 :238 nm;体积流量 :1 mL/ min。对照
品、阴性样品及六味地黄片的色谱图见图 1。
12马钱苷　22丹皮酚
12loganin 　22paeonol
图 1 　混合对照品( A) 、缺山茱萸的阴性样品( B) 、缺牡丹皮的阴性样品( C)和六味地黄片( D) HPLC色谱图
Fig11 　HPLC Chromatograms of mixed reference substances ( A) , negative sample without Fructus Corni ( B) ,
negative sample without Cortex Moutan ( C) , and Liuwei Dihuang Pill ( D)
212 　对照品溶液的制备 :精密称取马钱苷、丹皮酚
对照品各适量 ,置 100 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 , 即得含马钱苷 24172 μg/ mL 、丹皮酚
15184μg/ mL 的混合对照品溶液。
213 　供试品溶液的制备 :取质量差异项下的本品
20 片 ,除去糖衣 ,研细 ,取粉末约 018 g ,精密称定 ,
置具塞锥形瓶中 ,精密加入 50 %甲醇 50 mL ,密塞 ,
称定质量 ,超声处理 (功率 100 W ,频率 40 k Hz) 15
min ,放冷 ,再称定质量 ,用 50 %甲醇补足减失的质
量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　阴性对照溶液的制备 :按处方比例分别配制缺
山茱萸、牡丹皮的阴性样品 ,按供试品溶液的制备项
下方法制备阴性样品溶液。
215 　线性关系的考察 :精密吸取混合对照品溶液
1、5、8、10、15、20μL 注入液相色谱仪 ,记录各色谱
峰峰面积 ,以峰面积为纵坐标 ,进样质量为横坐标 ,
绘制标准曲线 , 得两个成分的回归方程 :马钱苷Y =
20 408 X - 4 12719 , r = 01999 7 ,线性范围 :2147～
988180 μg ; 丹皮酚 Y = 26 772 X + 5 49811 , r =
01999 9。线性范围 :1158～633160μg。
216 　精密度试验 :取批号为 20060501 的同一供试
品溶液 10μL 进样 ,测定各成分的峰面积 ,重复 6
次 , 分别计算其 RSD ,结果马钱苷和丹皮酚的 RSD
分别为 1121 %、0176 %。
217 　稳定性试验 :取批号为 20060501 的样品 ,制备
供试品溶液 ,分别于 0、4、8、12、24 h 各取 10μL 进
样测定各成分的峰面积 ,分别计算 RSD ,结果马钱
苷的 RSD 为 2160 %、丹皮酚的 RSD 为 1158 % ,表
明供试品溶液在室温条件下 24 h 内稳定。
218 　重现性试验 :取批号为 20060501 的六味地黄
片粉末约 018 g ,共 6 份 ,精密称定 ,制备供试品溶
液 ,测定 ,结果马钱苷质量分数的 RSD 为 1180 %、
丹皮酚质量分数的 RSD 为 1146 %。
219 　加样回收率试验 :取批号 20060501 六味地黄
片粉末 6 份 ,每份约 014 g ,精密称定 ,分别精密加入
16119 μg/ mL 马钱苷对照品储备 液 和 30619
μg/ mL丹皮酚对照品储备液各 1 mL ,制备供试品溶
液 ,测定 ,计算回收率 ,结果马钱苷和丹皮酚的平均
回收 率 分 别 为 10012 %、991 8 % ; RSD 分 别 为
2140 %、1156 %。
2110 　样品测定 :取 3 个批号的六味地黄片粉末约
018 g ,精密称定 ,制备供试品溶液。分别精密吸取
混合对照品溶液、供试品溶液各 10μL 注入高效液
相色谱仪 , 采用外标法计算各成分平均质量分数 ,
结果见表 1。
表 1 　六味地黄片中马钱苷和丹皮酚的测定( n = 3)
Table 1 　Determination of loganin and paeonol
in Liuwei Dihuang Pills ( n = 3)
批　号 马钱苷/ (mg ·片 - 1) 丹皮酚/ (mg ·片 - 1)
20060501 0119 0135
070501 0119 0136
080101 0118 0136
3 　讨论
·604· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
311 　检测波长的选择 :经二极管阵列检测器分析 ,
丹皮酚分别在 238、274 nm 处有吸收峰 ,而马钱苷
仅在 238 nm 处有吸收峰 ,且在该波长下 ,两成分均
有较大吸收 ,因此 ,选择波长 238 nm 测定本品中马
钱苷、丹皮酚。
312 　流动相的选择 :《中国药典》2005 年版一部中
六味地黄丸有关马钱苷的测定以含有四氢呋喃为流
动相[ 3 ] ,而四氢呋喃对反相色谱系统的柱塞密封圈
有一定的腐蚀性 ,故本实验对马钱苷的色谱条件进
行了系统的研究 ,发现其在以甲醇2水为流动相中可
达到很好的分离 ,且可与丹皮酚在同一的流动相体
系中进行测定 ,最后实现了二者的同时测定。
313 　提取条件的筛选 :本实验考察了超声和回流两 种提取方法 ,结果表明两种提取方法相当 ,因超声提取相对操作简单、方便 ,故确定以超声处理为本实验的提取方式。马钱苷为水溶性成分 ,而丹皮酚为脂溶性成分 ,进一步试验 ,考察不同提取溶剂 (100 %、80 %、50 %、30 %甲醇) ,发现二者在 50 %甲醇的条件下提取率最高 ,所以选择 50 %甲醇作为提取溶剂。在此基础上 ,比较了不同的超声时间 (10、15、30、45 min) ,结果表明超声时间对二者的提取率影响不大 , 可选择超声 15 min 提取马钱苷和丹皮酚。参考文献 :[1 ] 　冯燕芹 ,王振中1 HPLC 测定六味地黄丸 (浓缩) 中熊果酸的含量[J ]1 中草药 ,1999 ,30 (3) :19121921[ 2 ] 　刘德军1 六味地黄丸现代研究与应用[ M ]1 北京 :人民卫生出版社 ,20021[ 3 ] 　中国药典[ S]1 一部120051
女贞子多糖除蛋白工艺的研究
万 　琴1 ,萧 　伟2 3 ① ,王振中2 ,尚 　强2
(11 南京中医药大学 ,江苏 南京 　210046 ; 21 江苏康缘药业股份有限公司 ,江苏 连云港 　222001)
摘 　要 :目的 　筛选女贞子多糖除蛋白的最佳工艺。方法 　以除蛋白率和多糖损失率为指标 ,比较了 3 种不同的
除蛋白方法 (Sevag 法、三氯乙酸法和三氯乙酸2Sevag 法)的效果 ,并用正交试验优选出最佳工艺。结果 　女贞子多
糖除蛋白的最佳工艺为以 1 倍量 10 %三氯乙酸溶液除蛋白 1 次 ,静置 2 h ,离心。结论 　优选出的除蛋白方法效果
较好 ,为女贞子多糖的制备工艺的进一步研究提供了参考。
关键词 :女贞子 ;多糖 ;除蛋白 ;正交试验
中图分类号 :R28412 ;R286101 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320407204
　　女贞子为木犀科常绿乔木女贞 L i g ust rum l u2
ci d um Ait 的干燥成熟果实 ,始载于《神农本草经》,
是一味常用中药材 ,具有扶正固本、补益肝肾、清热
明目的功效 ,临床主要用于强腰膝、乌须发 ,治疗阴
虚内热、头昏耳鸣等症。现代药理研究明表明[1～3 ] ,
女贞子多糖具有显著的免疫增强和抗氧化、抗衰老
作用。有化学研究表明 ,女贞子多糖 (polysaccha2
ride f rom L i g ust rum l uci d um Ait . , PLL A)主要由
鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖及岩藻糖 4 种糖组成[4 ] 。
近年来 ,对女贞子的研究主要集中在其脂溶性成分
如齐墩果酸、熊果酸等 ,而女贞子多糖的研究较少。
由于粗多糖的水提液在醇沉的过程中蛋白质会一起
沉淀下来 ,影响后续的分离纯化研究 ,因此确定除蛋
白质效率高且多糖损失率小的除蛋白方法是很关键
的环节[ 5 ] 。本实验以多糖损失率和蛋白质清除率为
指标 ,针对女贞子多糖选用了 Sevag 法、三氯乙酸法
( TCA 法) 、三氯乙酸2Sevag 法 3 种不同的除蛋白方
法 ,并采用正交试验法优选了三氯乙酸法除蛋白的工
艺 ,旨在筛选简单、可行的女贞子多糖除蛋白方法 ,为
其他植物多糖的除蛋白工艺研究提供一定的参考。
1 　实验材料
女贞子购于安徽亳州药材市场 ,经江苏康缘药
业股份有限公司吴舟主管药师鉴定。
UV2550 —PC 紫外可见分光光度计 ; TDL —
5 —A 型离心机 ;BP —211D 型电子天平 ;牛血清白
蛋白、考马斯亮蓝 G2250 (国药集团化学试剂有限公
司) ; D2无水葡萄糖 (中国药品生物制品检定所 ,批
号为 1108332200503) ;氯仿、正丁醇、三氯乙酸、苯
·704·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009207203　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :万　琴 (1985 —) ,女 ,湖北荆州人 ,硕士 ,南京中医药大学药剂学专业研究生 ,从事中药制剂的研究与开发。
Tel : (0518) 85521930 　E2mail :wanqingood @gmail1com3 通讯作者　萧　伟　E2mail :xw @kanion1com