全 文 ：深圳中西医结合杂志 21 0 4年 7月第 2 4卷第 6期 1 51
· 药学园地 ·
〔文章编号 〕 一 0 0 7一 0 8 9 3 (2 0一 4 )6 0一 01 1 5一 02
同时测定排石颗粒中迷迭香酸 、 当药普和马钱普
含量的 H P L C法的建立
胡军林 陈晓顺 周 伟
(湖北省食品药品监督检验研究院中药所 , 湖北 武汉 4 30 064 )
〔摘 要 〕 目的 : 建立同时测定排石颗粒中迷迭香酸、 当药答和马钱答含量 H P L C 法 。 方法 : 采用 A isl en t EP icl p se p lus
C 18 色谱柱 ( 4石 ~ 义 25 0 ~
,
5 脚 ) ; 以 0 . 1 % 磷酸溶液为流动相 A , 甲醇 : 乙睛 ( :2 1 ) 为流动相 B 进行梯度洗脱 ; 流
速 1 . 0 n 1L /m in , 检测波长 24 0 n m 。 结果 : 迷迭香酸、 当药答和马钱答分别在 住20 08 一 4 . 01 6雌 、 住06 7 一 1 . 34 雌 、 住04 8 18 -
住 963 6 雌 范围内呈现良好的线性关系 ( 犷 ) O月9 9 ) 。 平均回收率 ) 9 8 . 8 % , R S D 毛 2 . 1 % ( n = 6 ) 。 结论 : 该方法准确 、
简便 、 可靠 , 重复性好 , 可用 于本品的质量控制 。
〔关键词 〕 H P L c 法 ; 迷迭香酸 ; 当药答 ; 马钱答
〔中图分类号 〕 R 2 86 刀 〔文献标识码 〕 A
排石颗粒收载于 《中国药典》 2 0 10 年版一部 , 由连钱草 、
盐车前子 、 木通 、 徐长卿 、 石韦 、 忍冬藤 、 滑石 、 瞿麦 、 筒
麻子 、 甘草 10 味药组成 , 标准项 目收载有性状 、 熊果酸薄
层色谱鉴别及总黄酮含量测定 。 连钱草 、 木通 、 车前子均含
有熊果酸使鉴别无专属性 , 总黄酮的含量测定专属性差 , 缺
少对主药连钱草等药味的质量控制方法 L,」。 本文作者通过研
究 , 建立了同时测定连钱草和忍冬藤含量的专属性方法 。
主峰保留时间适中 , 理论板数较高 , 见表 1
笑O卜合叶鲁枷到旧户
0峭吮合N枷举印Lg峭乳枷你抓
1 材料与方法
1
.
1 仪器与试药
戴安 u LT IMAT E 30 0 O高效液相色谱仪 ; 色谱柱 ( A g il en t
E p e li p s e p lu s C 18 ; 4石 m m X 2 5 o m m , 5 卿 ) ; C Q 2 5 o 超
声波仪 ( 上海超声波仪器厂 ) ; 迷迭香酸 (批号 1 871 -
2 0 1 102 )
、 马钱普 (批号 1116 4 0一 2 0 06 0 4 ) 、 当药普 ( 批号
11 17 4 2
一 20 0 50 1) 等对照品均购自中国食品药品检定研究院 ,
甲醇 、 乙睛为色谱纯 ; 水为重蒸水 ; 其余试剂均为分析纯 。
7 0 批样品由全国评价性抽验取得 , 阴性样品自制 。
1
.
2 色谱条件的选择
1
.
2
.
1 检测波长的选择 分取迷迭香酸 、 当药普 、 马钱
普制成适宜的浓度 , 分别注入液相色谱仪 , 记录色谱图 。 用
二极管阵列管检测器进行了扫描 ( 19 0 一 8 0 0 n m ) , 结果当
药普和马钱普最大吸收分别为 24 6 n m 和 2 38 n m , 迷迭香酸
在 3 2 9 . 2 n m 有最大吸收 。 综合考虑 , 选择 24 0 n m 为检测波长 。
1
.
2 2 流动相的选择 因排石颗粒处方药味较多 , 成分
复杂 , 测定成分分离困难 , 经多次实验 , 以 0 . 1 % 磷酸溶液
为流动相 A , 甲醇 : 乙睛 (2 : l) 为流动相 B , 按表 1 进行梯
度洗脱 , 所得图谱 ( 图 l) 能达到较好的分离度 , 峰形较对称 ,
8 0
.
0
6 2
.
5
5 0
.
0
3 7
.
5
2 5
.
0
12
.
5
10
.
0
洲卜石含量 , 特征图谱 #4 m[ od l 样
W V L
:2 4 0 n m
0 刀 10刀 2 0刀 30刀 4 0刀 50 刀 60 刀 7 0刀 80 刀 9 0刀
图 1 供试品色谱图
表 1 流动相时间一配比表
时间 ( m in) 流动相 A (% ) 流动相 B ( % )
0
一 1 0 80 2 0
1 0
一 4 5 80 * 65 2 0* 35
4 5
一 6 0 6 5弓 4 5 35* 55
6 0 一 65 4 5* 8 0 55* 2 0
6 5 一 75 80 2 0
1
.
3 提取方法的考察
1
.
3
.
1 提取溶剂的考察 取本品 (广东益和堂药业股份
公司 , 批号 K l〕00 2) 4 份 , 每份约 3 9 , 研细 , 精密称定 , 分
别精密加入 50 % 乙醇 , 70 % 乙醇 , 乙醇和 甲醇各 25 n 1L ,
超声时间为 30 im n , 其余按正文含量测定项下供试品溶液的
制备方法操作 , 结果表明 70 % 乙醇提取效率最高 。
1
.
3
.
2 超声时间的考察 取本品 (广东益和堂药业股份
公司 , 批号 K D o o 2) 4 份 , 每份约 3 9 , 研细 , 精密称定 ,
精密加入 70 % 乙醇各 25 n 1L , 超声处理时间为 10 m in 、 20
〔收稿 日期 〕 20 14 一 0 4 一 11
1 5 2 Sh e n z h e n J o u r n a l o f I n t e g r a t e d T r a d i t i o n a l C h l d W e s t e r l M e d J u l v 2 0 14 V o l
.
2 4
.
N o
.
6
mni
、
03 mi
n 、
40 mi
n , 按上述色谱条件操作 , 结果超声处
理 30 im n 提取完全 。
1
.
3
.
3 溶液的制备 ①供试品溶液的制备 : 取装量差异
项下的本品 , 研细 , 取约 3 9 (无糖型取 1 9 ) , 精密称定 ,
精密加入 70 % 乙醇 25 n 1 L , 称定重量 , 超声处理 30 m in ,
放冷 , 再称定重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 ,
取续滤液 , 即得 ; ②混合对照品溶液的制备 : 精密称取当
药普 、 马钱普和迷迭香酸对照品适量 , 加甲醇制成每 I n 1 L
分别含 25 林g 的溶液 , 即得 ; ③阴性对照溶液的制备 : 取缺
连钱草的阴性对照样品 , 照供试品溶液制备方法制得缺连
钱草阴性对照溶液 。 另取缺忍冬藤阴性对照样品 , 照供试品
溶液制备方法制得缺忍冬藤阴性对照溶液 。
1
.
4 方法学验证
1
.
4
.
1 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液 , 供试品
溶液和阴性对照溶液各 10 匹 , 注入液相色谱仪 , 测定 , 结
果阴性对照无干扰 ( 图 1 、 2 、 3 、 4) 。
排石含量 , 特征图谱
m A U
U V V IS
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ` 刁二~
W V L
: 24 0 n m
,
迷迭香酸 一 49 7 0
马钱普 一 29 4 92
当药普 一 27 62 5
n n气邝、2J.
10 刀 20刀 30刀 4 0刀 5 0刀 60 刀 7 0刀 8 0刀 90刀
当药普 、 马钱普和迷迭香酸混合对照品色谱图
ù一一勺ū一n,ō
.月,ùn耳人41n
排石含量 , 特征图谱 # 3 3 「肋 id 忍冬藤阴
一m A U
U V V I S
W V L
:
24 0
n m 一
普对照品 , 配制成一定梯度的溶液 , 取一定体积进样 , 记录
色谱图 , 以测得峰面积 A 对进样量进行线性回归 , 测得 3 种
成分分别在回归方程 Y = 47 7 69 -x 1 . 147 。 结果表明 , 迷迭香
酸的进样量在 0 . 20 08 一 4刀 16 雌 、 o 刀67 一 1 . 34 雌 、 0 .以 8 18 一 。 , 6 36
雌 范围内与峰面积呈现良好的线性关系 , R ) 位 99 9 。
1
.
4
.
3 重复性试验 取样品 6 份 (广东益和堂药业股份公
司 , 批号 K Lx UZ ) , 照前述方祛操作 , 测定含量 。 结果 3 种成分
测定结果的RS D 分别为 : 0 7 8% , 2 0 % , Q印% , 重复性良好 。
1
.
4 4 回收率试验 取 己知含量的样品 (广东益和堂
药业股份公司 , 批号 K D OO2) 6 份 , 分别加入一定浓度 的
当药普 、 马钱普及迷迭香酸 , 其余按标准正文含量测定方
法操作 , 计算 , 3 种成分平均回收率分别为 10 1 . 39 % ( R S D
0 4 6 %
, n = 6 )
、
9 8
.
8 3 % ( R S D 2
.
1 %
, n = 6 )
、
1 0 0石 % ( R S D
1
.
5 %
, n = 6 )
。 方法回收率良好 。
1
.
4 5 稳定性试验 取样品 (广东益和堂药业股份公司
批号 K l〕0 2) , 照标准正文方法制成供试品溶液 , 在 O 一 24 h
内取不同的时间点测定 , 3 种成分测定结果 R S D 值毛 2 . 7 % ,
供试品溶液在 2 4 h 内稳定 。
L 4石 中间精密度 分别以不同日期 、 不同人员、 不同
仪器对方法的精密度进行考察 , 结果 R S D 均 毛 2 . 0 % , 方法
精密度 良好 。
1
.
4 7 耐用性实验 取供试品 3 9 (广东益和堂药业股
份公司 批号 K D OOZ ) , 按供试品制备方法分别制备 3 份供试
品溶液 , 选择色谱柱 l ( A g i le n t x D B 一 e l s , 4石 x 25 o m m ,
5 卿 ) 、 柱 2 ( A g i le n t S B 一 C 18 4石 X 2 5 O m m , 5 卿 ) 、 柱 3
( 依利特掩 o m a s i l C 18 , 25 O x 4石O m
,
10 卿 ) 分别进行
考察 , 并计算当药普 、 马钱普和迷迭香酸含量 , 结果的 R S D
均毛 2石 % , 耐用性 良好 。
2 样品检侧结果
对 70 批样品 , 按上述方法测定当药普 、 马钱普和迷迭
香酸的含量 。 结果每袋含当药普和马钱普总量为 住57 一 5 . 49
m g
, 平均值为 2 . 13 m g /袋 迷迭香酸含量的范围为 住96 一 9 .犯
m g / 袋 , 平均值为 4 . 31 m g /袋 。
.`
.
n n气邝、2.J
封熟
3
一
2 0 62 5
内一 2 2 2 67
n n气.J
10刀 10刀 2 0刀 3 0刀 4 0刀
图 3 缺忍冬藤阴性样品色谱图
排石含量 , 特征 图谱 朋 「肋 id 连钱草阴 u v vl s
3 讨 论
现行标准法无专属性 。 标准中熊果酸薄层鉴别因处方中连
钱草、 木通 、 车前子均含有熊果酸而相互干扰 , 同时 , 3 味药
中同时含有熊果酸和齐墩果酸 , 二者无法分离 L习 ; 总黄酮含量
测定所测结果为有机酸类和黄酮类成分之和 , 经试验发现有机
酸类含量高 , 黄酮类含量低 , 含量测定的专属性差 L3] 。 笔者所
述方法解决原标准专属性差的问题 , 可用于本品质量控制 。
0刀 10刀 20刀 30刀 4 0刀 5 0刀 60 刀 7 0刀
图 4 缺连钱草阴性样品色谱图
1
.
4 2 线性关系考察 分别取迷迭香酸 、
80刀 9 0刀
当药普、 马钱
〔参考文献 〕
( 1 ) 朱玲英 , 钱大玮 , 段金廉 , 等 . 江苏连钱草高效液相色谱指
纹图谱研究 ( J ) . 时珍国医国药 , 2 0 0 9 ,2 0 ( l ) : 1 1 3一 1 1 5
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的迷迭香酸的含量 ( J ) . 贵州大学学报 , 2 008 , 2 5( :2) 16 9 一 17 1
( 3 ) 陈军 , 马双成 . 忍冬藤中马钱素和 当药昔提取分离及结构
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