全 文 ：RP-HPLC法测定小果博落回中 7种异喹啉类生物碱
罗忠勇1, 2 ,曾建国2* , 黄
敬1, 2 , 谈满良2*
( 1
湖南中医药大学药学院, 湖南
长沙 410007; 2
湖南省中药提取工程研究中心,湖南
长沙 410331)
摘
要:目的
建立同时测定小果博落回中 7种生物碱的高效液相色谱法。方法
采用高效液相色谱法, 色谱柱
为Water s XBr idge C18柱( 250 mm
4
6 mm, 5
m) , 流动相: ( A)乙腈, ( B) 0
5%三乙胺缓冲液(磷酸调 pH= 2
5) ,
梯度洗脱,体积流量 0
8 mL/ min,进样量 5
L ,柱温 35
,检测波长 284 nm。结果
7 种生物碱均能达到良好的
分离,原阿片碱、别隐品碱、血根碱、小檗碱、白屈菜红碱、二氢白屈菜红碱、二氢血根碱的线性范围分别为 0
11~
22
0、0
424~ 84
7、0
433~ 86
6、0
380~ 75
9、0
498~ 99
6、0
523~ 104
5、0
508~ 101
5
g/ mL; 平均回收率分
别为 97
8%、97
0%、98
9%、102
2%、98
6% 、101
8%、102
9%。结论
本方法操作简便、准确、灵敏度高, 为该
类药材资源的质量评价提供了一定的科学依据。
关键词:反相高效液相色谱法; 小果博落回;异喹啉类生物碱
中图分类号: R282
6


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 07-1188-03


小果博落回 Macleaya micr ocar pa ( M axim
)
Fedde 属于罂粟科博落回属植物,主要分布于陕西、
河南、甘肃、湖北及四川等地。作为一种民间中药,
具有散瘀、祛风、解毒、止痛、杀虫等功效,主要治疗
痈疮疔肿、痔疮、湿疹、顽癣、虫蛇咬伤等症。小果博
落回主要含有血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱、隐品
碱、别隐品碱和博落回碱等[ 1] 异喹啉类生物碱。现
代药理研究发现异喹啉类生物碱具有强烈的抗
菌[ 2]、抗炎[ 3]、抗寄生虫 [ 4]、杀灭钉螺 [ 5]、杀灭血吸
虫[ 6]、改善肝功能 [ 7、8]、抗肿瘤[ 9] 和抗心律失常[ 10] 等
作用。近年来, 曾建国等[ 11]研究了博落回果实中血
根碱和白屈菜红碱在不同生长期量的变化; 安采
贤[ 12]等对小果博落回的茎、叶、全株中血根碱和白
屈菜红碱进行了测定; Abizov 等[ 13] 研究了俄罗斯产
小果博落回中血根碱和白屈菜红碱总生物碱在苗
期、花期和果期中的量变化情况。上述只局限对小
果博落回中的主要生物碱进行测定,并未同时检测
某些微量生物碱。本实验旨在建立一种快速、简便
的反相高效液相色谱方法, 同时测定小果博落回中
7种异喹啉类生物碱原阿片碱( 1)、别隐品碱( 2)、血
根碱( 3)、小檗碱( 4)、白屈菜红碱( 5)、二氢白屈菜红
碱( 6)、二氢血根碱( 7)的量,为小果博落回药材资源
的质量评价提供了一定的科学依据。
1
仪器与试药
Waters 1525 高效液相色谱仪 ( 美国, 包括
Water s 2998 PAD 检测器, Waters 2707 自动进样
器) ; 分析天平 (梅特勒-托利多仪器有限公司) ;
KQ
250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司)。
甲醇、乙腈为色谱纯试剂, 水为二次蒸馏水, 其
他试剂均为分析纯。血根碱 ( Sigma 公司, 批号
84480, 质量分数 98% ) , 别隐品碱( Sigma 公司, 批
号 s450987,质量分数 98% ) ,原阿片碱(中国药品生
物制品检定所, 批号 110853-200402, 质量分数
98%) , 白屈菜红碱(中国药品生物制品检定所, 批号
111718-200501, 质量分数 98% ) , 小檗碱、二氢白屈
菜红碱、二氢血根碱 3 种对照品 (自制, 质量分数
98%,面积归一化法)。小果博落回样品于 2009年
6月采自河南洛阳嵩县。植物由湖南中医药大学药
学院药用植物学周日宝教授鉴定为罂粟科博落回属
植物小果博落回 Macleaya m icr ocar pa ( Max im
)
Fedde。
2
方法与结果
2
1
色谱条件:色谱柱为Water s XBridge C18 ( 250
mm
4
6 mm, 5
m) ; 流动相: ( A)乙腈, ( B) 0
5%
三乙胺缓冲液(磷酸调 pH = 2
5) , 梯度洗脱( 0~ 5
m in, 30%A; 5~ 20 min, 30%~ 54%A ; 20~ 23 min,
54%~ 70% A; 23~ 40 m in, 70% ~ 80% A; 40~ 45
m in, 80%~ 30% A; 45~ 50 min, 30% A) , 体积流量
0
8 mL/ min, 进样量 5
L, 柱温 35
, 检测波长

1188
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 12-16





















基金项目:国家科技部国际合作与交流专项( 2009DFA31270) ;科技部创新基金( 07C26224300717)作者简介:罗忠勇( 1983
) ,男,湖南邵阳人,在读硕士研究生,主要从事天然药物活性成分研究及新药开发。
T el: 15116482649
E-mail: zh on gy on gluo@ hotmail
com
* 通讯作者
曾建国
E- mail : ginkgo@ w orld- way
net
284 nm。在此条件下 7 种成分均能达到良好分离,
具有较好的分离度, 理论塔板数均大于 10 000,拖尾
因子在 1
5~ 2
0。
2
2
对照品溶液的配制:分别精密称取生物碱 1~
7对照品 1
12、4
29、4
39、3
88、5
10、5
31、5
20
mg 置同一 10 mL 量瓶中,加少量甲醇超声溶解, 冷
却后用甲醇定溶至 10 mL,摇匀, 即得。
2
3
供试品溶液的制备:取小果博落回待测样品约
1
0 g,精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加入 50 mL 甲
醇-1%盐酸( 50
50)超声提取 60 min, 滤过,取滤液
用 0
45
m 微孔滤膜滤过,即得。
2
4
线性关系的考察: 分别精密量取对照品溶液
1、10、50、100、200
L 分别置于 5 个 1 mL 量瓶中,
用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 分别进样 5
L。按照

2
1
项下的色谱条件测定, 以峰面积( Y)对进样浓
度( X )进行回归处理, 回归方程、线性范围、相关系
数见表 1。
表 1
7 种生物碱的回归曲线方程、线性范围和相关系数
Table 1
Calibration curve, linear range, and linearity
parameters of seven isoquinolines alkaloids
生物碱 回归曲线方程 线性范围/
(
g
mL- 1 ) r
原阿片碱


Y= 9
05
103 X- 2
62
103 0
11~ 22
0 0
999 9
别隐品碱


Y= 4
92
103 X+ 9
09
102 0
42~ 84
7 0
999 6
血根碱



Y= 2
49
104 X- 6
05
103 0
43~ 86
6 0
999 9
小檗碱



Y= 1
64
104 X+ 3
56
103 0
38~ 75
9 0
999 8
白屈菜红碱

Y= 2
82
104 X- 1
76
104 0
50~ 99
6 0
999 7
二氢白屈菜红碱 Y= 2
21
104 X- 3
20
104 0
52~ 104
5 0
999 8
二氢血根碱

Y= 4
01
104 X- 2
32
104 0
51~ 101
5 0
999 8
2
5
精密度试验:精密吸取对照品溶液, 连续进样
6次, 每次进样量均为 5
L, 结果生物碱 1~ 7峰面
积的 RSD分别为 1
48%、1
21%、1
36%、1
65%、
1
46%、1
78、1
23%。
2
6
重现性试验:取同一批小果博落回样品 6份,
每份约 1
0 g ,按
2
3
项下样品溶液的制备方法制
备样品溶液, 并按照
2
1
项下的色谱条件进行测
定,计算,结果样品中生物碱 1~ 7质量分数的 RSD
分别为 1
12%、1
34%、1
89%、1
32%、1
43%、
1
28%、1
36%。
2
7
稳定性试验:取小果博落回同一供试品溶液,
分别于 0、2、4、8、10、12 h,按照
2
1
项下的色谱条
件测定, 结果生物碱 1~ 7 峰面积的 RSD 分别为
0
96%、1
24%、1
78%、1
65%、1
97%、1
01%、
1
08% ,表明溶液在 12 h内基本稳定。
2
8
加样回收试验:取已测定的样品粗粉,采用甲
醇-1%盐酸( 50
50)为提取溶液考察 7种生物碱的
回收率。3个浓度水平的 7种生物碱混合对照品溶
液加入到未处理的小果博落回样品中,按照
2
3
项
下供试品溶液制备方法进行提取,并进行分析测定。
结果生物碱 1 ~ 7 平均回收率分别为 97
8%、
97
0%、 98
9%、 102
2%、 98
6%、 101
8%、
102
9% ; RSD 分别为 2
6%、1
8%、3
0%、2
1%、
1
6%、1
9%、2
5%。
2
9
样品测定:按照
2
3
项下制备供试品溶液,分
别进样 5
L,测定,记录色谱图,计算供试品溶液中
生物碱 1~ 7的量,结果见表 2和图 1。
表 2
小果博落回不同部位中 7 种生物碱测定结果( x
s, n= 3)
Table 2
Determination of seven isoquinolines alkaloids f rom diff erent parts of M
microcarpa ( x
s, n= 3)
部位 质量分数/ ( mg
g- 1)原阿片碱 别隐品碱 血根碱 小檗碱 白屈菜红碱 二氢白屈菜红碱 二氢血根碱
根
1
76
0
03 4
94
0
02 2
19
0
04 0
02
0
01 1
41
0
01 0
02
0
01 0
06
0
01
茎
0
71
0
01 0
42
0
02 1
76
0
03 0
01
0
01 0
92
0
02 0
04
0
01 0
11
0
03
叶
0
54
0
03 2
99
0
02 11
33
0
01
10
18
0
03 0
03
0
01 0
34
0
02
果实 0
92
0
01 32
10
0
08 0
99
0
01
1
84
0
02






 !低于检测限




 !below test ing limit
3
讨论
3
1
本实验利用Waters 2998 PAD检测器对单个
生物碱进行了三维图谱分析, 原阿片碱在 288 nm、
别隐品碱在 284 nm、二氢血根碱在 285 nm、二氢白
屈菜红碱在 281
5 nm、血根碱在 275 nm、白屈菜红
碱在 270 nm、小檗碱在 264 nm 和 328 nm 处有最大
吸收;同时对 7种混合对照品溶液进行三维图谱分
析,发现在 284 nm 波长条件下7种生物碱同时存在
较大吸收, 且各生物碱分离效果较好, 故选择 284
nm 作为最佳检测波长。
3
2
本实验分别考察了甲醇-水、甲醇-磷酸、乙腈-
水、乙腈-磷酸等流动相,发现在甲醇条件下,原阿片
碱和别隐品碱很难分离,在乙腈条件下,各生物碱均
能分离,但血根碱、小檗碱和白屈菜红碱拖尾较严
重,故选择在乙腈-磷酸条件加入 0
5%的三乙胺缓
冲液,抑制生物碱色谱峰拖尾,同时采用梯度洗脱, 7

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
1-原阿片碱
2-别隐品碱
3-血根碱
4-小檗碱
5-白屈菜红碱
6-二氢白屈菜红碱
7-二氢血根碱
1-p rotopin e
2-allocryptopine
3-sanguinarine
4-b erberine
5-chelerythrin e
6- dihydroch elerythrine
7-dih ydrosan guinarine
图 1
对照品( A)及小果博落回叶(B)、果实( C)、茎( D)、
根( E)的 HPLC色谱图
Fig
1
HPLC Chromatograms of reference substance
( A) , leaves ( B) , fruits ( C) , stems (D) ,
and roots ( E) of M
microcarpa
种生物碱分离效果较理想。
3
3
本实验分别考察了甲醇、乙醇、1%盐酸、甲醇-
1%盐酸等不同提取溶剂, 超声、回流等不同提取方
式,并进行了提取时间为 30、45、60、75 min, 提取次
数为 1、2 次的考察, 结果表明, 以甲醇-1% 盐酸
( 50
50)为溶剂, 超声提取 60 min, 提取 1 次即可
将总生物碱提取完全, 因此选择该提取方法。
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气相色谱法测定山蜡梅叶中桉油精和芳樟醇
魏惠珍1 , 饶
毅1* ,陈燕军2 ,夏川川2 ,冯育林1 ,张小娟1 ,杨世林1
( 1
中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌
330006; 2
江西中医学院,江西 南昌
330004)
摘
要:目的
建立气相色谱法测定山蜡梅叶中桉油精和芳樟醇的方法。方法
气相色谱法, DB-WAX 石英毛细
管柱( 30. 0 m
250
m, 0
25
m) , FID检测器 ,进样口温度: 230
,检测口温度 250
, 体积流量1 mL/ min,分流:
20
1,程序升温: 起始温度 60
, 保持 5 m in, 以 25
/ min 升至 200
, 保持 2 min。结果
桉油精在 0
015 7~
0
393 6 mg / mL 与峰面积比值(桉油精/环己酮)呈良好的线性关系,回归方程为 Y= 13
659 X + 0
066 5, r= 0
999 8,

1190
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 12-11





















基金项目:国家科技支撑计划资助项目( 2006BAI06A18- 09)作者简介:魏惠珍( 1965
) ,女,江西南昌人,主要从事药物质量控制研究工作。
* 通讯作者
饶
毅
T el: ( 0791) 7119609
E- mai l: raoyi99@ 126
com