全 文 ：药理与临床
杠柳苷对 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制研究
张 静1 , 杨 光2 ,单保恩3 ,张 超3 ,赵瑞撵3 ,刘江惠3*
( 1 河北医科大学第四医院 康复科, 河北 石家庄 050011; 2 河北医科大学第四医院 放射科,河北 石家庄 050011;
3 河北医科大学第四医院 科研中心, 河北 石家庄 050011)
摘 要:目的 研究香加皮中杠柳苷体内抗肿瘤作用, 探讨其可能作用机制。方法 将小鼠肝癌 H22细胞经体外
培养并于 BALB/ c 小鼠腹腔内传代后,无菌接种于小鼠皮下, 建立荷瘤小鼠模型。采取不同剂量杠柳苷 ( 0 25、
0 50、1 00 mg/ kg ) ip 给药,每天 1 次,连续 15 d,观察荷瘤小鼠肿瘤生长情况, 测定抑瘤率, 应用流式细胞术检测
杠柳苷对肿瘤细胞周期与凋亡的影响;采用透射电镜观察荷瘤小鼠肿瘤细胞超微结构的变化。结果 杠柳苷对小
鼠 H 22皮下移植瘤具有显著的抑制作用,小鼠成瘤时间明显晚于模型组, 肿瘤生长缓慢,低、中、高 3 个剂量组抑瘤
率分别为 60 28%、68 09%、74 74%。流式细胞术分析结果显示, 不同剂量杠柳苷处理小鼠移植瘤细胞后, 处于
G0 / G 1期细胞明显增多, S 期和 G2 / M 期细胞显著减少,与模型组相比差异显著 ( P< 0 05) , 其中 1 00 mg/ kg 杠柳
苷组 G 0 / G1期细胞由对照组的 ( 46 90 5 80) % 升高至 ( 83 80 2 52) % , S 期和 G2 / M 期细胞分别由对照组的
( 38 30 5 11) %、( 14 80 0 70)% 下降至 ( 5 33 2 73) %、( 10 87 0 25)% ;而且杠柳苷各组小鼠肿瘤细胞的
凋亡率均明显增加,其中 1 00 mg/ kg 组凋亡率高达 ( 32 35 1 75)% ,并可见典型的凋亡峰。透射电镜观察可见, 杠
柳苷各组小鼠肿瘤组织中出现大量典型的凋亡细胞,而对照组瘤组织内多为富含线粒体与内质网的代谢旺盛的肿瘤
细胞。结论 杠柳苷具有很强的体内抗肿瘤作用,其作用机制可能与阻滞细胞周期和诱导肿瘤细胞凋亡有关。
关键词:香加皮; 杠柳苷; 抗肿瘤; 细胞周期; 细胞凋亡
中图分类号: R730 5; R285 5 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 08130705
Antitumor effect of periplocin from Periplocae Cortex on H22 tumorbearing mice
and its mechanism
ZHANG Jing
1
, YANG Guang
2
, SHAN Baoen3 , ZHANG Chao3 , ZHA O Ruinian3 , L IU Jianghui3
( 1 Depa rtment of Rehabilitation, the Fourt h H ospital of H ebei Medical Univer sity, Shijiazhuang 050011, China;
2. Depar tment o f Radiolog y, the Fourth H ospital of H ebei M edical University, Shijiazhuang 050011, China;
3. Research Center , the Four th Hospita l of H ebei Medica l Univer sity, Shijiazhuang 050011, China)
Abstract: Objective T o study the ant itumor effect of per iplocin f rom P er ip locae Cortex and explore
it s possible mechanism in vivo . Methods Murine hepato carcinoma H 22 cells w ere cultured in vi tr o, and
then passaged in abdom inal cavity of BALB/ c m ice. H22 Cells w ere co llected and sc injected into each
BALB/ c mice to establish animal model o f tumorbearing mice. Dif ferent do ses o f periplo cin ( 0. 25, 0. 50,
and 1. 00 mg/ kg) w ere ip adm inistered to the tumo rbear ing mice once a day for cont inuous 15 d. The ki
netics o f tumor fo rmat ion and tumo r gr ow th w ere measured, tumo r gr ow th inhibit ion r ate ( IR) w as calcu
lated. The tumor samples w ere taken, the ef fects of per iplocin on cell cycle and cell apoptosis w ere deter
mined by f low cytometry , and the ult rast ructur al changes o f tumo r cells w ere observed by t ransmission
electron micr oscopy in tumorbearing BALB/ c mice af ter t reated w ith periplocin. Results Marked inhibi
t ion o f periplocin on the hepatocarcinoma H 22 tr ansplantat ion tumor w as observed in BALB/ c mice. The
tumo r format ion w as signif icant ly retar ded and tumor grow th w as inhibited in periplocint reated g roups
compared w ith those in negat ive contro l m ice. T he inhibitory r ates w ere 60. 28%, 68. 09%, and 74. 47%
in three g roups t reated w ith low , m iddle, and high dosages o f periplo cin, respect ively. The proport ion of
tumo r cells in the G 0 / G 1 phase w as increased markedly, of w hich S and G2 / M phase cells decreased, after
tr eatment w ith dif ferent do ses of periplocin, compared to contro l group, the dif ference w as significant
( P< 0 05) , in 1. 00 mg/ kg group, G0 / G1 phase cells increased f rom ( 46. 90 5. 80) % to ( 83. 80
2. 52) %, S and G2 / M phase cel ls w ere decreased from ( 38. 30 5. 11) % and ( 14. 80 0. 70) % to ( 5. 33
1307中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091118 基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30772752)作者简介:张 静( 1972 ! ) ,女,河北正定人,博士,副主任医师,副教授,主要从事抗肿瘤基础与临床研究及抗肿瘤中药研发工作,已发表论文 20余篇,著作 5部,获省厅级科技奖 3项。T el: 13582340016 Email: zjing1201@ yahoo. com. cn
2. 73) % and ( 10. 87 0. 25) %. The apoptosis rate o f tumor cells increased signif icant ly in three periplocin
groups ( P< 0 01 v s control g roup) , the highest rate reached ( 32. 35 1. 75) % in 1. 00 mg / kg g roup. Fur
thermor e, typical subdiploid peaks w ere also detected in per iplocintr eated g roups. Observing the ult ra
st ructure, many typical apoptosis cells w ere displayed in per iplocintr eated groups, w hereas, many meta
bo lism vig orous tumor cells w ith more mitochondrion and endoplasm ic r et iculum were seen in contro l
group. Conclusion Periplocin has signif icant inhibit ion on tumor grow th in v iv o, w hich is probably relat
ed to blocking cell cy cle and induction of apoptosis.
Key words: Per ip locae Cor tex ; periplo cin; ant itumor; cel l cycle; apoptosis
香加皮为萝藦科植物杠柳 P er ip loca sep ium
Bunge 的干燥根皮,含有强心苷类、萜类等多种化学
成分,具有抗炎、强心、促进神经生长、兴奋神经系
统、抗肿瘤等作用[ 13]。杠柳苷是从香加皮中分离提
取的化合物。既往研究发现, 香加皮醋酸乙酯提取
物及杠柳苷均有明显的体外抗肿瘤作用, 且其作用
机制是多环节、多途径的 [ 45]。本研究采用 H 22皮下
移植瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验, 探讨杠柳苷
的体内抗肿瘤作用及其可能的作用机制, 为香加皮
的进一步开发利用提供理论依据。
1 材料
1 1 细胞株与实验动物: 腹水型小鼠肝癌细胞株
H22由河北医科大学第四医院科研中心保存,清洁级
纯系 BALB/ c小鼠,体质量 18~ 22 g, 6~ 8 周龄, 雌
雄各半,购自河北省实验动物中心, 实验动物使用许
可证号: SCXK (冀) 20031003,实验室常规饲养。
1 2 药物与试剂:杠柳苷由华北制药集团新药研究
开发中心分离纯化 [ 6]。RPMI 1640 培养基为美国
Gibco 公司产品,胎牛血清 ( FCS) 为杭州四季青生
物工程公司产品, 胰蛋白酶、噻唑蓝 ( M TT )、碘化
丙啶 ( P I) 为美国 Sigma 公司产品, 顺铂为齐鲁制
药有限公司产品。
13 主要仪器: TC2323 CO2恒温培养箱 (美国 Shel
don 公司) , LH50A 倒置相差显微镜 (日本 Olympus
公司) , HT2 酶标仪 (奥地利 Anthos 公司) , Epics !
XL∀流式细胞仪 (美国 Beckman Coulter 公司) , H !
7500 透射电镜 (日本日立公司)。
2 方法
2 1 小鼠肝癌 H 22细胞的培养及传代: 将腹水型小
鼠肝癌 H22细胞, 于 37 # 、5% CO 2培养箱, 用含
10% FCS 的 RPM I 1640 完全培养基悬浮培养。取
最佳生长状态的小鼠肝癌 H22细胞, 浓度调为 5 ∃
10
6
/ mL,以 0 2 mL/只 ( 1 ∃ 106个细胞/只) 无菌注
入 BALB/ c 小鼠腹腔进行接种传代, 于接种 7 d 左
右,小鼠腹部膨隆, 出现血性腹水,可用于小鼠皮下
移植瘤的接种。
2 2 小鼠肝癌皮下移植瘤模型的建立 [ 7] :于无菌条
件下抽取 H 22腹水瘤小鼠的腹水,以 DHank%s 液
稀释后, 1 000 r/ m in 离心 5 min,洗涤细胞 2次,调
整 H 22细胞浓度为 5 ∃ 106 / mL, 于 BALB/ c 小鼠右
股部行皮下无菌接种, 接种量为每只 0 2 mL ( 1 ∃
106个细胞/只)。
2 3 分组及处理: 小鼠皮下接种 H 22细胞 24 h 后
称体质量, 随机分为 6 组, 每组 15 只, 分别为模型
组,顺铂阳性对照组 ( 2 00 mg / kg) , 0 5% 乙醇溶
剂对照组, 杠柳苷低、中、高剂量 ( 0 25、0 50、1 00
mg/ kg) 组, 各组 ip 给药,每天 1次, 连续给药观察
15 d。
2 4 对荷瘤小鼠肿瘤体积和质量的影响: 每日观察
荷瘤小鼠的生长情况, 并记录各组小鼠的精神状态、
一般活动、皮毛、饮食及粪便等情况。观察期间隔日
称体质量,并用游标卡尺测量皮下移植瘤体的长径
与宽径, 计算肿瘤体积 [ 8] (肿瘤体积= 长径 ∃ 宽
径2 ∃ 1/ 2) 绘制肿瘤生长曲线。于末次给药后次日
处死小鼠,称体质量后,剥取瘤组织, 称质量,计算抑
瘤率[抑瘤率= (模型组瘤质量- 给药组瘤质量) /模
型组瘤质量∃ 100%]。
2 5 流式细胞仪检测荷瘤小鼠肿瘤细胞的周期分
布和凋亡:取溶剂对照组和杠柳苷各剂量组小鼠新
鲜肿瘤组织,制备肿瘤单细胞悬液, 以预冷的 70%
乙醇固定,加入 PI 染色液, 4 # 避光反应 30 min,
应用流式细胞仪进行单参数检测 (波长 488 nm) ,
用 Expo 32 ADC 和 Muticycle AV 对细胞周期和细
胞凋亡进行分析, 以百分率记录二倍体峰细胞数及
细胞周期各时相比例。
2 6 荷瘤小鼠肿瘤组织超微结构观察:取溶剂对照
组和杠柳苷各剂量组荷瘤小鼠的皮下移植瘤组织,
剪成约 1 mm ∃ 1 mm ∃ 1 mm 小块,浸入预冷的 4%
戊二醛中固定过夜,再用 1% 锇酸后固定 3 h,经乙
醇丙酮梯度脱水, 环氧树脂渗透包埋, 制成超薄切
片 ( 60 nm) , 铀铅双重染色后, 采用透射电镜观察、
照像。
1308 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
27 统计学分析: 应用 SPSS 11 5 软件对所有数据
进行统计学处理,结果以 x s 表示,两组间均数比较
用 t 检验,多组间均数比较采用单因素方差分析。
3 结果
3 1 对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响:于皮下接种瘤细
胞后第 4天,模型组和溶剂对照组小鼠可触摸到颗
粒状肿瘤, 生长迅速,于实验后期由于肿瘤过大而活
动受限,个别出现瘤块坏死穿破皮肤现象。从荷瘤
小鼠的肿瘤生长曲线 (图 1) 可以看出, 杠柳苷各剂
量组和顺铂组小鼠皮下瘤块出现的时间普遍晚于模
型组和溶剂对照组, 于接种后第 6天或以后才出现
肿瘤,且生长速度也较模型组明显缓慢, 部分小鼠经
连续给予杠柳苷后, 瘤体较原来逐渐缩小。杠柳苷
各剂量组小鼠一般状态良好, 外观、毛色、活动及进
食、饮水、粪便等均无明显变化, 体质量有所增加。
而顺铂组小鼠普遍表现为体质量下降、精神不振、活
动减少、脱毛等现象,并有 3只小鼠死亡。
图 1 杠柳苷对 H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
Fig. 1 Effects of periplocin on tumor growth
in H22 tumorbearing mice
3 2 对荷瘤小鼠的抑瘤作用: 杠柳苷 ( 0 25、0 50、
1 00 mg / kg) 各组抑瘤率均大于体内抑瘤试验实体
瘤疗效判定标准的 40%, 其中 1 00 mg/ kg 组抑瘤
率高达 74 47%, 杠柳苷各剂量组与模型组和乙醇
溶剂对照组相比,差异显著 ( P< 0 05) , 表明杠柳苷
对小鼠 H 22移植瘤有明显抑瘤效应。但杠柳苷各组
抑瘤率低于顺铂组 ( 2 00 mg/ kg , 84. 04%, P <
0 05) ,考虑可能与杠柳苷用药剂量较小有关。而乙
醇溶剂对照组与模型组相比, 差异无显著性 ( P >
0 05) ,说明以 0 5% 乙醇为杠柳苷溶剂对本实验
结果无影响,结果见表 1。
3 3 对荷瘤小鼠肿瘤细胞周期的影响: 结果显示,
杠柳苷各剂量组小鼠移植瘤细胞中, 处于 G 0 / G 1期
者明显增多 , 而S期和G2 / M期细胞显著减少, 与
表 1 杠柳苷对 H22荷瘤小鼠的抑瘤作用
Table 1 Antitumor activity of periplocin
on H22 tumorbearingmice
组 别 剂量/
( mg kg- 1)
动物/只
开始 结束
肿瘤质量/
g
抑瘤率/
%
模型 - 15 15 2 82 0 13 -
溶剂对照 - 15 15 2 83 0 10 0 35
顺铂 2 00 15 12 0 45 0 07* 84 04
杠柳苷 0 25 15 15 1 12 0 08* 60 28
0 50 15 15 0 90 0 02* 68 09
1 00 15 15 0 72 0 06* 74 47
与模型组或溶剂对照组比较: * P < 0 05
* P < 0 05 v s model group or ethanol cont rol group
溶剂对照组相比, 差异显著 ( P< 0 05) ,且随药物剂
量的增加上述变化越明显,其中高剂量 ( 1 00 mg/
kg) 组的 G0 / G1期细胞由溶剂对照组的 ( 46 90
5 80) % 升高至 ( 83 80 2 52) % , S 期和 G2 / M 期
细胞分别由溶剂对照组的 ( 38 30 5 11 ) %、
( 14 80 0 70 ) % 下 降至 ( 5 33 2 73 ) %、
( 10 87 0 25) % ,见图 2。说明杠柳苷可引起小鼠
H 22移植瘤细胞 G 0 / G 1期阻滞。
与对照组比较: * P< 0 05
* P < 005 v s cont rol grou p
图 2 杠柳苷对荷瘤小鼠肿瘤细胞周期分布的影响
( x s, n= 3)
Fig. 2 Effects of periplocin on cell cycle of tumor
cells in vivo ( x s, n= 3)
3 4 对荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响:结果发现,
杠柳苷各剂量组小鼠移植瘤细胞的凋亡率均明显升
高,与对照组相比,差异均有显著性 ( P< 0 05) ,其中
1 00 mg/ kg 组凋亡率高达 (3235 1 75) %,见图 3。
提示杠柳苷可诱导小鼠 H 22移植瘤细胞凋亡。
3 5 荷瘤小鼠肿瘤组织超微结构变化:对照组瘤组
织中多数肿瘤细胞边界清楚,胞膜完整,细胞器形态
结构正常,内质网丰富, 线粒体数量较多, 呈圆形或
卵圆形,线粒体嵴完整, 表明细胞代谢旺盛,核内染
色质分布均匀,核仁清晰明显, 未见典型凋亡细胞,
可见分裂相的肿瘤细胞。而杠柳苷各组的小鼠 H 22
移植瘤组织中均可见较多处于不同时期的凋亡细
1309中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
胞,表现为细胞皱缩,体积变小,细胞器多碎裂,内质
网扩张,线粒体数量明显减少, 嵴架溶解, 细胞质密
度增高或呈空泡状, 核内染色质凝聚, 边集于核膜
处,或呈新月状, 有的出现核固缩、核碎裂, 见图 4。
该结果同样提示, 杠柳苷可诱导小鼠 H 22移植瘤细
胞凋亡。
4 讨论
动物移植性肿瘤模型是目前抗癌药物研究的重
要方法之一。本研究选用 BA LB/ c小鼠肝癌 H 22皮
下移植瘤模型, 研究不同剂量杠柳苷对小鼠实体瘤
的影响,结果显示, 0 25、0 50、1 00 mg/ kg 剂量的
杠柳苷 ip 给药 15 d,均能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的
生长,各剂量组抑瘤率均达 60% 以上, 且其抑瘤效
应随药物剂量的增加而增强, 说明杠柳苷具有很强
的体内抗肿瘤作用。
顺铂是临床上常用的化疗药物, 抗肿瘤作用强
大,但作为一种免疫抑制剂,其不良反应明显。在本
实验中也观察到, 顺铂组小鼠体质量下降、精神差、
少活动,甚至出现死亡,而杠柳苷组荷瘤小鼠用药后
体质量、毛色、饮食、活动等一般情况尚好,无明显不
良反应出现。表明杠柳苷在本实验条件下具有良好
的用药安全性。
阻滞细胞周期是抗肿瘤药物抑制肿瘤细胞生长
的重要机制之一[ 9]。本研究结果显示, 3 个不同剂
量杠柳苷组小鼠移植瘤中 G 0 / G 1期细胞显著增多,
而 S 期和 G 2 / M 期细胞明显减少, 以高剂量组变化
最明显。表明杠柳苷可将荷瘤小鼠肿瘤细胞阻滞于
G 0 / G 1期。提示杠柳苷抗肿瘤机制可能与阻滞肿瘤
细胞周期有关。
许多包括中药 [ 1011]在内的抗肿瘤药物均可通过
诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用 [ 1213]。本研究流式
细胞分析结果显示, 杠柳苷各剂量组小鼠肿瘤细胞
的凋亡率均显著升高, 并可见典型的亚二倍体凋亡
峰。透射电镜下对 H 22移植瘤小鼠肿瘤组织的超微
结构观察发现,杠柳苷各剂量组小鼠肿瘤中均可见
大量细胞呈现凋亡细胞的特征性形态,如细胞缩小,
胞质空泡化,染色质呈新月状边集于核膜,核固缩、核
碎裂等。而对照组瘤组织则见线粒体、内质网丰富的
代谢旺盛的肿瘤细胞,未见典型凋亡细胞。提示杠柳
苷可诱导荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡。
以上研究结果表明,杠柳苷具有很强的体内抗
肿瘤活性,在有效剂量下无明显不良反应, 是不同于
常规化疗药物的优势所在, 值得进一步研究和开发。
同时,本研究还初步揭示了杠柳苷的抗肿瘤作用机
制可能与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关,这一
结果为香加皮作为抗肿瘤药物的开发奠定了基础,
其确切的分子机制尚有待更深入的研究探讨。
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中国被毛孢发酵物对 NOD小鼠 1型糖尿病的预防作用
寿旗扬13 ,傅惠英2 ,陈方明3 ,周卫民3 ,张才乔1 ,陈民利3*
( 1 浙江大学动物科学学院, 浙江 杭州 310029; 2 浙江大学医学院, 浙江 杭州 310058; 3 浙江中医药大学
动物实验研究中心,浙江 杭州 310053)
摘 要:目的 观察中国被毛孢发酵物对自发性 1 型糖尿病 NOD小鼠的预防作用。方法 利用 NOD 小鼠 1 型自
发性糖尿病模型,连续 10 周 ig 给予 1 g/ kg 中国被毛孢发酵物后, 观察 NOD 小鼠的体质量、血糖、发病率、谷氨酸
脱羧酶 ( GAD) 抗体水平、胰岛病变和胰腺纤维化的变化。结果 NOD 小鼠给予 1 g/ kg 中国被毛孢发酵物后, 第
6~ 10 周时血糖和发病率明显降低 ( P< 0 05、0 01) , 小鼠血清中 GAD 抗体明显降低 ( P< 0 01) , 小鼠胰岛病变
和胰腺纤维化评分值显著降低 (P < 0 05、0 01) , 胰腺结构较为清晰, 胰岛有少量炎症细胞浸润, 胰岛 细胞未见
异常。结论 中国被毛孢发酵物有较好的预防 NOD 小鼠 1型糖尿病发生的作用
关键词:中国被毛孢发酵物; NOD 小鼠; 1型糖尿病
中图分类号: R286 71 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 08131105
Prevention of strain fermentation in Hirsutella sinensis on type 1 diabetes
of nonobese diabetic mice
SHOU Qiyang13 , FU Huiying 2 , CHEN Fangming3 , ZHOU Weimin3 ,
ZHANG Caiqiao1 , CHEN M inli3
( 1 Co llege of Animal Sciences, Zhejiang Univer sity, H ang zhou 310029, China; 2. School of Medicine, Zhejiang Univer sity ,
H ang zhou 310058, China; 3. T he Resear ch Cent er of Labor at or y Animal Science, Zhejiang University
of T raditional Chinese Medicine, H ang zhou 310053, China)
Abstract: Objective T o observ e the prevent ion o f st rain fermentat ion in H ir sutel la sinensi s on spon
taneous type 1 diabetes of nonobese diabet ic ( NOD) mice. Methods The NOD mice w ith spontaneous
type 1 diabetes w er e administ rated by 1 000 mg / kg str ain fermentat ion in H . sinensis for 10 w eeks. The
index including body w eight , blood g lucose, incidence, GAD ant ibody, the islet patholog ical change, and
pancreas fibrillat ion w ere tested. Results The levels of blood glucose and incidence decreased signif icant ly
af ter t reatment by st rain fermentat ion in H . sinensi s ( 1 g / kg) for 6 ! 10 w eeks ( P< 0 05 and 0. 01) . GAD
Ant ibody w as depressed obv iously ( P < 0 01) and the islet patholog ical change and pancreas f ibrillat ion
grade decreased remarkably ( P< 0 05 and 0. 01) . T he const ruct ion of pancreas w as vivid, the inf lamma
to ry cell inf iltr at ion accident in islet and the cell show ed no abno rmality. Conclusion The st rain fermen
tat ion in H . sinensis has obvious pr event ion in spontaneous type 1 diabetes o f NOD mice.
Key words: st rain fermentat ion in H ir sutel la sinensis X. J. Liu, Y. L . Guo; nonobese diabet ic ( NOD)
mice; type 1 diabetes
1型糖尿病是一种遗传易感个体通过自身抗原
介导的免疫反应所引起胰岛细胞破坏的自身免疫
性疾病,由于自身免疫的损害造成胰岛细胞破坏,引
起胰岛素绝对缺乏, 出现高血糖症状[ 1] 。非肥胖型
1311中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 2010 年 8 月
* 收稿日期: 20091111 基金项目:浙江省科技计划项目 ( 2004C17001) ; 浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目资助作者简介:寿旗扬( 1979 ! ) ,男,浙江湖州人,在读硕士,助理研究员,主要从事实验动物和动物实验的科研工作。
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* 通讯作者 陈民利 Email : m inlich en01@ yahoo. com. cn