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赤芍中芍药苷的大孔吸附树脂纯化研究
刘帅英1 ,徐文峥2 ,李水福1*
( 1
丽水市食品药品检验所, 浙江 丽水
323000; 2
丽水市中医院 药剂科, 浙江 丽水
323000)
摘
要:目的
考察不同型号大孔吸附树脂对赤芍中芍药苷的纯化效果, 为树脂药用技术应用和赤芍相关产品开
发提供参考。方法
HPLC 法测定芍药苷;采用动态吸附法, 考察大孔树脂的吸附、解吸附性能和纯化效果。结果
D-101A 树脂综合性能最佳。结论
D-101A 树脂纯化赤芍中芍药苷效果较好, 可用于工业化生产。
关键词:赤芍; 芍药苷;大孔吸附树脂
中图分类号: R286
02


文献标识码: B


文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1480-03


大孔树脂是一类不带离子交换基团的多孔性交
联聚合物, 具有大孔结构的高分子吸附剂。物理化
学性质稳定,比表面积大,吸附容量大, 选择性好, 吸
附速度快,解吸条件温和; 对有机物选择性好, 不受
无机盐类及其他强离子、低分子存在的影响, 有利于
吸附;品种多,不同品种可吸附多种有机化合物; 流
体阻力较小;脱色能力高; 再生处理方便、使用周期
长、宜于构成闭路循环、节省费用。同时还可减少产
品的吸潮性,有效去除重金属,解决中药重金属超标
的难题[ 1-2]。目前主要用于中草药的分离纯化,如对
药材样品的预处理、对单味中药提取物的分离纯化
及对中药复方提取物的分离纯化,其中对中药提取
物中苷类[ 3] 、黄酮[ 4] 、生物碱 [ 5] 的分离效果良好, 有
的已实现工业化生产, 具有广阔的发展前景。近年
来,赤芍在心血管及肝病治疗领域的广泛药理活性
引起了普遍关注 [ 6]。虽有以芍药苷为指标, 采用大
孔树脂吸附法富集纯化赤芍总苷的报道[ 7] , 但未见
用不同型号大孔树脂吸附法比较纯化效果的研究。
本实验以 HP-20、HPD-100、LS-45、D-101、D-101A
大孔吸附树脂对赤芍中有效成分进行富集纯化, 为
树脂药用技术应用提供一定的参考。
1
仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱系统( G1311A 四元
泵、G1313A 自动进样器、G1316A 柱温箱、G1315A
二极管矩阵检测器)。LXJ
型离心机(上海医用
分析仪器厂) ; AE
50 电子天平(瑞士) ; 玻璃色谱
柱( 15 cm
1 cm、30 cm
5 cm )。
芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所, 批号
110836-200520) ;赤芍饮片由亳州京皖中药饮片厂
提供,经丽水市食品药品检验所李水福主任中药师
鉴定为毛茛科植物川赤芍 Paeonia vei tchi i Lynch
的干燥根;重蒸馏水(自制) , 甲醇(色谱纯) ,其他试
剂均为分析纯。大孔树脂: HP-20(上海摩速科学器
材有限公司) , HPD-100(沧州宝恩化工有限公司) ,
D-101、D-101A(安徽三星树脂科技有限公司) , LS-
45(天津农药厂)。
2
方法与结果
2
1
大孔吸附树脂的预处理及含水率的测定: 分别
取大孔树脂,加乙醇溶胀 24 h, 索氏提取器提取 12
h以除去树脂中残留的致孔剂等杂质。95%乙醇湿
法装柱,然后用 95%乙醇以 2 BV/ h 通过树脂层,洗
至流出液加等量水不出现白色混浊为止。再用水以
2 BV/ h洗至无醇味。改用 5%盐酸溶液以 4 BV/ h
通过树脂层,用水洗至中性,换用 2%氢氧化钠溶液
以 4 BV/ h洗涤, 最后用水洗至 pH 值中性即可,测
定含水率, 结果 D-101、HP-20、HPD-100、LS-45、D-
101A 树脂的含水率分别为 69
85%、61
01%、
66
29%、68
24%、69
34%。

1480
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2010- 02-10





















作者简介:刘帅英( 1982
) ,女,浙江丽水,药师,硕士,从事药品检验和药物研究工作。
T el : (0578) 2155869
E-mail: lus@ conbagr ou p
com
2
2
样品液的制备: 称取赤芍饮片粉碎成细粉, 10
倍药材量蒸馏水煮沸提取 3 次, 2 h/次, 合并提取
液, 3 000 r/ min离心 25 m in, 浓缩至相当于含药材
量 4 g / mL。加入无水乙醇调至乙醇体积分数为
60% ,置冰箱静置隔夜后 3 000 r/ m in离心 15 m in,
合并上清液,回收乙醇至无醇味,蒸馏水调至样品液
相当于含药材量 4 g / mL。精密吸取样品液 2 mL,
置于蒸发皿中, 水浴蒸干, 甲醇溶解并定容至 25
mL。精密吸取 5 mL 置干燥至恒定质量的蒸发皿
内,精密称定质量,浓缩至适当质量浓度后真空干燥
至恒定质量, 以干浸膏计算得芍药苷质量分数为
15
3%, 用蒸馏水调整样品液中芍药苷质量浓度至
3
403 2 mg / mL。
2
3
大孔吸附树脂对芍药苷动态吸附量的考察:精
密称取预处理后的 D-101、H P-20、HPD-100、LS-
45、D-101A 大孔吸附树脂各 6
0 g, 以蒸馏水装柱,
放净水, 加入样品溶液各 50 mL, 控制体积流量 2
BV/ h,过柱液重吸附 1次, 收集过柱液, 滤过, 精密
吸取续滤液 5 mL,水浴蒸干,甲醇溶解定容于 50 mL
量瓶中,测定芍药苷的质量浓度。以 4 BV 蒸馏水洗
脱上述吸附饱和的树脂柱,体积流量为 2 BV/ h, 收集
水洗液, 水浴蒸干,甲醇溶解定容至 50 mL,测定芍
药苷的质量浓度, 计算最大吸附量、吸附率,结果见
表 1。可见大孔树脂动态吸附容量大小顺序为: D-
101> HPD-100> D-101A> LS-45> HP-20。
2
4
不同树脂动态解吸率考察: 分别以50%乙醇
表 1
芍药苷的动态吸附容量考察
Table 1
Dynamic adsorption capacity of paonif lorin on resins
树脂型号 规格/ mm 吸附前质量浓度/
( mg
mL- 1 )
吸附后质量浓度/
( mg
mL- 1 ) 水洗量/ m g
最大吸附量/
( mg
g- 1 ) 吸附率/ %
H PD-100 0
3~ 1
20 3
403 2 0
576 9 5
82 71
01 39
74
H P-20 0
5~ 1
20 3
403 2 0
818 2 6
05 54
50 31
03
D-101 0
2~ 0
84 3
403 2 0
320 1 15
01 79
31 45
12
D-101A 0
2~ 0
84 3
403 2 0
652 7 16
22 67
22 38
21
LS-45 0
4~ 1
25 3
403 2 0
930 0 16
25 59
20 33
05
溶液洗脱上述树脂柱,洗脱体积流量为 2 BV/ h,收集
洗脱液, 10 mL/份,洗脱至洗脱液中检测不出芍药苷
为止。精密吸取各洗脱液 5 mL,水浴蒸干,甲醇溶解
定容至 50 mL, 测定芍药苷的质量浓度,绘制动态洗
脱曲线,见图 1和表 2。可见 HP-20解吸率较好。
2
5
不同树脂对芍药苷纯化效果的考察:取预处理
后的 D-101、HP-20、HPD-100、LS-45、D-101A 大孔
吸附树脂各 6
0 g , 精密称定, 以上述方法上样、洗
脱,合并收集洗脱液 6 BV,测定芍药苷质量浓度,并
将此洗脱液回收乙醇并真空干燥至恒定质量,测定
其固型物量,计算芍药苷的质量分数, 结果见表 3。
可见 D-101A 大孔树脂对芍药苷的纯化效果较好。
2
6
验证试验:按照上述筛选出的最佳树脂进行验
证, 3次试验的洗脱率均在 92%以上,芍药苷的质量
分数均在 40% 以上, 其平均质量分数达到了
80
11%。
图 1
HPD-100( A)、HP-20( B)、D-101(C)、LS-45( D)和 D-101A(E)树脂对芍药苷的动态洗脱曲线
Fig
1
Dynamic elution curves of paoniflorin on HPD-100 ( A) , HP-20 ( B) , D-101 (C) , LS-45 ( D) , and D-101A ( E)
表 2
不同树脂对芍药苷动态洗脱
Table 2
Dynamic elution of various resins on paonif lorin
树脂型号 上样量/
m g
流出液/
m g
水洗量/
m g
醇洗总量/
mg
洗脱率/ %
HPD-100 165
69 28
15 5
76 100
46 78
23
HP-20 165
69 3
86 5
01 156
82 94
65
D-101 165
69 10
02 10
07 92
12 63
27
LS- 45 165
69 40
33 9
26 75
34 64
90
D-101A 165
69 2
43 9
32 153
94 92
91
表 3
不同树脂洗脱物中芍药苷的测定
Table 3
Determination of paeonif lorin in eluted
material of various resins
树脂类型 洗脱物质量/ g 芍药苷质量/ m g 芍药苷质量分数/ %
H PD- 100 0
191 0 100
46 50
60
H P-20 0
306 3 156
82 45
58
D-101 0
220 9 92
12 42
70
D-101A 0
216 2 153
94 73
20
LS-45 0
235 4 75
34 30
01

1481
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
3
讨论
大孔树脂型号众多, 质量差异较大,无统一药用
标准,合成原料及溶剂不易除去, 应对树脂预处理,
预处理试验表明经多次超声预处理后, 树脂破碎, 真
空脱吸附法洗脱体积略小, 洗脱液紫外吸收度下降
较快,但洗脱倍数减少优势不显著,考虑到树脂应用
过程中的可行性及其成本,本实验采用碱-醇预处理
方法。


实验中的上柱液质量浓度、解吸乙醇体积分数、
洗脱速度、洗脱体积等条件参考了相关文献报道 [ 8]
以及预试验而确定。实验结果表明, H P-20虽有极
高的解吸率,但是其吸附量较低; D-101A 对芍药苷
有较好的吸附、洗脱能力,是纯化芍药苷的良好吸附
剂, 经其纯化处理后, 芍药苷质量分数由15
3%提
高到了 80
11% ,并且验证实验表明其工艺参数稳
定,有一定的应用价值。
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高效液相色谱法测定骨刺胶囊中士的宁
王彧丽1 , 戴德雄2 , 朱
莹2*
( 1
丽水市食品药品监督管理局, 浙江 丽水
323000; 2
浙江维康药业有限公司, 浙江 丽水
323000)
摘
要:目的
建立骨刺胶囊中士的宁的测定方法。方法
采用 H PLC 法测定, Zo rbax Eclipse XDB-C18色谱柱
( 150 mm
4
6 mm, 5
m) ; 流动相为乙腈-0
01 mol/ L 庚烷磺酸钠与 0
02 mo l/ L 磷酸二氢钾等量混合溶液 (用
10% 磷酸调节 pH 值 2
8) ; 体积流量 0
8 mL/ min;柱温 35
;检测波长 260 nm; 进样量 20
L。结果
士的宁在
0
118 8~ 1
782 0
g 线性关系良好。平均回收率 96
34% , RSD 为 0
50%。结论
该方法简便, 灵敏 ,专属性强,
重复性好,可作为骨刺胶囊的质量控制方法。
关键词:骨刺胶囊; 士的宁;高效液相色谱
中图分类号: R286
02


文献标识码: A


文章编号: 0253-2670( 2010) 09-1482-02


骨刺胶囊为
中华人民共和国卫生部药品标准

中药成方制剂第 17册收录骨刺片改剂型品种,由昆
布、骨碎补 、党参、马钱子粉、桂枝、威灵仙、牡蛎
(煅) 等 15味中药组成, 具有散风邪,祛寒湿, 舒筋
活血,通络止痛的功效, 用于颈椎、胸椎、腰椎、跟骨
等骨关节增生性疾病,对风湿性、类风湿性关节炎有
一定的疗效。马钱子粉的主要成分为士的宁, 为有
毒成分,因此需对其进行严格的限量。原标准采用
薄层色谱法对士的宁进行测定。为了严格控制药品
中士的宁,本实验采用 HPLC 法测定骨刺胶囊中士
的宁,并对其量进行了严格的限定。
1
仪器与试药
Agilent1100液相色谱仪, Ag ilent 色谱工作站;
BP211D电子天平(感量 0
1 mg; 0
01 mg ) ; USC

202超声波清洗器。
士的宁对照品(批号 110705-200005)由中国药
品生物制品检定所提供。骨刺胶囊( 0
36 g/粒)由
浙江维康药业有限公司提供。乙腈、甲醇为色谱纯,
水为重蒸馏水,其余试剂为分析纯。
2
方法与结果
2
1
色谱条件[ 1-2] : Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱
( 150 mm
4
6 mm, 5
m) ; 流动相为乙腈-0
01
mol/ L 庚烷磺酸钠与 0
02 mol/ L 磷酸二氢钾等量
混合溶液(用 10%磷酸调节 pH 值 2
8) ; 体积流量
0
8 mL/ min; 柱温 35
;检测波长 260 nm; 进样量
20
L。
2
2
溶液的制备
2
2
1
对照品溶液的制备:士的宁对照品易溶于三

1482
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
* 收稿日期: 2009- 11-26