全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 10 期 2011 年 10 月

·2005·
HPLC 同时测定参柏颗粒中甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗碱
文 谨，刘起华*，王 菲
中国中医科学院广安门医院，北京 100053
摘 要：目的 建立参柏颗粒中甘草苷、柚皮苷和盐酸小檗碱的 HPLC 测定方法。方法 色谱柱为 Diamonsil C18 柱（250
mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，体积流量 1.0 mL/min，检测波长 276 nm，柱温 30 ℃。结
果 甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗碱的线性范围分别为 0.164～0.820、0.480～2.400、0.048～0.240 μg，平均回收率分别为 98.6%、
98.4%、98.0%。结论 该方法简便快速、准确灵敏，为评价和控制参柏颗粒的质量提供了可靠的方法。
关键词：参柏颗粒；甘草苷；柚皮苷；盐酸小檗碱；HPLC
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)10 - 2005 - 03
Simultaneous determination of liquiritin, naringin, and berberin hydrochloride
in Shenbai Granula by HPLC
WEN Jin, LIU Qi-hua, WANG Fei
Guang’anmen Hospital, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100053, China
Key words: Shenbai Granula; liquiritin; naringin; berberin hydrochloride; HPLC

参柏颗粒是由黄柏、甘草、枳壳等制成的中药
制剂，具有清热解毒、消肿止痛、祛风止痒、凉血
散瘀等作用，临床用于肛肠科痔疮术后止痛止血，
促进创面愈合，软化瘢痕。文献有对其方中甘草、
枳壳、黄柏中主要成分甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗
碱单个成分进行测定的报道[1-3]，但对 3 个成分的同
时测定尚未见报道。然而复方中药药效的发挥是多
组分共同作用的结果，为了更好地评价参柏颗粒的
质量，本实验建立了 HPLC 法同时测定参柏颗粒中
甘草苷、柚皮苷和盐酸小檗碱的方法，该方法专属
性强、操作简便、精密度高、重现性好，能更好地
实现对参柏颗粒多指标多成分的控制。
1 仪器与材料
Waters 2695 高效液相色谱仪、PAD 检测器、
Empower Pro 色谱工数据作站（美国 Waters 公司）。
甘草苷（批号 111610-200402）、柚皮苷（批号
110722-200309）、盐酸小檗碱（批号 110713-200910）
对照品均购于中国药品生物制品检定所；乙腈为色
谱纯；磷酸、甲醇为分析纯；水为屈臣氏蒸馏水。
参柏颗粒自制（批号 091216、091217、091220）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱为 Diamonsil C18 柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm），柱温 30 ℃，体积流量 1.0 mL/min，检测波
长 276 nm，流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），
梯度洗脱，0～15 min，17% A；15～30 min，17%～
25% A；进样量 10 μL，各对照品的理论塔板数均大
于 3 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗碱对照品
适量，加甲醇制成 0.041、0.120、0.012 mg/mL 混合
对照品溶液，使用前经 0.45 μm 微孔滤膜滤过。
2.3 供试品溶液的制备
取参柏颗粒约 0.25 g，研细，精密称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，称定质量，超
声处理 30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减
失的质量，摇匀，0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤
液作为供试品溶液。

收稿日期：2010-12-13
基金项目：中国中医科学院广安门医院资助项目（2008s183）
作者简介：文 谨（1977—），女，研究方向为中药新制剂及质量控制。Tel: 13651083263 E-mail: wenjin7777@hotmail.com
*通讯作者 刘起华 Tel: (010)60214943 E-mail: gam-yaoyan@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 10 期 2011 年 10 月

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2.4 空白对照溶液的制备
按处方中药味的比例及工艺，分别制成不含甘
草、枳壳和黄柏的参柏颗粒阴性样品，以样品溶液
制备方法制成空白对照溶液并测定，阴性样品在与
对照品色谱峰相应的位置上无干扰，表明供试品溶
液中的其他成分对测定结果无影响。色谱图见图 1。







1-甘草苷 2-柚皮苷 3-盐酸小檗碱
1-liquiritin 2-naringin 3-berberin hydrochloride

图 1 对照品（A）、供试品（B）和缺甘草（C）、缺枳壳（D）、
缺黄柏（E）阴性对照的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances (A),
samples (B), blank samples without Glycyrrhizae
Radix et Rhizoma (C), without Aurantii Fructus (D),
or without Phellodendri Chinensis Cortex (E)

2.5 线性关系考察
精密吸取甘草苷、柚皮苷、盐酸小檗碱混合对
照品溶液 4、8、12、16、20 μL，注入液相色谱仪，
按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。以峰面积
为纵坐标，各组分的质量为横坐标，进行线性回归，
得回归方程：甘草苷 Y＝1 904 012.2 X－32 446.6，r＝
0.999 9；柚皮苷 Y＝1 557 006.5 X－88 206.5，
r＝0.999 9；盐酸小檗碱 Y＝2 872 525 X＋8 725.2，
r＝0.999 8；结果表明甘草苷、柚皮苷和盐酸小檗碱
分别在 0.164～0.820、0.480～2.400、0.048～0.240 μg
线性关系良好。
2.6 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液（批号 091216），重
复进样 5 次，求得样品中甘草苷、柚皮苷、盐酸小
檗碱峰面积的 RSD 分别为 0.8%、1.2%、0.9%。
2.7 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（批号 091216）在 0、
2、4、8、24 h 分别进样，样品中甘草苷、柚皮苷、
盐酸小檗碱峰面积的 RSD 分别为 1.1%、1.3%、
2.0%，说明供试品溶液在 24 h 内稳定。
2.8 重现性试验
取同一批样品（批号 091216）5 份，制备供试
品溶液，进样测定，结果样品中甘草苷、柚皮苷和
盐酸小檗碱质量分数的 RSD 分别为 1.3%、1.9%、
1.2%。
2.9 回收率试验
采用加样回收法，取同一批号（批号 091220）
样品 6 份，每份 0.125 g，精密称定，每份分别精密
加入甘草苷对照品溶液 0.420 mg/mL、柚皮苷对照
品溶液 1.192 mg/mL 和盐酸小檗碱对照品溶液
0.081 mg/mL 各 1.0 mL，制备供试品溶液，进样测
定，计算回收率。结果甘草苷、柚皮苷和盐酸小檗
碱的平均回收率分别为 98.6%、98.4%、98.0%，RSD
分别为 1.6%、1.9%、2.1%。
2.10 样品测定
分别取 3 批样品，每批平行 3 份，制备供试品
溶液，依上述色谱条件进样测定，外标法计算，结
果见表 1。

表 1 参柏颗粒中甘草苷、柚皮苷和盐酸小檗碱的测定结果
(n＝3)
Table 1 Determination of liquiritin, naringin, and berberin
hydrochloride in Shenbai Granula (n = 3)
批 号 甘草苷/
(mg·g−1)
柚皮苷/
(mg·g−1)
盐酸小檗碱/
(mg·g−1)
091216 3.634 9.826 0.638
091217 3.412 9.637 0.523
091220 3.540 9.744 0.586

3 讨论
在流动相的选择上，由于甘草苷、柚皮苷和盐
酸小檗碱的极性差异较大，为了能同时分析 3 个成
分，选择了梯度洗脱。参考文献方法[4-6]以乙腈-0.1%
磷酸为系统，经过多次调整洗脱时流动相的比例、
体积流量，最终筛选出使各成分能较好分离的色谱
条件，在本试验系统条件下，各组分均可基线分离，
峰形较好，且试验时间短，在 40 min 内就能实现良
好的分离。
1
2
3
1
2
3
0 10 20 30 40
t / min
E
D
C
B
A
2
3
1 3
1
2
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 10 期 2011 年 10 月

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本实验应用 PAD 检测器对测定波长进行了考
察，其中甘草苷的最大吸收在 276 nm，柚皮苷的最
大吸收在 283 nm，盐酸小檗碱的最大吸收在 265
nm，而采用 276 nm 作为测定波长能够满足方法学
考察的要求，同时，对 3 个化合物在同一波长下测
定使得方法更加简单，增加了普适性。
根据相关文献报道[7-8]，本实验对提取溶剂、提
取方法、提取时间分别进行了系统考察。提取溶剂
的考察方法为，分别选取甲醇、95%乙醇为溶剂，
对同一样品超声提取 30 min，结果采用甲醇提取效
果最好；本实验比较了超声提取、加热回流提取方
法，发现加热回流提取的色谱峰面积与超声提取的
色谱峰面积差别不大，因此选择超声提取作为样品
溶液的制备方法；本实验考察了超声 30、45、60 min
3 个时间点，发现超声 30 min 就可以把待测组分提
取完全，因此确定超声时间为 30 min。综上，样品
溶液的制备条件为甲醇超声提取 30 min。
本研究建立了同时测定参柏颗粒中甘草苷、柚
皮苷与盐酸小檗碱的方法，该法具有操作简便、结
果可靠等特点，能够应用于参柏颗粒的质量评价与
质量控制。
参考文献
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