全 文 ：高效液相色谱法测定四神片中五味子醇甲
王彧丽1 ,戴德雄2
( 1 浙江省丽水市食品药品监督管理局,浙江 丽水 323000; 2 浙江维康药业有限公司,浙江 丽水 323000)
摘 要:目的 高效液相色谱法测定四神片中五味子醇甲的量, 完善、提高四神片的质量标准。方法 H ypersil
ODS 色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5 m) (大连依利特公司) ; 流动相:甲醇水( 67! 33) ;检测波长: 250 nm;体积流量:
0 8 mL / min; 柱温:室温。结果 该方法的线性范围在 7 42 ~ 89 10 g / mL ( r = 0 999 9 ) , 平均回收率为
101 2% , RSD 为 1 84%。结论 方法可行、重复性好,能有效控制四神片中五味子醇甲的质量。
关键词: 四神片; 五味子醇甲;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 02532670( 2010) 03041602
四神片是∀中华人民共和国卫生部药品标准#中
药成方制剂第八册收载的品种, 处方组成为肉豆蔻
(制) 200 g、吴茱萸 100 g、补骨脂 400 g、五味子 200
g、干姜 100 g、大枣(去核) 200 g。具有助肾散寒、止
泻消胀, 的功效, 用于肾虚受寒, 肠鸣肚胀, 五更溏
泻, 食物不化, 久泻不止,面黄体弱。原标准中只是
对片剂项下有关各项做检查, 无定量检测指标。本
实验建立了高效液相色谱法测定四神片中五味子醇
甲的测定方法, 为该产品提供了质量控制依据。
1 仪器与试药
日本岛津 LC2010AHT 高效液相色谱仪; Sar
to riusBP211D电子天平(感量 0 1 mg ; 0 01 mg ) ;
USC ∃ 502超声波清洗器, T U ∃ 11901紫外分光光
度计。
五味子醇甲(批号 110857200507,中国药品生物
制品检定所) ; 甲醇为色谱纯,水为新制备的纯化水;
四神片, 06 g/片,由浙江维康药业有限公司生产。
2 方法与结果
2 1 色谱条件及专属性考察
2 1 1 吸收波长的选择:五味子醇甲具有紫外吸收
峰,可以选择紫外检测器进行定量分析。对五味子
醇甲在流动相中 200~ 400 nm 进行紫外扫描, 其在
250 nm波长时具有最大吸收, 故选择 250 nm 作为
紫外检测波长。
2 1 2 流动相的选择: 参考∀中国药典#2005 年版
一部五味子测定项下的流动相甲醇水( 13 ! 7) , 根
据液相色谱的实际分离情况微调至甲醇水( 67 !
33) , 分离效果良好, 分离度可以达到 2 0以上,达到
基线分离;且柱效较高。
2 1 3 色谱条件: Hypersil ODS 色谱柱( 250 mm
4 6 mm, 5 m) (大连依利特公司) ;流动相: 甲醇水
( 67!33) ;检测波长: 250 nm;体积流量: 08 mL/ min;
柱温:室温。在该条件下,五味子醇甲与其他组分均
能达到基线分离 ( R> 2 0)。参照∀中国药典#2005
年版一部附录 VI D高效液相色谱法, 以五味子醇
甲峰计算柱效,其理论板数为4 000。为使五味子醇
甲峰达到基线分离,定量分析准确,规定理论板数不
得低于 2 000。
2 2 供试品溶液的制备: 取本品 20 片, 除去包衣,
精密称定,研细,取约 2 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶
中,精密加入 70%甲醇50 mL , 称定质量,超声处理
(功率 250 W,频率 20 kHz) 30 m in, 放冷,再称定质
量,用上述溶剂补足减失的质量,摇匀,滤过,精密量
取续滤液 25 mL ,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇使
溶解,转移至 25 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀,
滤过,取续滤液,即得。
2 3 对照品溶液的制备:精密称取五味子醇甲对照
品适量,加甲醇制成 20 g/ mL 的溶液,即得。
2 4 线性关系考察: 精密称取五味子醇甲对照品
14 85 mg ,置 100 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至
刻度。再精密吸取上述溶液 0 5、1 0、2 0、3 0、6 0
mL 分别置 10 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度。分
别精密吸取上述溶液 10 L 注入液相色谱仪,记录
色谱图。以峰面积的积分值为纵坐标, 质量浓度为
横坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程 Y= 36 094
X - 41 708, r = 0 999 9, 结果表明五味子醇甲在
7 42~ 89 10 g / mL 线性关系好。
2 5 空白试验: 按处方制备除五味子以外的阴性
片,依照供试品溶液的制备项下方法制备阴性对照
溶液,同法测定, 记录色图谱, 见图 1。从五味子醇
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收稿日期: 20090924
甲对照品的 HPLC图谱可知, 五味子醇甲色谱峰的
tR 为 14 min左右。从空白对照色谱图中可见,除去
五味子的空白对照在此范围无色谱吸收峰, 可以认
为其他组分对本制剂中的五味子醇甲测定无干扰。
* 五味子醇甲
* s chizandrin
图 1 对照品( A)、四神片( B)和阴性样品(C)的
HPLC图
Fig 1 HPLCChromatograms of reference substance
( A) , Sishen Tablets ( B) , and negative sample ( C)
2 6 重复性试验: 选择同一批号的四神片(批号
080801) , 平行制备 6份供试品溶液, 测定五味子醇
甲峰面积并计算质量分数, 结果表明五味子醇甲质
量分数的 RSD为 0 78%。
2 7 精密度试验:在不同时间由不同的分析人员选
择同一批号的四神片(批号 080801)供试品溶液, 按
照上述色谱条件, 测定五味子醇甲峰面积, 计算, 结
果表明五味子醇甲质量分数的 RSD为 1 07%。
2 8 稳定性试验: 取供试品溶液于室温 ( 20~ 25
& )下放置,分别于 0、2、4、6、8、10 h精密吸取 10 L
进样,测定五味子醇甲峰面积。结果表明,计算得其
其 RSD为 0 85% , 可见供试品溶液中五味子醇甲
在放置 10 h测定,保持稳定。
2 9 回收率试验:取批号 080801四神片内容物适
量,精密称取该粉末 9份,每份约 1 g, 添加 0 121 4
mg / mL五味子醇甲对照品储备液4、5、6mL, 平行
制备供试品溶液 3份, 取样,注入液相色谱仪,测定,
计算回收率, 结果平均回收率为 101 2% , RSD 为
1 84%。
2 10 样品测定: 取 7 批样品 (批号 080801、
080802、080803、080804、080805、080806、080807) ,
制备供试品溶液, 按上述色谱条件测定,计算样品中
五味子醇甲的质量分数分别 0 32、0 33、0 32、
0 31、0 31、0 30、0 32 mg/片。
3 讨论
3 1 供试品不同前处理方法的选择:曾考察了冷浸
法、回流提取法和超声提取方法对于四神片中五味
子醇甲测定的影响, 结果采用冷浸法五味子醇甲量
比较低,而采用超声处理方法和索氏提取方法制备
得五味子醇甲的量相差不远。因索氏提取法提取时
间较长(回流至无色需 4 h以上) , 而采取超声法,且
其处理时间仅为 30 m in,即能将五味子醇甲提取完
全,操作简便。
3 2 不同提取溶剂的考察:考察了不同体积分数的
甲醇对超声处理结果的影响,结果 50%甲醇和 70%
甲醇超声提取后, 五味子醇甲的量均较高。但 50%
甲醇超声提取,所得溶液较黏稠, 滤过困难,故选择
70%甲醇为溶媒提取。
3 3 不同色谱柱的比较:用 Kromasil C18 ( 250 mm
4 6 mm, 5 m)、Hyper sil C18 ( 150 mm 4 6 mm, 5
m)、Hyper sil C18 ( 250 mm 4 6 mm , 5 m) 3个不
同型号的色谱柱所测五味子醇甲量的 RSD均小于
2 0%, 色谱柱对该方法基本无影响。
3 4 不同流动相比例的比较[ 1, 2] : 用甲醇水( 70:
30)、甲醇水( 64 ! 36)、甲醇水( 67 ! 33)所测五味
子醇甲量 RSD 为 1 91%, 提示流动相的比例在以
上范围内对该方法基本无影响。
3 5 不同检测波长的比较: 用 240、250、260 nm 波
长所测五味子醇甲量 RSD 为 1 49% , 提示检测波
长在以上范围内对该方法基本无影响。
参考文献:
[ 1] 金 福,石森林,朱雨晴 高效液相色谱法测定生脉分散片中
五味子醇甲[ J]中草药, 2009, 40( 6) : 912914
[ 2] 宋英姬 HPLC法测定五子衍宗片中五味子醇甲 [ J]中草药,
2008, 39( 7) : 10261027
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