全 文 ：前后体系的能量(表 4)。不论是五元内酯环还是十
氢萘环与环糊精作用所形成的包合物的能量均比主
客体孤立的处于同一个平面内未被包合状态下低,
且均低于主客体能量的简单加合, 说明 14-去氧穿
心莲内酯与B-环糊精形成包合物
表 4 14-去氧穿心莲内酯-B-环糊精包合过程的计算机
模拟数据
Table 4 Simulation data of 14-deoxyandrographolide-
B-cyclodextrin by computer
名 称 SP( k cal / mol) M M3( kcal/ mol)
B-环糊精 4271 7467 51510426
14-去氧穿心莲内酯 531 3747 5313732
1) + B-环糊精 4881 6518 48816329
1-B-环糊精 4701 5519 48816329
1c-B-环糊精 4771 6318 47716381
可以在常温下进行, 且形成的包合物常温下比较稳
定。热力学常数 vG为负,也说明了包合反应可以
在常温及恒温条件下自发进行。
参考文献:
[ 1] 韩 光,曾 超,杜钢军,等1 穿心莲内酯衍生物的合成及其抗
炎免疫活性[ J]1 中草药, 2006, 37( 12) : 1771- 1775
[ 2] Gerhard W1 An overview of host-gues t chemist ry and it s appl-i
cation to nons teroi 14-deoxyandrographolide l an t-i inf lammato-
ry dru gs [ J]1 Clin Drug Inv e st , 2000, 19( 2) : 211
[ 3] 韩 光,李景华1 14-去氧穿心莲内酯/B-环糊精包合作用的研
究[ J]1 中南药学, 2008, 6( 3) : 274-2771
[ 4] Jara F, Mascayano C, Rezend e M C, et al1 A spect ral and m o-
lecular dynamics simulat ion study of B-cyclodext rin in clusion
complexes wi th solvatochromic dyes derived f rom barbituric
acid [ J ]1 J Inc lu sion P henomena Macrocyc li c Chem , 2006,
54: 95-991
大鼠股静脉给药五味子酚的药动学研究
马晓琳,陈道峰*
(复旦大学药学院 生药学教研室,上海 200032)
摘 要:目的 建立测定大鼠血浆中五味子酚浓度的 H PLC 方法, 并对五味子酚在大鼠体内的药动学特征进行研
究。方法 血浆样品经甲醇沉淀及乙醚萃取后,用 HPLC-DAD进行测定分析。色谱柱为 Eclipse XDB-C18 Agilent
( 250 mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ,流动相为乙腈-水( 65B 35) , 检测波长 254 nm; 测定大鼠静脉注射五味子酚 18 mg / kg 后
的血药浓度,并利用 3P87软件拟合其药动学参数。结果 五味子酚的血药浓度在 01 1~ 21 5 Lg/ mL 线性关系良好
( r 2= 01 999) , 最低检测限为 10 ng/ mL ,在 3 个浓度水平下, 方法的回收率为 88% ~ 110% ,日间和日内 RSD小于
15% ,符合生物样品分析要求。大鼠股静脉注射 18 mg / kg 后, 血药浓度-时间曲线呈二室模型。主要药动学参数
t1/ 2A、t1/2B、V、AUC、M RT 分别为( 01 22 ? 01 11) h、( 11 19 ? 01 22) h、( 121 81 ? 21 91) L / kg、( 11 32 ? 01 19) Lg / mL / h、
( 11 51 ? 01 24) h。结论 该方法简便、快速、稳定可靠, 适用于五味子酚的体内分析。
关键词:五味子酚; 高效液相色谱法;药动学
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 02 0216 04
Pharmacokinetic study of schisanhenol via femoral intravenous administration in rats
MA Xiao- lin, CHEN Dao- feng
( Depa rtment of Pharmacognosy , School of Pharmacy, Fudan Univer sity, Shanghai 200032, China)
Abstract: Objective T o establish an HPLC method for the determ ination o f schisanhenol in plasma
and to study the pharmacokinet ics of schisanhenol in rats1 Methods After sedimentat ion by methano l,
plasma samples w ere then prepared based on a liquid- liquid ex t ract ion by ether1 The ex t racted samples
w ere analyzed by liquid chromatog raphy1 Schisanhenol w as eluted on Eclipse XDB-C18 Ag ilent ( 250 mm @
41 6 mm, 5 Lm) column, using a mobile phase o f acetonit rile-H 2O ( 65B 35) , and detected at 254 nm1 The
plasma concentrat ion of schisanheno l in rats w as determ ined after iv administ ration of 18 mg/ kg, and the
data w er e pro cessed w ith the pharmacokinet ic sof tw ar e 3P871 Results Calibration curves w ere linear o ver
01 1 ) 21 5 Lg/ mL ( r 2 = 01 999) and the LOD was 10 ng / mL1 T he recoveries of schisanhenol f rom plasma
#216# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
* 收稿日期: 2009- 05-09 基金项目:教育部高校优秀青年教师奖励基金资助项目( 1999-71) ;上海市教育发展基金资助项目( 05SG06)作者简介:马晓琳 ( 1982 ) ) ,女,上海人,硕士研究生,从事中药活性成分药动学研究。E-mail: m enthama@ gmail1 com
* 通讯作者 陈道峰 T el: ( 021) 54237453 Fax : ( 021) 64170921 E-mail: dfchen@ shm u1 edu1 cn
were betw een 88% ) 110%, and the RSD values of int ra-day and inter-day assay w ere below 15%1 A fter iv
administ ration at 18 mg/ kg , the schisanheno l concentrat ion- t ime curve confirmed in a tw o-compar tment
model and the pharmacokinet ic parameters of t1/ 2A, t1/ 2B, V , AU C, MRT were ( 01 22 ? 01 11) h, ( 11 19 ?
01 22) h, ( 121 81 ? 21 91) L / kg , ( 11 32 ? 01 19) Lg/ mL/ h, ( 11 51 ? 01 24) h, respect iv ely1 Conclusion A
reliable HPLC-DAD method is developed for the determ inat ion o f schisanheno l in rat plasma and it is appl-i
cable to the in v ivo analysis1
Key words: schisanheno l; H PLC; pharmacokinet ics
五味子酚是一种从多种五味子科植物中分离得
到的木脂素类化合物[ 1~ 3]。药理研究表明, 五味子
酚具有抗氧化作用,可抑制氧自由基对大鼠心脏和
肝脏细胞线粒体以及小鼠脾淋巴细胞的脂质过氧化
作用,对线粒体肿胀和膜流动性降低也有明显保护
作用[ 4, 5] ,可防止氧自由基引起的大鼠脑突触体和
线粒体形态的病理性损伤 [ 6] , 同时五味子酚具有抗
凝纤溶、抗血小板聚集和扩血管活性,对脑梗死及再
灌注损伤在大脑功能和形态学方面均具有治疗保护
作用,是一个治疗缺血性脑中风的潜在药物 [ 7]。因
此,对五味子酚进行动物体内的药动学研究具有重
要意义。因此本实验建立了测定大鼠血浆中五味子
酚浓度的 HPLC-DAD方法,并采用该方法研究了股
静脉注射五味子酚后大鼠血浆中五味子酚浓度-时间
过程及其体内药动学行为,提供了该化合物的初步动
物药动学研究资料,为其进一步研究提供参考。
1 材料与仪器
HP 1100型高效液相色谱仪(包括在线真空脱
气机,四元梯度泵, 二极管阵列检测器, HP Chem-
Stat ion化学工作站) ( Ag ilent ) , 5417R小型台式高
速离心机( Eppendorf ) , XW ) 80A 漩涡混合器 (上
海医科大学仪器厂) ,电热恒温水浴锅(上海华琦科
学仪器有限公司)。
五味子酚由红花五味子果实中分离得到, 化学
结构经1H-NMR、13 C-NMR、MS 和 IR等谱学方法
鉴定[ 8] , HPLC 法测定的质量分数> 99% ;内标五味
子丙素由内南五味子藤茎中分离并鉴定[ 9] , HPLC
法测定的质量分数> 99% ;高效液相用有机溶剂为
色谱纯,水为去离子水,其余试剂均为分析纯。
健康 SD大鼠( 200~ 250 g ) , 雄性, 由复旦大学
实验动物科学部提供(合格证号 SCXK2007-0002)。
2 方法和结果
21 1 色谱条件:色谱柱为 Eclipse XDB-C18 Ag ilent
( 250 mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ; 预柱: Secur ity Guard
Cart ridg es C18 ( 41 0 mm @ 31 0 mm) ; 流动相: 乙腈-
水( 65B 35) ; 体积流量: 01 8 mL/ min; 柱温: 40 e ;
检测波长: 254 nm。
21 2 血浆样品处理:取血浆 200 LL,加入内标五味
子丙素溶液( 621 5 Lg/ mL) 20 LL 混匀, 加入 100
LL 甲醇沉淀蛋白后, 用 1 mL 乙醚萃取, 漩涡混匀
后 5 000 r/ m in离心 5 min,吸取醚层溶液, 重复上
述萃取操作 1次, 合并两次乙醚萃取液,于 55 e 水
浴上氮气吹干, 用 100 LL 甲醇溶解混匀后, 10 000
r/ min离心 10 min, 取 20 LL 上清液, 即得。
21 3 方法专属性考察:上述色谱条件下, 空白血浆、
空白血浆+ 内标+ 五味子酚对照品、实验样品进样
后,得 HPLC 色谱图,见图 1。可见血浆中的杂质和
内标对五味子酚的测定无干扰。
21 4 标准曲线的制备: 精密称取五味子酚对照品
41 0 mg 置于 2 mL 量瓶中,以甲醇配成 21 0 mg/ mL
的五味子酚溶液, 并以甲醇逐级稀释配成一系列质
量浓度的对照品溶液。分别取1、2、5、1 0、1 5、25
1-五味子酚 2-内标
1-schisanhenol 2- intern al standard
图 1 空白血浆( A)、空白血浆中加入五味子酚和内标( B)和大鼠静注五味子酚后的血浆样品(C)的 HPLC色谱图
Fig1 1 HPLC Chromatograms of blank plasma ( A) , blank plasma spiked with schisanhenol and internal standard ( B) ,
and plasma sample of schisanhenol after iv injection to rats ( C)
#217#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
Lg/ mL 对照品溶液加入大鼠空白血浆中,使其在血
浆中的质量浓度分别为 01 1、01 2、01 5、11 0、11 5、21 5
Lg/ mL。按血浆样品处理项下的方法操作, 在上述
色谱条件下进样,测定血浆样品中药物峰面积( A s)
与内标峰面积( A is) ,计算 A s/ A is。以 As/ A is为横
坐标( X ) , 质量浓度( Y)为纵坐标,进行线性回归, 得
到标准曲线方程 Y = 41 249 3 X - 01 071 79, r2 =
01 999,线性范围: 01 1~ 21 5 Lg/ mL。
21 5 精密度试验: 在空白大鼠血浆样品中加入 2、
10、25 Lg / mL 五味子酚对照品溶液,使其终质量浓
度分别为 01 2、11 0、21 5 Lg/ mL, 按血浆样品处理项
下方法操作,于 1 d内测定 5次, 计算日内精密度,
一周内 5 d测定, 计算日间精密度,结果见表 1。
21 6 回收率试验: 在空白大鼠血浆样品中加入 2、
10、25 Lg / mL 五味子酚对照品溶液,使其终质量浓
度分别为 01 2、11 0、21 5 Lg/ mL, 按血浆样品处理项
下方法操作,测定,以测得值与加入量的比值作为回
收率,结果见表 1。
表 1 五味子酚在大鼠血浆中的回收率和精密度试验结果
(n= 5)
Table 1 Recovery and precision of schisanhenol
in plasma of rat ( n= 5)
水平 加入量/
(Lg # mL- 1)
日内
回收率/ % RSD/ %
日间
回收率/ % RSD/ %
低 01 2 1091 9 51 9 981 7 1415
中 11 0 1071 9 41 2 971 9 1315
高 21 5 911 6 91 5 881 8 513
21 7 五味子酚的大鼠体内药动学: SD大鼠 5只, 用
乌拉坦麻醉, 分离颈总动脉, 插管, 按 18 mg/ kg 由
股静脉注射五味子酚-10% 聚山梨酯 80 水悬液 1
mL,给药后于 5、15、30 m in 及1 、2 、3 、4 h 颈动脉
插管取血, 每次采血后补充等量生理盐水。插管和
离心管均事先用 01 4%肝素生理盐水液润洗以抗
凝。血样于 6 000 r/ min离心 10 min,吸取血浆200
LL。按血浆样品处理项下的方法操作, 测定血药浓
度,结果见图 2。采用中国药学会编制的 3p87程序
对经时血药浓度数据进行处理, 得到五味子酚的主
要药动学参数, 见表 2。
从动力学参数可以看出,静脉给药分布相半衰期
( t1/ 2A)仅 131 2 min,说明药物由血液循环迅速分布到
组织。消除相半衰期( t1/ 2B)为 711 4 min,表明代谢和
排泄也较快。表观分布容积 V= 121 81 L/ kg,提示五
味子酚在组织中分布很广,这与其亲脂性质相符。
3 讨论
钮心懿等 [ 10]报道了五味子醇甲在大鼠体内药
图 2 大鼠静脉注射五味子酚后的平均血药浓度-时间
曲线( n= 5)
Fig1 2 Mean plasma concentration-time curve of schisan-
henol after iv injection to rats (n= 5)
表 2 大鼠静脉注射五味子酚后的药动学参数(n= 5)
Table 2 Pharmacokinetic parameters of schisanhenol
after iv injection to rats ( n= 5)
参 数 单 位 x ? s
A Lg # mL- 1 01 82 ? 01 43
A h- 1 31 77 ? 11 85
B Lg # mL- 1 01 64 ? 01 15
B h- 1 01 60 ? 01 12
V L # kg- 1 121 81 ? 21 91
t 1/ 2A h 01 22 ? 01 11
t 1/ 2B h 11 19 ? 01 22
K 21 h
- 1 11 98 ? 01 84
K 10 h- 1 11 12 ? 01 26
K 12 h- 1 11 30 ? 11 23
AUC (Lg # mL- 1 ) # h 11 32 ? 01 19
CL ( mg # k g- 1) # h- 1 (Lg # mL- 1) - 1 131 86 ? 11 76
MRT h 11 51 ? 01 24
动学过程,其静脉注射后同样具有迅速分布、较快消
除、组织分布广的特征,可以认为五味子酚和五味子
醇甲的体内药动学过程相近,这可能归于它们同属
于联苯环辛烯类木脂素,在结构上较为相似的缘故。
五味子酚作为多种五味子植物中的主要木脂素成
分,在五味子脂溶性部位的体内过程研究中可作为
检测的指标成分。
五味子酚极性低, 难溶于水,若用无水乙醇溶解
后水稀释的方法可以得到澄明溶液, 但所需乙醇量
较高,会对体内药动学过程产生影响。所以在聚乙
二醇、丙二醇、聚山梨酯和羧甲基纤维素等之中, 根
据增溶悬浮效果和对血浆色谱图无干扰等因素考虑
下,最终选择聚山梨酯 80 配制水悬液作为给药剂
型。研究结果提示, 合适的药物剂型对于五味子酚
在机体内发挥作用是重要的, 对其胃肠道吸收、组
织分布、排泄及体内代谢等环节也需要进一步研究。
参考文献:
[ 1] 刘嘉森,黄梅芬,高耀良1 翼梗五味子的研究 Ñ1 五味子酚和
去氧五味子素的结构 [ J]1 化学学报, 1978, 36( 3) : 193- 1971
[ 2] 刘嘉森,王文贵,黄梅芬1 湖北利川产五味子化学成分研究
#218# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
[ J ]1 中草药, 1990, 21( 7) : 294- 2951
[ 3] 李子燕,李 良,张洪彬1 中间五味子化学成分的研究 [ J ]1
中草药, 1996, 27( 1) : 3-41
[ 4] Lin T J , Liu G T , Pan Y1 Protect ive effect of s chisanh enol a-
gainst ox yg en radical indu ced m itochondrial toxicity on rat
h eart and liver [ J]1 Biomed E nv ir on S ci , 1992, 5: 57-641
[ 5] 李 莉,吴若 1 五味子酚对氧自由基损伤小鼠淋巴细胞的
保护作用 [ J]1 药学学报, 1997, 32( 3) : 178-1821
[ 6] 李 莉,刘耕陶1 五味子酚对氧自由基引起大鼠脑突触体和
线粒体损伤的保护作用 [ J]1 药学学报, 1998, 33( 2) : 81- 861
[ 7] 陈道峰,蒋仕丽,章蕴毅1 五味子酚在制备治疗缺血性脑中风
药物中的用途 [ P]1 中国专利: C N1723879, 20061 011 251
[ 8] Chen M , Kilgore N, L ee K H, et al1 Rub risan drins A and
B, l ignan s and related ant-i H IV compounds f rom S chi sandr a
r ubr if l or a [ J]1 J N at P rod , 2006, 69( 12) : 1697- 17011
[ 9] Chen D F, Zhan g S X, Kozuka M, e t al1 Interiotherins C and
D, tw o new lignans f rom K ad sura int erior and ant itumor-
promot ing ef fect s of related neol ignan s on Epstein- Barr virus
act ivat ion [ J]1 J N at P rod , 2002, 65( 9) : 1242-12451
[ 10] 钮心懿,边振甲,任志鸿1 薄层紫外扫描法测定五味子醇甲在
大鼠体内的代谢及脑内分布[ J ]1 药学学报, 1983, 18( 7) : 491-
4951
大鼠在体肠吸收穿心莲内酯的特征研究
叶 玲,刘 薇,唐 斓,夏笔军,龚 耘,刘中秋*
(南方医科大学药学院 ,广东 广州 510515)
摘 要:目的 为探讨穿心莲内酯生物利用度低的原因, 考察穿心莲内酯肠道吸收特性,肝肠循环和肠道酶代谢特
点。方法 采用大鼠在体肠灌流模型。运用 H PLC 法测定肠灌流液、胆汁以及经肠道酶降解后样品中穿心莲内酯
的量。结果 穿心莲内酯在不同肠段的吸收率,以十二指肠最高,达 40% ,而在结肠最低, 仅有 10%。穿心莲内酯
在十二指肠灌流液中的生物降解最显著 ( 1 h 降解约 50% ) , 在回肠、结肠中则几乎无降解反应。穿心莲内酯有胆
汁排泄,其排泄量为灌流药物总量的 01 76%。结论 穿心莲内酯在大鼠肠道的吸收较差, 而在十二指肠中吸收表
现较好是由于存在较强的肠道酶代谢作用。同时,穿心莲内酯存在明显的肝肠循环。穿心莲内酯生物利用度低的
原因与肠吸收差、肠道酶代谢作用强和肝肠循环有关。
关键词:穿心莲内酯; 大鼠在体肠灌流;肠道酶; 吸收
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 02 0219 04
Absorption characteristics of andrographolide in rat intestine in situ
YE Ling , LIU Wei, T ANG Lan, XIA B-i jun, GONG Yun, LIU Zhong-qiu
( Schoo l of Pharmaceut ical Sciences, Sout hern Medical Universit y, Guang zhou 510515, China)
Abstract: Objective T o invest igate the causes o f poor bioavailability o f androg rapholide, the absorp-
t ion characterist ics, hepatic-enteric recycling, and metabolism of andro grapho lide in rat intest ines w ere ob-
served1 Methods A sing le-pass / four-site0 rat intest inal perfusion model in situ was employed1 The con-
centrat ion of androgr apholide in perfusates, bile, and in v it ro incubat ion samples for metabolites of an-
drog rapholide by the intest inal enzymes, respect ively, w as determ ined by HPLC1 Results In the perfu-
sion model, max imal absorption of androg rapholide occurred in the duodenum w ith a 40% absorption rate,
w hereas only 10% of androg rapholide w as absorbed in the colon1 Moreover, androg rapholide w as rapidly
hydro lyzed ( about 50% in 1 h) in the duodenum perfusates but w as not hydro lyzed at all in the colon and
ileum perfusates1 On the o ther hand, androg rapholide w as excreted by bile w ith a total of 31 04% prefused
amount of androg rapholide1 Conclusion The poor absor pt ion, rapidly hydro lysis, and hepat ic-enter ic re-
cycling in the intest ine all cont ribute to the poor bioavailability of andro grapho lide1
Key words: androg rapholide; the rat intest inal perfusion in si tu; intest inal enzymes; absorption
#219#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
* 收稿日期: 2009- 04-12 基金项目:国家/ 十一五0支撑计划项目( 2006BAI11B08- 04) ;广东省高等学校自然科学研究重点项目( 06Z008) ;广州市科学技术局应用基础项目( 2007JI- C0021)作者简介:叶 玲( 1984 ) ) , 女, 广东阳春人, 2007级博士研究生,从事药物吸收与代谢研究。
T el : (020) 61648597 E-mail: lotus623@ 1261 com
* 通讯作者 刘中秋 T el: ( 020) 61648596 E- mail: liuzq@ f immu1 com