全 文 ：JGF<测定大鼠血清中靛玉红的含量
及其药代动力学研究
殷志爽! 王维聪! 游远! 宋学英! 夏彬彬! 王桥!
首都医科大学 化学生物学与药学院! 北京 $$$#*#
$摘要%!目的&建立测定血清中靛玉红含量的高效液相色谱!JGF<方法$并应用于靛玉红在大鼠体内的药代动力学研
究( 方法&采用OI8 <
(
色谱柱!&f# 00i+$ 00$
0$流动相为甲醇5水!%r+$流速 f$ 0F-0R2d$检测波长 +(* 20$
柱温 ) h$进样量为 +$
F$内标物为炔雌醇( 给大鼠颈静脉插管后$分别按 +f$$&f$ 0D-[Dd经插管静脉注射靛玉红$用
JGF<测定给药后不同时刻大鼠血清中靛玉红的浓度( 采用 ZR22/2VR2 f$ 软件拟合$计算药动学参数( 结果&靛玉红在
$f$) j+f&( 0D-F
d线性关系良好!M+ e$f*** #$最低检测限 )
D-F
d
( 回收率大于 *(g$其日内%日间 >8I均小于
$g( 靛玉红在大鼠体内的药代动力学过程符合二室模型( 结论&本方法操作简便%准确$灵敏度高%重复性好$可用于靛玉红
血药浓度的监测及其药代动力学研究(
$关键词%!靛玉红)高效液相色谱法)药代动力学
$稿件编号%!+$$*$*+*$$(
$基金项目%!北京市属市管高等学校人才强教计划资助项目
$通信作者%!!王桥$NQV# !$$ ()*+&$ H50BRV# `RB/,3..5
0WfQUWf.2
!!靛玉红!V2URCW]R2又称炮弹树碱5M$主要存
在于青黛%板蓝根%蓼蓝以及大青叶等植物中$可
通过使白血病细胞呈肿胀%溶解性坏死而起到治
疗慢性粒细胞白血病的作用 *+ ( 近几年研究发
现$靛玉红可通过作用于人体内的蛋白依赖性激
酶!.6VR25UQAQ2UQ2@[R2BSQS$
供了有利的证据 *+5)+ ( 此外$有研究指出$靛玉红
可通过阻断真核转录延伸因子 G5NHE] 介导的基
因表达抑制病毒 J:\5 的复制$从而对野生型及
药物诱导的 J:\5 产生良好的抑制作用 *&+ ( 还
有研究证实靛玉红可以显著抑制细胞因子 :E;5
%
和 :F5# 的释放$对迟发型变态反应和自身免疫性
疾病的治疗有着潜在的应用价值 *+ ( 由此可见$
靛玉红在抗肿瘤%抗炎%调节免疫等方面都拥有
广阔的应用前景$因而建立靛玉红血药浓度的检
测方法$进一步研究其药代动力学就显得尤为重
要(
据报道$靛玉红血药浓度测定可以采用放射性
标记法*#+ $但放射性标记法操作复杂%设备要求高$
不适合广泛应用( 最近$又有文献报道了用 >G5
JGF<测定大鼠血浆中靛玉红浓度的方法$但该方
法取血量较大!每次需取血 $f) 0F且采用外标法
进行测定*%+ ( 作者在文献的基础上$改进了测定靛
玉红血药浓度的JGF<方法$选择炔雌醇为内标物$
采用内标法以提高精密度( 本方法简捷%快速%准
确$且灵敏度高!每次仅需取血 $f 0F即可$可应
用于临床对靛玉红血药浓度的监控及其在体内药代
动力学的研究(
!材料
]!仪器!美国ZB@QCS+#* 型高效液相色谱系统
!含四元梯度泵%+**# 型二极管阵列紫外检测器%在
线真空脱气机%自动进样器%柱温箱%H0A/,QC色谱
工作站)样品干燥器!美国 GRQC.Q公司)台式高速
冷冻离心机9:b>O++>!德国:b4公司)9R2RS?B[5
QC98 型漩涡混合器!北京博威兴业科技发展有限
公司(
]!试剂和药品!靛玉红!批号 +$$+$&和炔雌醇
!批号 $$+5+$$)$($内标物$:f8f均购于中国药品
生物制品鉴定所!纯度均大于 *(g$甲醇为色谱纯
!美国ERS?QC公司$水为双蒸水$其他试剂均为分
析纯(
]&!动物!雄性 8I大鼠$体重!+$ k$ D$由中
国医学科学院药物研究所实验动物部提供$合格证
号 8
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
\/Vf)$ :SSWQ!*
9B6$ +$$
!方法与结果
]!色谱条件!OI8 <
(
色谱柱 !&f# 00i+$
00$
0$流动相为甲醇5水溶液!%r+$流速
f$ 0F-0R2
d
$检测波长 +(* 20$柱温 ) h$进样
量 +$
F(
]!靛玉红标准溶液的配制!精密称取适量靛玉
红用少量I98O溶解后$加入甲醇稀释配制成质量
浓度为 $f&$ D-Fd的靛玉红储备液( 精密吸取储
备液适量$用甲醇分别稀释成 $f$)$$f+&$$f+&($
$f&*#$$f#+$$f+&$+f&( 0D-F
d的标准系列(
]&!血清样品的制备!取 $
F靛玉红!质量浓度
$f#+$ 0D-F
d
和 $
F炔雌醇!内标物$质量浓度
f$$ 0D-F
d
置于 f 0F离心管中$用样品干燥器
在 #$ h通氮气吹干( 加入 $
F大鼠血清涡旋混合
) 0R2$再加入 #$$
F丙酮涡旋混合 ) 0R2( 离心!+
$$$ C-0R2
d
$& h+$ 0R2 后取上清液在 #$ h通氮
气吹干$加入 $
F流动相溶解$即得血清标准品溶
液( 取 +$
F进样$用JGF<进行分析$见图 (
4f阴性对照)Mf对照品和内标)
]Y!稳定性%线性范围和灵敏度!取 $$
F靛
玉红标准溶液!$f#+$ 0D-Fd 和 $$
F炔雌
醇!f$$ 0D-Fd置于离心管中$在样品干燥器
中 #$ h通氮气吹干$加入 $$
F流动相溶解$
涡旋混合 ) 0R2$密封$+ j& h保存( 按 ] 色谱
条件$分别在配制后的第 $$+$+&$)#$&($%+ ?
进样分析$测得靛玉红峰面积的 >8I)f#g$内
标炔雌醇峰面积的>8I&fg( 结果表明靛玉红
及炔雌醇溶液在 %+ ? 内性质稳定$峰形良好$且
重复性符合要求(
取 $
F靛玉红标准溶液 ! $f$)$ $f+&$
$f+&($$f&*#$$f#+$$f+&$+f&( 0D-F
d
和 $
F
炔雌醇!f$$ 0D-Fd置于 f 0F离心管中$用
样品干燥器在 #$ h通氮气吹干( 按照 ]& 项下操
作$制得血清标准品溶液( 分别取 +$
F进样$用
JGF<进行分析测定( 以靛玉红峰面积与内标物峰
面积的比值L对靛玉红浓度 K进行线性回归$得到
回归方程为#Le+f&+% (Kd$f$+) &$M+ e$f*** #)
最低定量限 )
D-F
d
(
]$!萃取回收率的测定!采用低%中%高 ) 个浓
度的靛玉红标准溶液进行回收率试验( 在离心
管中分别加入 $
F质量浓度分别为 $f+&$
$f&*#$+f&( 0D-F
d的靛玉红标准溶液和 $
F内标物溶液!f$$ 0D-Fd $用氮气吹干后
加入 $
F流动相溶解$即得未萃取的标准溶
液测定液( 取 +$
F该溶液用 JGF<测定靛玉
红及内标物的峰面积$每个浓度平行做 ) 份(
离心管中分别加入 $
F质量浓度为 $f+&$
$f&*#$+f&( 0D-F
d的靛玉红标准溶液和 $
F内
标物溶液!f$$ 0D-Fd$氮气吹干后加入 $
F
空白血清$按照 ]& 项下操作$制得萃取后的标准溶
液测定液( 取 +$
F用JGF<测定靛玉红及内标物
的峰面积$每个浓度平行做 # 份(
计算相同浓度下$萃取样品的峰面积与未萃取
样品的峰面积的比值为萃取回收率$回收率大于
*(f$(g$>8I小于 f%g(
][!精密度及准确度!在离心管中分别加入 $
F质量浓度为 $f$)$$f+&$$f#+$$+f&( 0D-
F
d的靛玉红标准溶液和 $
F内标物溶液
!f$$ 0D-F
d
$用氮气吹干后加入 $
F空白
血清$按照 ]& 项下操作$制得血清标准品溶液(
每个浓度平行做 # 份$连续测定 U$日内%日间
>8I均小于 (f$g(
]%!在药动学研究中的应用!8I大鼠 # 只体重
!+$ k$ D$用水合氯醛麻醉!;E)$ 0D-[Dd体
重后$施颈静脉插管术$恢复 ) U( 禁食 + ?后$按
+f$ 0D-[D
d体重的剂量经插管静脉注射靛玉红$
分别在给药前和给药后 +$$$$+$$)$$#$$*$$+$$
-*&-
第 ) 卷第 * 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! !!!!!! ! ! ! !
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9B6$ +$$
($ 0R2 经插管取血 $f 0F$置于离心管中( 离心
!( $$$ C-0R2
d
$& h+$ 0R2$取出血清于 d($ h
冰箱内保存$待JGF<测定( 待大鼠恢复 U 后$按
&f$ 0D-[D
d体重的剂量经插管静脉注射靛玉红$
给药后取血并进行血样处理(
取 $
F内标物溶液!f$$ 0D-Fd 置于
f 0F离心管中$在 #$ h通氮气吹干后加入给
药后大鼠血清 $
F$涡旋混合 ) 0R2( 再加入
#$$
F丙酮$涡旋混合 ) 0R2( 离心!+ $$$ C-
0R2
d
$& h+$ 0R2 后取上清液$用氮气吹干$加
入 $
F流动相溶解$取 +$
F进样$用JGF<进
行分析( 静脉给药后大鼠血清中靛玉红药5时曲
线见图 +$用 ZR22/2VR2 f$ 程序拟合并计算药动
学参数见表 (
图 +!静脉给药后大鼠血清中靛玉红药5时曲线
表 !ZR22/2VR2 f$ 程序拟合并计算药动学参数!-e#
参数
+f$ 0D-[D
d
&f$ 0D-[D
d
>
0B7
=0D-F
d
f k$f++ f*( k$f%
=+
!
=0R2
f)* k$f++ f$# k$f)
=+
7
=0R2
+f& k)f+$ &)f( kf$*
T
+
=0R2
d
$f) k$f$# $f&% k$f(
T
+
=0R2
d
$f$( k$f$ $f k$f$+
T
$
=0R2
d
$f$* k$f$+ $f$ k$f$)
4
=0F-[D
d
%&# k)+* + $% k%##
-0R2
d
$ k&f( *) k)f&%
4_<=0R2-
D
d
-0F
d
)f& k$f&) +$f% kf&(
&!讨论
在优化 JGF<色谱条件时$本研究比较了乙
腈%甲醇等多种溶剂与水按不同比例混合配制
成流动相的分离效果$结果表明选用甲醇5水溶
液!%r+ 为流动相可以有效地分离靛玉红$
且靛玉红与内标物的保留时间恰当$分离效果
良好$血浆内源性物质及其他杂质不干扰样品
的分离测定( 本研究还比较了紫外检测器与荧
光检测器测定靛玉红的差异$结果表明由于靛
玉红对荧光的吸收较弱$用荧光检测器检测靛
玉红的灵敏度相对较低$故作者选用紫外检测
器并用靛玉红的最大吸收波长 +(* 20作为检
测波长(
在优化萃取条件的过程中$作者比较了丙酮%氯
仿等溶剂的萃取效果$发现丙酮效果最好$靛玉红及
内标物峰形较好%谱图干净没有杂质峰的干扰$且回
收率较高!均大于 *(g$故选用丙酮对血清中的靛
玉红进行萃取(
$参考文献%
*+!MCBU]WC6X-EC/0IRS./cN/UB6$ +$$$ $!%# )f
*++!bR08 4$ bR0K<$ bR08 Z$ Q@BV-42@R@W0/CB.@RcR@6/T2/cQV
R2URCW]R2 UQCRcB@RcQSR2 CB@@W0/C0/UQV*X+-
+$$%$ )# +)f
*)+!9BC[/I$ 8Q?B@aVQ8$ ECRQUQV4$ Q@BV-:2?R]R@R/2 /T.6.VR25UQ5
AQ2UQ2@[R2BSQV!
UQCRcB@RcQ/TBTW2.@R/2 B2U J:\5VCQAVR.B@R/2*X+-4RUS$ +$$$ *# +$(%f
*+!bW2R[B@BN$NB@QTW1RN$4DBJ$Q@BV-:2URCW]R2 R2?R]R@SR2TVB00B5
@/C6CQB.@R/2SR2 UQVB6QU5@6AQ?6AQCSQ2SR@RcR@6*X+-HWCXG?BC0B5
./V$ +$$$$ &$# *)f
*#+!李长玲$ 籍秀娟-靛玉红及其乙基和十八烷基衍生物在动物体
内命运的比较* X+-药学学报$ *()$ ( ! # ))+f
*%+!李珂佳$ 蒋学华->G5JGF<测定大鼠静脉注射靛玉红后的血
药浓度* X+-华西药学杂志$ +$$%$ ++ !) # )))f
-$-
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$责任编辑!王亚君%
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