全 文 ：ＲＰＨＰＬＣ同时测定山西地产海红果中４种黄酮
成分的含量
梁泰刚，刘恩荔，赵承孝，班树荣，李青山
（山西医科大学 药学院，山西 太原 ０３０００１）
［摘要］　目的：建立ＲＰＨＰＬＣ同时测定山西地产海红果中芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚的含量。方法：采用Ｈｙｐｅｒｓｉｌ
Ｃ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇０２％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ
－１；检测波长３６０ｎｍ；柱温
为２５℃。结果：芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚线性范围分别为１８７～４６６７，６４０～１６００，３３３～８３３３，０８０～２０００ｍｇ·
Ｌ－１；平均回收率（ｎ＝６）分别为９９２％（ＲＳＤ２９％），９８２％（ＲＳＤ１９％），９７４％（ＲＳＤ２３％），９７２％（ＲＳＤ１３％）。结论：
该方法简便快速，结果准确可靠，可用于评价海红果的药用价值。
［关键词］　海红果；高效液相色谱；芦丁；金丝桃苷；槲皮素；山柰酚
［收稿日期］　２００９０２０３
［基金项目］　山西医科大学学生创新项目（２００４４６）
［通信作者］　李青山，教授，博士生导师。Ｔｅｌ：（０３５１）４６９０３２２，Ｅ
ｍａｉｌ：ｑｉｎｇｓｈａｎｌ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
　　海红果是蔷薇科苹果属楸子 Ｍａｌｕｓｐｒｕｎｉｆｏｌｉａ
Ｂｏｒｋｈ的果实，又名海棠果［１］。在我国主要分布在
晋、陕、蒙３省（区）交界处，如山西保德、河曲、偏关
等地，属于山西地产品种，当地民间食用海红果可以
健胃消食、增强食欲、软化血管，常作为山楂的代用
品入药［２］。为阐明海红果的药用价值，本课题组对
其进行了较为系统的研究，药理学实验表明，海红果
提取物具有明显保护心脑血管的作用［３］，其主要活
性成分为黄酮类化合物［４］。
为进一步科学评价山西地产海红果的药用价值
并达到控制其质量，本实验对其中的４种主要黄酮
类成分芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚进行了含量
测定。
１　仪器与试药
ＬＣ１０ＡＴｖｐ液相色谱仪，ＳＰＤ１０Ａｖｐ检测器（日
本岛津公司）；ＵＶ２６０紫外可见分光光度计（日本
岛津公司）；Ｎ２０００色谱工作站（浙江大学智达信息
工程有限公司）。
芦丁（００８０９７０５）、金丝桃苷（１５２１２００２０２）、槲
皮素（１００８１９９０５）对照品均购自中国药品生物制品
检定所，山柰酚对照品（Ｓｉｇｍａ公司）；甲醇为色谱
纯；水为重蒸水；其余试剂均为分析纯；
海红果采自山西保德、河曲、偏关、兴县等地，经
山西医科大学生药学教研室高建平教授鉴定为蔷薇
科植物楸子Ｍ．ｐｒｕｎｉｆｏｌｉａ的果实。
２　方法与结果
２．１　色谱条件　ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）；流动相 甲醇（Ａ），０２％磷酸水溶液
（Ｂ），流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；梯度洗脱０～７ｍｉｎ，５５％～
４０％ Ｂ；７～１４ｍｉｎ，４０％ Ｂ；１４～１５ｍｉｎ，４０％ ～２５％
Ｂ；１５～２５ｍｉｎ，２５％ Ｂ。柱温２５℃；检测波长３６０
ｎｍ；进样量２０μＬ。在此色谱条件下待测组分可达
到基线分离，见图１。
１．芦丁；２．金丝桃苷；３．槲皮素；４．山柰酚。
图１　对照品（Ａ）及样品（Ｂ）色谱图
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第３４卷第１７期
２００９年９月
　　　　　 　 　 　 　 　　　　　 　 　 　 　
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　Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００９
２．２　对照品溶液的制备
分别精密称取芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚
对照品适量，加甲醇配制成质量浓度分别为２４，９６，
５０，１２ｍｇ·Ｌ－１的对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　取干燥至恒重的海红果
粉末（６０目）约１ｇ，精密称定，置于５０ｍＬ具塞三角
瓶中，精密加入２５ｍＬ甲醇，称重，冷浸１ｈ后，超声
提取４０ｍｉｎ，放冷，补足失重，摇匀，０４５μｍ微孔滤
膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
２．４　线性关系考察　精密称取芦丁、金丝桃苷、槲
皮素和山柰酚对照品适量，用甲醇制成混合对照品
储备液，芦丁（９３ｍｇ·Ｌ－１）、金丝桃苷（３２０ｍｇ·
Ｌ－１）、槲皮素（１６７ｍｇ·Ｌ－１）、山柰酚（４０ｍｇ·
Ｌ－１），再以甲醇稀释配制系列对照品溶液，在 ２．１
色谱条件下，分别进样２０μＬ，记录色谱峰面积，以
峰面积（Ｙ）为纵坐标，质量浓度（Ｘ）为横坐标，进行
线性回归，各组分的回归方程及相关系数，见表１。
４种成分在相应浓度范围内线性关系良好。
表１　各组分线性关系测定结果（ｎ＝７）
化合物 回归方程 ｒ
线性范围
／ｍｇ·Ｌ－１
芦丁　　 Ｙ＝１２３×１０４Ｘ－１６６×１０４ ０９９９７１８７～４６６７
金丝桃苷 Ｙ＝５３９×１０４Ｘ－１１６×１０５ ０９９９５６４０～１６００
槲皮素　 Ｙ＝１０５×１０４Ｘ－２７１×１０４ ０９９９３３３３～８３３３
山柰酚　 Ｙ＝１０１×１０４Ｘ＋２７８×１０２ ０９９９６０８０～２０００
２．５　精密度试验　取混合对照品溶液，按上述色谱
条件，连续进样６次，每次２０μＬ，记录色谱峰面积。
芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山柰酚ＲＳＤ分别为１２％，
１６％，０８２％，１８％。
２．６　稳定性试验　取供试品溶液，分别于配制后
０，２，４，８，１２，２４，４８ｈ进样２０μＬ，记录峰面积，结果
芦丁、金丝桃苷、槲皮素、山柰酚ＲＳＤ分别为１７％，
１３％，１９％，２１％，表明供试品溶液在４８ｈ内稳
定。
２．７　重复性试验　精密称取同一批海红果样品粉
末６份，各１０ｇ，照供试品溶液制备方法制备供试
品溶液，测定芦丁、金丝桃苷、槲皮素和山柰酚的含
量，计算各组分含量的 ＲＳＤ分别 ２６％，１５％，
２３％，１６％。
２．８　加样回收率试验　精密称取６份已知含量的
海红果样品０５ｇ，分别精密加入芦丁、金丝桃苷、槲
皮素和山柰酚对照品适量，制备高、中、低３种浓度的
供试品溶液，测定并计算加样回收率，结果见表２。
表２　４种黄酮化合物回收率（ｎ＝６）
对照品
样品中
量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均
值／％
ＲＳＤ
／％
芦丁　　 ０３０１ ０２７９ ０５８７ １０２５ ９９２ ２９
　 ０２９８ ０２７９ ０５６９ ９７１ 　 　
　 ０３０５ ０３７２ ０６７１ ９８４ 　 　
　 ０３０７ ０３７２ ０６６５ ９６２ 　 　
　 ０２９５ ０４６５ ０７７４ １０３０ 　 　
　 ０２９６ ０４６５ ０７５１ ９７８ 　 　
金丝桃苷 １０５４ ０９６０ ２０２５ １０１０ ９８２ １９
　 １０４２ ０９６０ １９８８ ９８５ 　 　
　 １０６７ １２８０ ２３３７ ９９２ 　 　
　 １０７３ １２８０ ２３０９ ９６６ 　 　
　 １０３１ １６００ ２５９８ ９７９ 　 　
　 １０３５ １６００ ２５６９ ９５９ 　 　
槲皮素　 ０６０２ ０５０１ １０８８ ９７０ ９７４ ２３
　 ０５９５ ０５０１ １０７３ ９５４ 　 　
　 ０６１０ ０６６８ １２６８ ９８５ 　 　
　 ０６１３ ０６６８ １２５８ ９６６ 　 　
　 ０５８９ ０８３５ １３８６ ９５４ 　 　
　 ０５９２ ０８３５ １４３８ １０１３ 　 　
山柰酚　 ０１５１ ０１２０ ０２６６ ９５８ ９７２ １３
　 ０１４９ ０１２０ ０２６５ ９６７ 　 　
　 ０１５２ ０１６０ ０３０６ ９６２ 　 　
　 ０１５３ ０１６０ ０３１１ ９８８ 　 　
　 ０１４７ ０２００ ０３４１ ９７０ 　 　
　 ０１４８ ０２００ ０３４５ ９８５ 　 　
２．９　样品测定　分别精密吸取对照品溶液和供试
品溶液各２０μＬ，注入液相色谱仪，照上述色谱条
件分析测定，计算海红果中各组分的含量，结果见
表３。
表３　海红果中４种黄酮的质量分数（ｎ＝３）
ｍｇ·ｇ－１　
产地 芦丁 金丝桃苷 槲皮素 山柰酚
山西保德 ０６３５ ２１０７ １２５６ ０３４６
山西河曲 ０４２１ １６３４ １１７８ ０２０３
山西偏关 ０５１７ １９５６ ０９８５ ０２７４
山西兴县 ０３９４ １４４４ １０４２ ０２５９
３　讨论
３．１　供试品溶液的制备　分别考察了不同极性的
提取溶剂（不同浓度的甲醇、乙醇）和不同的提取方
法（超声、回流），并对提取时间进行了优化，结果发
现采用甲醇超声提取４０ｍｉｎ，４种成分均达到较高
的提取效率。
３．２　检测波长的选择　由芦丁、金丝桃苷、槲皮素
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和山柰酚对照品溶液紫外光谱可发现，以上４种物
质均在３６０ｎｍ附近有最大吸收，故选择测定波长为
３６０ｎｍ。
３．３　流动相的选择　曾尝试采用甲醇水、甲醇醋
酸水溶液、乙腈醋酸水溶液等系统进行等度洗脱，
但在短时间范围内难以达到４种组分完全分离，最
终选用甲醇０２％磷酸水溶液梯度洗脱，可使４种
成分完全分离。
３．４　由测定结果可知　海红果样品中，金丝桃苷含
量最高，山柰酚含量较低。其中山西保德产海红果
各组分含量均高于其他产地。
［参考文献］
［１］　中国植物志编辑委员会．中国植物志．第３６卷［Ｍ］．北京：科
学出版社，１９７７：３８４．
［２］　刘如良．中药材互掺与代用现象调查［Ｊ］．中医药学报，２００２，
３０（２）：３９．
［３］　赵亮．海红果药用价值的初步研究［Ｄ］．太原：山西医科大学，
２００６．
［４］　赵亮，刘恩荔，李青山，等．紫外分光光度法测定海红果中总黄
酮的含量［Ｊ］．山西医科大学学报，２００６，３７（２）：１６９．
ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｉｎＭａｌｕｓｐｒｕｎｉｆｏｌｉａｆｒｏｍ
ＳｈａｎｘｉｐｒｏｖｉｎｃｅｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＬＩＡＮＧＴａｉｇａｎｇ，ＬＩＵＥｎｌｉ，ＺＨＡＯＣｈｅｎｇｘｉａｏ，ＢＡＮＳｈｕｒｏｎｇ，ＬＩＱｉｎｇｓｈａｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ０３０００１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｕｔｉｎ，ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎａｎｄ
ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌｉｎＭａｌｕｓｐｒｕｎｉｆｏｌｉａｆｒｏｍＳｈａｎｘｉｐｒｏｖｉｎｃｅｉｎＣｈｉｎａ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），ｕｓｉｎｇａｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０２％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｔｈｅｆｌｏｗ
ｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ３６０ｎｍａｎｄｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｃｏｌｕｍｎｗａｓ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｓ
ｏｆｒｕｔｉｎ，ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ，ｑｕｅｒｃｅｔｉｎａｎｄｋａｅｍｐｆｅｒｏｌｗｅｒｅ１８７４６６７ｍｇ·Ｌ－１，６４０１６００ｍｇ·Ｌ－１，３３３８３３３ｍｇ·Ｌ－１，０８０
２０００ｍｇ·Ｌ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝６）ｏｆｔｈｅｆｏｕｒｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｗｅｒｅ９９２％ （ＲＳＤ２９％），９８２％ （ＲＳＤ
１９％），９７４％ （ＲＳＤ２３％），９７２％ （ＲＳＤ１３％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｃａｎｂｅ
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