全 文 ：!制剂与炮制!
以胆盐=磷脂混合胶束制备技术提高
葛根素溶解度的研究
何典鸿! 韩立炜!! 王媛! 倪健! 杜守颖
北京中医药大学 中药学院! 北京 $$$*# $摘要%!目的&制备葛根素混合胶束$以增加葛根素在水中的溶解度) 方法&以去氧胆酸钠和卵磷脂为辅料$采用正交试 验制备混合胶束) 以混合胶束的溶解度&形态&粒径等为指标$筛选葛根素混合胶束的最佳制备工艺) 结果&优选出的最佳制 备工艺为摩尔比 )i*i& 的葛根素&卵磷脂及去氧胆酸钠$溶于甲醇4氯仿!i中$)$ h旋转蒸发至干) 最佳工艺所得混合胶 束粒径为!#&g( p) 1/!体积径*溶解度为 $g( D.`e$是葛根素原料溶解度!$g$)#& D.`e的 **g) 倍) 结论&胆盐= 磷脂混合胶束制备技术能显著提高葛根素的溶解度) $关键词%!葛根素*混合胶束*胆盐*磷脂*增溶 $稿件编号%!*$$ $*$) $$# $基金项目%!国家自然科学基金项目!)$&$$ #通信作者%!!韩立炜$副教授$硕士生导师$主要从事中药新制剂 与新技术研究$RMS#! $$(&%)(##$U4/BNS#\0?S+2*#g-./ $作者简介%!何典鸿$硕士生$主要从事中药新制剂与新技术研究$ U4/BNS#?MQNB1?.1Ds*$$ #25B?..g-./g-1
!!葛根素是常用中药葛根中的主要有效成分$被 广泛用于心血管疾病的治疗) 因其水溶性差&口服 给药不易被吸收$故多以静脉注射方式给药) 但目
前临床上使用的葛根素注射液存在较严重的不良反
应$有研究者认为其不良反应可能与注射剂中添加 的助溶剂丙二醇有关) 因此有必要开发生物利用度 高的葛根素口服制剂或低毒的注射制剂$以减少或
避免其不良反应) 而要达到此目的$则须首先提高 葛根素的溶解度) 胆盐=磷脂混合胶束是一种生物相容性载体$可
显著提高难溶性药物的溶解度+, ) 该系统在国外
多用于难溶性药物的增溶$而在国内研究较少) 本 实验旨在通过混合胶束的制备$提高葛根素的溶
解度)
!材料
葛根素对照品!中国药品生物制品检定所$批 号$%*4* $$*葛根素原料药!四川省广汉市 生化制品有限公司$纯度 7%g(j*大豆卵磷脂 8$$ !O.5BA?.OA?B@NQ5S-?.SN1M$8E<$德国 N`A.NQ公司$批号 %7$4#$磷脂酰胆碱质量分数为 7%g&j*去 氧胆酸钠!O.QNT/QM.65-?.SN-BN-Q$8I<$美国 3/4 CMO-.公司$纯度 77gj*分析纯甲醇&氯仿!北京
化工厂*色谱纯甲醇!美国 I:93公司*纯净水
!杭州娃哈哈有限公司)
高效液相色谱仪!3DNSM1@ $$OMCNMO*8YG4) 循环水多用真空泵!郑州杜甫仪器厂*>U4*(#3 旋转蒸发仪!上海亚荣生化仪器厂*G4*#$ 恒温水 浴锅!上海亚荣生化仪器厂*($4* 离心沉淀器!上 海手术器械厂*电子分析天平!8BC@.CNTOGR**&8* 透射电子显微镜 !VUL`*)$$ 日本*;N-./A4)($= _`8激光粒度测定仪!美国;N-./A公司) !方法与结果 U!含量测定方法 UU!色谱条件!色谱柱为依利特 LI8< ( !&g# //m*$ //$/*流动相 甲醇4水!*i%*柱 温室温*流速 /`./N1e*检测波长 *$ 1/*进样
体积 $)` 在选定的色谱条件下$空白胶束对测
定无干扰) 葛根素的保留时间为 # /N1左右)
UU!标准曲线的制备!精密称取葛根素对照品
*g /D置 $/` 量瓶中$用流动相定容$精密量取 /` 于 /` 量瓶中$以流动相定容$即得质量浓度为$g$D.` e的葛根素对照品溶液$$g& /微孔滤 膜滤过$备用) 分别精密吸取上述溶液 *$&$($*$
#$*$

$`按照 UU 色谱条件进样测定$记录各样
品对应色谱峰的峰面积) 以进样量 J!

D为横坐
标$峰面积9为纵坐标$绘制标准曲线$得线性回归 .7). 第 ) 卷第 期 *$$年 # 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [.Sg)$ :OOTM!
VT1M$*$$方程9f& #g%Je*$g*$%$0f$g777 ($线性范围
$g$* k$g* D) U!葛根素混合胶束的制备 根据参考文献+*,$采用共沉淀法制备混合胶
束$操作方法#取葛根素原料药$按比例加入去氧胆
酸钠&大豆磷脂$用甲醇4氯仿!i溶解$在一定温
度下旋转蒸发除去有机溶剂$加入蒸馏水溶解$
& $$$ C./N1 e离心 /N1$除去不溶物$即得药物 的混合胶束溶液) U&!葛根素混合胶束制备工艺优选 按` 7 !) & 正交表安排试验$以所得混合胶束中 葛根素的溶解度为指标$考察药物与辅料摩尔比 !4&卵磷脂与去氧胆酸钠摩尔比!I&旋转蒸发除 去有机溶剂时的加热温度!) 个因素不同水平对 制备工艺的影响) 每份试验葛根素的投料量为 $g D!即 g* //.`$按 U 项下方法制备葛根素混合 胶束$加水$$ /` 成过饱和溶液$磁力搅拌至溶解 平衡后$用 $g& /微孔滤膜滤过$按 UU 项下方
法测定葛根素的溶解度$优选最佳制备工艺) 因素 水平安排见表 ) 表 !葛根素混合胶束制备的因素水平 水平 4 I i *i )$
* i* i &$) i) i*$
U_!正交试验结果分析
以溶解度为考察指标的葛根素混合胶束正交试
验结果见表 *$)) 表 *!葛根素混合胶束正交试验结果 D.`e ;., 溶解度$g$&$ $*$g)( 7
) $g*%* ) &$g$# #$g$7 ) #$g(
% $g$)) *
( $g( 7$g#($& 方差分析表明$因素4$I$对葛根素的溶解度
均无显著性影响) 直观分析结果表明$各因素对葛 根素混合胶束增溶效果影响的先后顺序是 !!!!! 表 )!葛根素混合胶束制备的方差分析 方差来源 离差平方和 方差 / 4$g$&7 *$g$*& #$g7%$I$g7 ( $g*7 7$g*&&
$g$( ( $g$*7 & g7
3!误差 $g$$($g$* & !!注#Af**/$g$!*$*
f7g $$$/ $g$!*$* f77g$$
Irr4$最佳制备工艺为 4 * I )$即 # 号试验条
件) 为使试验结果更加准确可靠$混合胶束的最佳 制备工艺还应结合胶束的粒径&形状等测定结果进 一步验证) U$!葛根素混合胶束粒径测定
将混合胶束稀释后$采用 ;N-./A4)($ 激光粒度
测定仪测定粒径) 具体方法#以 YM4;M激光!
%
f
#)) 1/为光源!空气冷却$仪器功率为 % /X$室
温下$取样品适量$按一定稀释比以纯净水稀释样
品$调至仪器显示电信号约为 )$$后$放入样品池$分别测定正交试验所得 7 份样品$得到 FBTOONB1 粒
径分布图与 ;N-./A 多波形分布图) 图谱显示了粒
子的强度径!E8I
:;R
$N1@M1ON@54+MND?@MQ ABC@N-SMONWM& 体积径!E8I [L`$d.ST/M4+MND?@MQ ABC@N-SMONWMQNO@CN4
\T@N.1及数量径!E8I
;]9
$1T/\MC4+MND?@MQ ABC@N-SM ONWMQNO@CN\T@N.1 +),的分布情况$当三者分布一致时$体系最均匀&稳定) 其中 # 号试验制得的混合胶束 的FBTOONB1 粒径分布图中的E8I :;R$E8I
[L`
$E8I ;]9 接近重合$;N-./A 分布图中的 E8I
:;R
$E8I [L`$
E8I
;]9
呈现单峰且重合性较好) 而其他各号试验所
得样品的 FBTOONB1 分布图显示各样品的 E8I
:;R
$E8I [L`$E8I
;]9
的平均粒径相差很大$;N-./A 分布 图中的E8I :;R$E8I
[L`
$E8I ;]9 呈现多峰) 说明 # 号 试验所得混合胶束的均匀性和稳定性在 7 个工艺中 最好$其余各号试验所得混合胶束样品粒度不均匀$体系稳定性差$不宜选用$故应选用 # 号试验条件作 为最佳制备条件) U)!葛根素混合胶束的形态考察 取混合胶束溶液适量$加入一定量蒸馏水稀释&
混匀$用注射器吸取适量滴在附有支持膜的铜网上$
吸附约 /N1 后$用滤纸吸干剩余液体$用注射器滴
加适量 *j磷钨酸$染色 ) k /N1后$用滤纸吸干剩
余液体$适当灯照干燥$ /N1) 用透射电子显微镜
观察并拍照$其中 # 号试验所得混合胶束的电镜观 察结果见图 ) .#7). 第 ) 卷第 期 *$$年 # 月 !!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! ! [.Sg)$ :OOTM!
VT1M$*$$图 !正交试验 # 号样品透射电镜测定! m$ $$据文献报道$混合胶束的结构主要有以下几种 形式+&4%, #混合盘型!/N6MQ QNOZ /.QMS&球型!DS.\T4 SBCO?BAM/.QMS&柱型 !C.Q4SNZM/.QMS&蠕虫型 !+.C/4SNZM/.QMS等) 本试验电镜结果显示 # 号混 合胶束结构为层状&混合盘形及球形$形态结构与文 献相符) 且粒子大小均一&形态一致$比其他各号试 验所得样品均匀$进一步说明可选择 # 号试验条件 作为最佳制备工艺条件$即摩尔比为 )i*i& 的葛根 素&卵磷脂及去氧胆酸钠$溶于甲醇4氯仿!i中$ )$ h下旋转蒸发至干) &!讨论 预试验中考察了单用卵磷脂或胆盐对葛根素的 增溶作用$其中单用胆盐增溶效果不佳$单用卵磷脂 虽有一定增溶作用$但胶束溶液不够澄清) 卵磷脂 配合胆盐使用后增溶作用明显增强$且胶束溶液澄 明度较好) 为使增溶后的葛根素可广泛用于口服和 注射制剂$故采用混合胶束作为增溶手段) 试验中$胆盐选择了猪胆酸钠&猪去氧胆酸钠进 行预试$结果表明$使用猪去氧胆酸钠更能增进卵磷 脂对葛根素的增溶效果) 在选择卵磷脂时发现$卵 磷脂中磷脂酰胆碱含量越高$混合胶束越容易制备$ 且增溶效果越好) 由于卵磷脂受热后不够稳定$且 预试验中发现温度对旋蒸时混合胶束的成膜性有较 大影响$所以正交试验中以/加热温度0作为一个影 响因素进行考察) 正交试验中亦考察了包封率$各 试验所得混合胶束的包封率介于 #7j k%&j!以 $g( /微孔滤膜滤过后测定$差异不显著) 膜水 化时$常温下加少量水!) k& /` 即可溶解$加水量 减少时$混合胶束则易呈胶冻状*最佳工艺制备的胶 束溶液加水稀释时一直可以保持均匀澄清状态) 通常难溶性药物成分的纯度越高$其溶解度越 低) 本课题组使用的葛根素纯度为 7%g(j$测得 其溶解度为 $g$)# & D.`e) 在正交试验中$有 份试验所得混合胶束中葛根素的溶解度比原料药 低$可能是因为该号试验条件制得的胶束粒径较大$ 用 $g& /微孔滤膜过滤时已被滤除$因此在溶液 中的量减少) 通过对混合胶束溶解度&形态&粒径等 方面的考察$确定 7 个正交试验中 # 号试验条件为 葛根素胆盐=磷脂混合胶束的最佳制备工艺$该工艺 辅料用量相对较少$且所得胶束体积径为!#&g( p ) 1/$其水溶液均一透明$粒径分布集中$表明该 胶束系统比较稳定) 即使用于静脉注射$其粒径范 围亦符合要求) 用 # 号处方制备葛根素混合胶束$ 测定胶束中的葛根素在水中溶解度为 $g( D. ` e $是本试验所用葛根素原料溶解度的 **g) 倍$说 明胆盐=磷脂混合胶束可显著提高葛根素的溶解度) 本试验采用混合胶束制备技术提高了葛根素在 水中的溶解度$在今后试验中若能证明混合胶束可 提高葛根素的生物利用度$则可为其进一步开发成 口服制剂奠定基础*若能证明混合胶束可以减轻葛 根素静脉注射时的不良反应$则亦可用于注射剂的 改良) $参考文献% +,!9B@NSB93$8TNO@./BB9,:1@CBdM1.TOACM/MQN-B@N.1 +N@? QNBWM4 AB/g3-./ABCNO.1 \M@+MM1 @+.dM?N-SMO+V,,31BMO@?MONB$7(&$ )7!7#(%7, +*,!YB5B@3SZB14L15TZOMS$J5.1D?MM8.1,9N6MQ /N-MSMOBOAC.SNA.4 O./MOP.C@?MO.ST\NSNWB@N.1 .P@M1NA.ONQM+V,,E?BC/>MO$77*$7 !*##, +),!郑少辉$邓意辉,动态光散射技术在静脉注射亚微乳剂粒径评 价中的应用+V,,中国药剂学杂志$*$$ $)!)#*#, +&,!I.d` N-?@M1\MCD$>.\MC@V>$UQ+BCQ 3I,8.ST\NSNWB@N.1 .PA?.O4 A?.SNANQO\5QM@MCDM1@OO@CT-@TCBSB1Q ZN1M@N-BOAM-@O+V,,GN.-?N/ GN.A?5O3-@B$7()$%)%!*#*(, +,!9tMSMCJ,8@CT-@TCBSQN/.CA?NO/.P\NSMOBS@=SM-N@?N1 /N6MQ /N4 -MSMO,3A.OON\SMCMDTSB@.C5/M-?B1NO/P.C-?.SMO@MC.SO.ST\NSN@5 N1 \NSM1 K4CB5O@CT-@TCMB1BS5ONO+V,,GN.-?M/NO@C5$7($*$!*#
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第 ) 卷第 期
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