全 文 ：ＲＰＨＰＬＣ测定青海地区野生藏药线叶龙胆中４种
主要活性成分的含量
张小龙１，２，张海涛１，２，纪兰菊１
（１．中国科学院 西北高原生物研究所，青海 西宁 ８１０００８；
２．中国科学院 研究生院，北京 １０００４９）
［摘要］ 目的：建立反相高效液相色谱法同时测定青海地区野生线叶龙胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷
的含量。方法：ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈（Ａ）０１％磷酸水溶液（Ｂ），梯度洗脱，洗脱条件０００～
２７００ｍｉｎ，１０％～１７％Ａ；２７００～４５００ｍｉｎ，１７％ ～３３％Ａ；４５００～４５０１ｍｉｎ，３３％ ～１００％Ａ；４５０１～５５００ｍｉｎ，１００％ ～
１００％Ａ；体积流量１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２４０ｎｍ，柱温２５℃。结果：獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷和异荭草苷均达到基
线分离，分别在２１２～１０６，２４６～１２３，２４７～１２４，０３０９～１５４ｇ·Ｌ－１线性良好，ｒ分别为 ０９９９４，０９９９７，０９９９２，
０９９９５。结论：该方法快速、准确、重复性好，为该类药材的质量控制提供了理论依据。
［关键词］ ＲＰＨＰＬＣ；獐牙菜苦苷；龙胆苦苷；獐芽菜苷；异荭草苷；含量
［收稿日期］ ２００９０１０６
［基金项目］ 青海省科技厅重点攻关项目（２００４Ｎ１４２）
［通信作者］ 纪兰菊，Ｔｅｌ：（０９７１）８０１００９２，Ｅｍａｉｌ：Ｊｉｌａｎｊｕ＠ｅｙｏｕ．
ｃｏｍ
线叶龙胆 ＧｅｎｔｉａｎａｌａｗｒｅｎｃｅｉＢｕｒｋ又称蓝花龙
胆，在藏药中作为“邦见温保”使用［１］。《晶珠本草》
记载：邦见治毒病，各种热症，喉炎热闭；按花色分为
白、蓝和黑三类，分别是“邦见嘎保”、“邦见温保”、
“邦见那保”［２］。龙胆植物所含的主要活性成分为
裂环环烯醚萜苷类［３］，如獐牙菜苦苷（ｓｗｅｒｔｉａｍａ
ｒｉｎ）、龙胆苦苷（ｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ）、獐牙菜苷（ｓｗｅｒｏ
ｓｉｄｅ）等，及黄酮类，如异荭草苷（ｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎ）等。我
国是线叶龙胆的原产国，而青海地区是该药材的重
要产地，但目前尚未有关于青海地区野生线叶龙胆
中主要活性成分含量测定的报道。本文应用
ＨＰＬＣ，对青藏高原主要分布地区的野生线叶龙胆进
行了系统采集，并对其主要的活性成分Ｓ１獐牙菜苦
苷（ｓｗｅｒｔｉａｍａｆｉｎ）、Ｓ２龙胆苦苷（ｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ），Ｓ３
獐牙菜苷（ｓｗｅｒｏｓｉｄｅ）及 Ｓ４异荭草苷（ｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎ）的
含量进行了定量分析，为该药材的质量控制及新药
源的研究提供一定的科学依据。
１ 材料
ＬＣ１０ＡＴＶＰ二元泵（岛津公司）；Ｒｈｅｏｄｙｎｅ７７２５
进样器（美国）；ＳＰＤＭ１０ＡＶＰ二极管阵列检测器（岛
津公司）；ＣｌａｓｓＶＰ液相色谱工作站（岛津公司）；
ＭｉｌｉＱ超纯水装置；ＡＴ１３０柱温箱（天津）；ＡＥ２４０电
子天平（Ｍｅｔｌｅｒｔｏｌｅｄｏ公司）；ＺＭ震动超微粉碎机；
２２００Ｂ超声波仪。乙腈（山东禹王试剂公司色谱纯）；
甲醇（天津市百世化工公司化学试剂厂分析纯）；磷酸
（天津市百世化工公司化学试剂厂分析纯）；水为重蒸
水并经０４５μｍ滤膜过滤。獐牙菜苦苷（中国药品生
物制品检定所，批号０７８５２００２０３）；龙胆苦苷、獐芽菜
苷、异荭草苷为中国科学院西北高原生物研究所孙洪
发教授赠送，纯度均大于９８％。
依据《藏药志》和《青海经济植物志》的有关记
载，及民族用药的历史沿革、线叶龙胆的特征生境和
野外实际考察情况，分别确立了 １８处海拔分布在
３０４０～４３８０ｍ具有代表性的地点，进行系统采集，
采集时间为２００７年９月。所采样品均由中国科学
院西北高原生物研究所卢学峰副研究员鉴定。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ）；流动相乙腈（Ａ）０１％磷酸水溶液（Ｂ）；梯
度洗脱，洗脱条件０００～２７００ｍｉｎ，１０％ ～１７％Ａ；
２７００～４５００ｍｉｎ，１７％ ～３３％Ａ；４５００～４５０１
ｍｉｎ，３３％ ～１００％Ａ；４５０１～５５００ｍｉｎ，１００％ ～
１００％Ａ；流速为１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２４０ｎｍ；柱
温２５℃；进样体积５μＬ。
２．２ 对照品溶液的制备 分别精密称取适量獐芽
菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷和异红草苷用甲醇定容
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至１０ｍＬ，配成分别为０５３０，０６１５，０６１８，００７７２
ｇ·Ｌ－１的对照品溶液。
２．３ 供试品的制备 取线叶龙胆全草，粉碎，过筛，
混匀后，精密称取２５ｇ置具塞锥形瓶中，加入甲醇
５０ｍＬ，称重，超声３０ｍｉｎ，放至室温，再次称重，用甲
醇补足减失的质量，摇匀，取约２ｍＬ用Ｃ１８硅胶小柱
滤去色素，再过０４５μｍ滤膜，弃去初滤液，收集续
滤液为供试品溶液。
２．４ 线性关系 精密吸取对照品溶液４，８，１２，１６，
２０μＬ进样，ＨＰＬＣ分析，以峰面积对绝对进样量求
得回归方程。得４种活性成分的回归方程、相关系
数及线性范围，见表１。
表１ ４种成分的回归方程、相关系数及线性范围
活性成分 质量浓度／ｇ·Ｌ－１ 线性范围／μｇ 回归方程 ｒ
Ｓ１ ０５３０ ２１２～１０６ Ｙ＝９３３×１０５Ｘ＋１３９×１０５ ０９９９４
Ｓ２ ０６１５ ２４６～１２３ Ｙ＝１１２×１０６Ｘ＋１５５×１０５ ０９９９７
Ｓ３ ０６１８ ２４７～１２４ Ｙ＝５２１×１０５Ｘ＋１８３×１０４ ０９９９２
Ｓ４ ００７７２ ０３０９～１５４ Ｙ＝２０９×１０６Ｘ－３５３×１０３ ０９９９５
２．５ 精密度试验 取同一份对照品溶液，按上述色
谱条件连续进样 ５次，以峰面积计算可得 Ｓ１，Ｓ２，
Ｓ３，Ｓ４的ＲＳＤ分别为１１％，１８％，３０％，２７％。
２．６ 重复性试验 将同一份全草样品用上述供试
品溶液的制备方法制备５份，按上述色谱条件进行
ＨＰＬＣ分析。Ｓ１，Ｓ２，Ｓ３，Ｓ４的 ＲＳＤ分别为 ３０％，
２０％，１３％，３３％。
２．７ 稳定性试验 将同一份样品按供试品溶液
的制备方法制备后，每 ４ｈ测定 １次，共测定 ５
次，得 Ｓ１，Ｓ２，Ｓ３，Ｓ４的 ＲＳＤ分 别 为 ３２％，
３１％，２８％，２３％。说明这 ４种活性成分在
２０ｈ内稳定。
２．８ 回收率试验 取已知含量的互助北山采集的
样品５份，分别加入一定量的Ｓ１，Ｓ２，Ｓ３，Ｓ４对照品，
按２３项下制备供试品，进样量５μＬ，以上述色谱
条件进行ＨＰＬＣ分析，计算回收率，结果见表２。
２．９ 样品测定 按供试品溶液的制备方法，对所有
线叶龙胆样品进行了定量提取，在限定的色谱条件
下进行了４种活性成分的含量测定。取峰面积，按
标准曲线计算含量，求平均值，结果见表３，对照品
与样品色谱图如图１所示。
３ 讨论
提取溶剂的选择，经过５０％乙醇、９５％乙醇、甲
醇和丙酮等提取溶剂的对比试验，结果表明甲醇提
取时４种苷含量相对较高，效果最好，操作简单。
测定结果表明，１８处采集地的样品中，龙胆苦
苷的质量分数在２００％～５０８％，均大于１％，高于
２００５年版《中国药典》中对龙胆药材质量标准的
要求［４］。
值得注意的是，不同地区无论海拔是否相同，线
表２ ４种活性成分的加样回收率
化合物
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
Ｓ１ １２６ １２１ ２４６ ９８９ ９９９ ３０
１３１ １２８ ２６２ １０２１
１２４ １２２ ２４５ ９９４
１２６ １２３ ２４７ ９８５
１２８ １２５ ２５４ １００７
Ｓ２ １５２ １４６ ３０１ １０１８ ９９２ ３３
１５８ １４３ ２９９ ９７９
１５０ １３９ ２８６ ９８５
１５２ １２８ ２７８ ９８１
１５６ １３１ ２８６ ９９７
Ｓ３ ０２９１ ０３００ ０５８５ ９８１ ９９０ ３１
０３０２ ０３１０ ０６０４ ９７２
０２８５ ０２８０ ０５６８ １００９
０２９１ ０２７０ ０５５７ ９８６
０２９６ ０３２０ ０６１７ １００３
Ｓ４ ０１１７ ０１１０ ０２２９ １０２１ １００５ ２７
０１２２ ０１１０ ０２３２ ９９５
０１１５ ０１３０ ０２４７ １０１３
０１１７ ０１１０ ０２２８ １００９
０１２０ ０１８０ ０２４８ ９８７
Ｓ１獐牙菜苦苷；Ｓ２龙胆苦苷；Ｓ３獐牙菜苷；Ｓ４异红草苷。
图１ 对照品（Ａ）及线叶龙胆样品（Ｂ）的ＨＰＬＣ图
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表３ １８批样品中４种活性成分的质量分数（ｎ＝３）
％
Ｎｏ． 采集地点 海拔／ｍ Ｓ１ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ 合计
１ 泽库县麦秀林场 ３０４０ １０１ ３６３ ０９４１０４７３６０５
２ 互助北山 ３０９０ ２４７ ２９９ ０５７００２３１６２６
３ 海东青沙山 ３３００ ０１６２２７１ １３３ ０２１０４４４
４ 囊谦扎曲 ３４５０ ２１６ ３２２ ０１９４０２３０５８０
５ 兴海县河卡山 ３４９０ ３６０ ２６０ １３８ ０３０１７８８
６ 黄南州河南县 ３５６０ ０６０２２００ １６３ ０２６１４４９
７ 玉树县 ３５６０ ０３８０２８２ １３７ ０４３１５４３
８ 兴海县温泉乡 ３７３０ ０３４１４７７ ０７８００５９１６４８
９ 囊谦县西沟 ３７３０ － ５０８ ０４３２０６２１６１３
１０ 果洛州玛可河林场 ３７４０ １４７ ２１５ １４２ ０４４２５４８
１１ 玉树觉拉乡 ３９４０ ２３７ ２１１ ０９３３０３０４５７２
１２ 玉树军工镇 ３９９０ １４２ ３７０ ０６９００４３１６２４
１３ 玉树小野马岭 ４２８０ ０１９３３５４ １１３ ０５５４５４２
１４ 玉树通天河 ４２８０ ２６４ ３９３ ０７４３０１９４７５１
１５ 黑马河 ４３２０ ２１２ ２３８ ０９５１０１７３５６２
１６ 刚察县 ４３００ ０５７０３１２ ２９３ ０３５２６９７
１７ 玉树下拉秀 ４３８０ ３９９ ２４１ ０９４１０２１１７５５
叶龙胆中４种苷的含量差异较大，因此在线叶龙胆
入药时，应考虑产地因素。
本研究对青海地区的野生线叶龙胆资源进行了
较为全面的野外实地考察，首次进行了系统的采集、
分析，１８批样品基源、生境明确，４种活性成分的含
量分析为本地区的线叶龙胆资源开发利用提供了一
定的参考依据。
同时，测定结果表明，本研究所建立的线叶龙胆
中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷及异荭草苷４种
活性成分的ＨＰＬＣ含量测定方法，操作简便，结果准
确、稳定，且重复性好，为藏药线叶龙胆含量分析、品
质评价及质量标准的建立提供了简便、准确、快速、有
效的分析方法，同时，为其深度开发提供科学依据。
［参考文献］
［１］ 杨永昌，何廷农，卢生莲，等．藏药志［Ｍ］．西宁：青海人民出版
社，１９９１：１８６．
［２］ 刘海青，刘亚蓉，朱志强，等．青海省龙胆属药用植物资源概况
［Ｊ］．中药材，１９９５，１８（３）：１１９．
［３］ 纪兰菊，孙洪发，丁经业，等．青藏高原四种龙胆植物化学成分
初步研究［Ｊ］．高原生物学（集刊），１９９２，１１（６）：１１３．
［４］ 中国药典．一部［Ｓ］．２００５：６４．
ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｗｉｌｄＧｅｎｔｉａｎａｌａｗｒｅｎｃｅｉ
ｆｒｏｍＱｉｎｇｈａｉｐｒｏｖｉｎｃｅｂｙＲＰＨＰＬＣ
ＺＨＡＮＧＸｉａｏｌｏｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧＨａｉｔａｏ１，２，ＪＩＬａｎｊｕ１
（１．ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｔｅａｕＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｉｎｉｎｇ８１０００８，Ｃｈｉｎａ；
２．ＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００４９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｗｅｒｔｉａｍａｒｉｎ，ｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ，
ｓｗｅｒｏｓｉｄｅ，ｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎｉｎＧｅｎｔｉａｎａｌａｗｒｅｎｃｅｉｆｒｏｍＱｉｎｇｈａｉｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＲＰＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌ
ｕｍｎｗａｓｔｈｅＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）．Ｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｓｏｌｖｅｎｔｓｙｓｔｅｍｗａｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ（Ａ）
ａｎｄ（０１％ Ｈ３ＰＯ４）ｗａｔｅｒ（Ｂ）．Ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗａｓａｓｆｏｌｏｗｓ：０００２７００ｍｉｎ，１０％１７％（Ａ）；２７００４５００ｍｉｎ，１７％
３３％ （Ａ）；４５０１５５００ｍｉｎ，１００％１００％（Ａ）．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｖｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２４０ｎｍ；ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１ｍＬ·ｍｉｎ－１；ｃｏｌｕｍｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｓｅｔａｔ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｓｗｅｒｔｉａｍａｒｉｎ，ｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ，ｓｗｅｒｏｓｉｄｅａｎｄｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎｗｅｒｅｂａｓｅｉｓｏｌａｔｅｄ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｈａｄ
ｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙｗｉｔｈｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｓｏｆ２１２１０６ｍｇ·ｍＬ－１ｆｏｒｓｗｅｒｔｉａｍａｒｉｎ（ｒ＝０９９９４），２４６１２３ｇ·Ｌ－１ｆｏｒｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ（ｒ＝
０９９９７），２４７１２４ｇ·Ｌ－１ｆｏｒｓｗｅｒｏｓｉｄｅ（ｒ＝０９９９２）ａｎｄ０３０９１５４ｍｇ·ｍＬ－１ｆｏｒｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎ（ｒ＝０９９９５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：
Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｒａｐｉｄ，ｐｒｅｃｉｓｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅ，ｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＧ．ｌａｗｒｅｎｃｅｉ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＲＰＨＰＬＣ；ｓｗｅｒｔｉａｍａｒｉｎ；ｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｏｓｉｄｅ；ｓｗｅｒｏｓｉｄｅ；ｉｓｏｏｒｉｅｎｔｉｎ；ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ
［责任编辑 周驰］
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Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２２
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