全 文 ：不同树龄银杏叶在不同季节中总银杏酸的
动态变化规律
鞠建明１，黄一平１，钱士辉１，钱大玮１，段金廒２，曹福亮３
（１．江苏省中医药研究院，江苏 南京 ２１００２８；
２．南京中医药大学，江苏 南京 ２１００４６；３．南京林业大学，江苏 南京 ２１００３７）
［摘要］　目的：探索栽培种植的不同树龄银杏叶在不同生长季节中总银杏酸的含量变化规律。方法：采用ＨＰＬＣ测定银
杏叶中总银杏酸的含量。色谱条件为ＡｌｔｉｍａＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相甲醇１％冰醋酸水溶液（９０∶１０），流
速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长３１０ｎｍ，柱温３５℃，进样量２０μＬ，外标法计算含量。结果：银杏叶中总银杏酸含量范围为
０４８％～２５１％。不同采收期银杏叶中总银杏酸含量呈先上升后逐渐下降趋势，５月底６月初含量最高；不同树龄银杏叶中
总银杏酸含量树龄大的较低，树龄小的较高。结论：这一变化规律为确定银杏叶的采收期提供了科学依据。
［关键词］　银杏叶；总银杏酸；ＨＰＬＣ；树龄；采收期；变化规律
［收稿日期］　２００８０６２５
［基金项目］　国家“十五”科技攻关计划重点项目（２００４ＢＡ７２１Ａ２０）
［通信作者］　鞠建明，Ｔｅｌ：（０２５）８５６３９６４０，Ｅｍａｉｌ：ｊｍ４０５＠ｓｉｎａ．
ｃｏｍ
　　银杏叶为银杏科植物银杏ＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＬ．的干
燥叶。具有扩张血管、改善脑循环、抑制血小板活化
因子（ＰＡＦ）的作用，用于冠心病、脑血栓、哮喘和神
经系统疾病的治疗。银杏叶中除含黄酮类（ｆｌａ
ｖｏｎｏｉｄｓ）和萜烯内酯类（ｔｅｒｐｅｎｅｓ）活性化合物外，还
含有另一类具有重要生理活性的组分［１］银杏酸，具
有致敏性、细胞毒性和免疫毒性等作用，是银杏叶、
银杏叶提取物（ＥＧｂ）及其制剂中的主要毒性物质，
对人类健康存在潜在危害，因此银杏酸的限量是评
价银杏叶制剂质量的关键指标之一［２］。
《中国药典》２００５年版一部银杏叶质量标准仅
对其活性成分总黄酮醇苷和总内酯进行了含量测
定，而对其毒性成分总银杏酸尚未做限量规定。本
研究参考有关文献［３５］，制定了银杏叶中总银杏酸的
ＨＰＬＣ含量测定方法，对不同树龄银杏叶在不同生
长季节中总银杏酸进行了含量测定，分析了银杏酸
的动态变化规律，为叶用银杏的合理采收和质量控
制提供了科学依据。
１　材料
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（Ａｌｉａｎｃｅ２６９５四元泵
及自动进样系统，２９９６二极管阵列检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ
色谱工作站），ＫＱ２５０Ｅ型医用超声波清洗器（昆山
市超声仪器有限公司），ＭｉｌｉｐｏｒｅＭｉｌｉＱ超纯水制
备仪（美国），ＭＥＴＴＬＥＲ１／１万及１／１０万电子天平
（瑞士）。
白果新酸（批号１１１６９０２００５０１，中国药品生物
制品检定所，供含量测定用）；总银杏酸（批号
１１１５９４２００５０１）由中国药品生物制品检定所提供，
供鉴别用；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
银杏叶样品采自国家中药材ＧＡＰ基地“银杏叶
ＧＡＰ邳州示范基地”，该基地引进法国规范化种植
技术，具有规范的采叶条件。本研究采集了二至六
年生不同树龄的银杏在５－１０月不同采集时间的银
杏叶样品５０份。银杏叶采集方法为在每种树龄的
试验田中随机采样６株，将６株树叶全部采下后混
匀，置鼓风干燥箱中５０℃干燥，真空包装，避光保
存，待样品全部采集后同时测定，避免了背景干扰。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
色谱柱 ＡｌｔｉｍａＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；流动相甲醇１％冰醋酸水溶液（９０∶１０）；流速
１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长３１０ｎｍ；柱温３５℃；进样
量２０μＬ，外标法计算含量。在所拟色谱条件下，银
杏叶中主要的 ５种银杏酸得到了较好的分离，见
图１。
２．２　溶液制备
２．２．１　供试品溶液制备　取银杏叶粉末约１．０ｇ，
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第３４卷第７期
２００９年４月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
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Ａ．总银杏酸对照品；Ｂ．白果新酸对照品；Ｃ．样品；
１～５．５种银杏酸，其中１为白果新酸。
图１　银杏叶总银杏酸的ＨＰＬＣ图
精密称定，置１００ｍＬ三角烧瓶中，精密加入甲醇２０
ｍＬ，闭塞，称重，超声处理４５ｍｉｎ，取出，冷却，称重，
以甲醇补足减失的质量，摇匀，先用滤纸滤过，然后
用０４５μｍ微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
２．２．２　对照品溶液制备　精密称取白果新酸对照
品适量，加甲醇制成每１ｍＬ含０１６７４ｍｇ，作为对
照品溶液。另取总银杏酸对照品适量，加甲醇制成
每１ｍＬ含０４２ｍｇ，作为定位用对照溶液。
２．３　白果新酸线性范围考察
精密吸取白果新酸对照品溶液 ５０，１００，
１５０，２００，２５０，３００，３５０μＬ，注入高效液相色谱
仪，按上述色谱条件测定，以对照品进样量（μｇ）为
横坐标（Ｘ），峰面积积分值为纵坐标（Ｙ）进行线性
回归，得回归方程为 Ｙ＝５２１×１０５Ｘ－５３５×１０４，
ｒ＝０９９９９，结果表明白果新酸在０８３７～５８５９μｇ
呈良好的线性关系。
２．４　精密度试验
精密吸取同一对照品溶液２０μＬ，注入液相色
谱仪，按上述色谱条件重复测定６次，测定对照品的
峰面积，计算其ＲＳＤ０８％，表明仪器精密度良好。
２．５　稳定性试验
对同一供试品溶液每隔４ｈ进样１次，依法测
定峰面积，结果白果新酸和总银杏酸峰面积ＲＳＤ均
为０５％，表明供试品溶液在１６ｈ内稳定性较好。
２．６　重复性试验
分别取同一银杏叶药材１ｇ，共６份，精密称定，
按供试品制备方法制备供试品溶液，依法测定，结果
白果新酸和总银杏酸分别为 ０２０％，１８１％，ＲＳＤ
分别为１２％，１１％，表明本方法重复性较好。
２．７　回收率试验
取已知含量的样品（银杏叶药材粉末中白果新
酸含量为１９８５ｍｇ·ｇ－１）９份，每份约０５ｇ，精密
称定，分高、中、低３个浓度进行加样回收（每一浓
度３份），按照供试品溶液的制备方法处理并按上
述条件测定，计算平均回收率和ＲＳＤ，见表１。
表１　白果新酸加样回收率
样品质量
／ｇ
样品中
量／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
均值
／％
ＲＳＤ
／％
０５０９３ １０１１ ０８０４ １８４０ １０３２ １０２３ ０８
０５０７８ １００８ ０８０４ １８２４ １０１６ 　 　
０５０８２ １００９ ０８０４ １８２８ １０２０ 　 　
０５００１ ０９９３ １００４ １９７４ ９７７ ９８１ ０４
０５０１２ ０９９５ １００４ １９８４ ９８５ 　 　
０５０２２ ０９９７ １００４ １９８２ ９８１ 　 　
０５０００ ０９９３ １２０５ ２１６６ ９７４ ９９４ １８
０５００８ ０９９４ １２０５ ２２０２ １００２ 　 　
０５０３２ ０９９９ １２０５ ２２１２ １００７ 　 　
２．８　样品测定
将银杏叶样品按２．２．１方法制备供试液，精密
吸取２０μＬ注入液相色谱仪，测定计算供试品溶液
中与总银杏酸对照品相应色谱峰的总峰面积，以白
果新酸对照品外标法计算总银杏酸含量，见表２。
表２　银杏叶样品中总银杏酸质量分数（ｎ＝３） ％　
样品 ０５１２ ０５３１ ０６１５ ０７０１ ０７１５ ０８０１ ０８１５ ０９０１ ０９１６ １００３ 平均值
二年生 １７４ １８８ １９５ １９１ １９２ １６２ １５８ １１６ ０７９ ０６３ １５２
三年生 ２３２ ２２６ ２０８ １６８ １５３ １１８ １２７ １０５ ０８７ ０６２ １４８
四年生 １７８ ２５２ ２００ １６７ １８６ １１４ １２４ １０６ １０４ ０８６ １５２
五年生 １８０ ２１４ １６６ １５０ １６３ １３８ ０９８ １０７ ０９３ ０４８ １３６
六年生 １７０ ２１８ １７１ １３５ １２８ ０９６ ０９７ ０８５ ０７８ ０５６ １２３
平均值 １８７ ２１９ １８８ １６２ １６４ １２６ １２１ １０４ ０８８ ０６３ －
３　讨论
３．１　不同树龄的银杏叶在不同季节总银杏酸的动
态变化分析
由表２可见，二至六年生银杏中，同一树龄的银
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第３４卷第７期
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杏在不同采收期的银杏叶中总银杏酸含量呈先上升
后逐渐下降趋势，５月底６月初含量最高，后随时间
推移逐渐下降，９月中旬到１０月初含量较低。将不
同树龄相同采集时间的银杏叶总银杏酸含量进行平
均则更清晰地显示这一变化趋势。具体在什么时间
采叶，还要结合银杏叶中总黄酮和总内酯的含量，以
活性成分含量高，总银杏酸含量低的银杏叶作为优
质银杏叶原料。
从不同树龄银杏叶年平均含量看，树龄大的如
五年生、六年生银杏叶中总银杏酸含量较低，树龄小
的如二年生到四年生银杏叶中总银杏酸含量较高。
１０月初总银杏酸含量最低，且比较接近。
３．２　银杏叶中总银杏酸ＨＰＬＣ方法的确定
采用ＨＰＬＣ法测定银杏叶提取物中总银杏酸含
量的文献报道较多，而测定银杏叶中总银杏酸含量
不多见。本研究参考２００５年版《中国药典》银杏叶
提取物中总银杏酸的检测方法，以供试品溶液中与
５种银杏酸对照品相应色谱峰的峰面积之和，对白
果新酸对照品峰面积，用外标法计算总银杏酸含量，
方法学研究结果表明，此法操作简便、重复性好、精
密度高，可用于银杏叶中总银杏酸含量限度的检测。
３．３　供试品制备方法的确定
根据银杏酸的理化性质，在供试品制备过程中，
比较了甲醇回流、甲醇超声、石油醚回流３种提取方
法，根据所拟色谱条件，甲醇提取含量明显高于石油
醚提取，而甲醇超声和回流没有明显差异，为了操作
方便，本实验选择甲醇超声作为最适宜的提取方法。
另比较了不同提取时间对总银杏酸含量的影响，结
果以甲醇超声提取３０，４５，６０，９０，１２０ｍｉｎ银杏叶中
总银 杏 酸 分 别 为 ０１７３％，０１８０％，０１７７％，
０１７９％，０１７７％，表明超声提取 ４５ｍｉｎ即可把银
杏酸提取完全，故选择超声提取时间为４５ｍｉｎ。
［参考文献］
［１］　ＪａｇｇｙＨ，ＫｏｃｈＥ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｂｉｏｌｏｇｙｏｆａｌｋｙｌｐｈｅｎｏｌｓｆｒｏｍ
ＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａＬ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｚｅ，１９９７，５２（１０）：７３５．
［２］　仰榴青，吴向阳，杨克迪，等．银杏酸分析方法研究进展［Ｊ］．药
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［３］　中国药典．一部［Ｓ］．２００５：２８１．
［４］　杨小明，夏　磊，张秀丽，等．ＲＰＨＰＬＣ测定微乳剂中银杏酸同
系物含量［Ｊ］．中国中药杂志，２００８，３３（２）：２０７．
［５］　鞠建明，钱士辉，钱大玮，等．银杏半同胞家系种质资源质量的
分析与评价［Ｊ］．林业科技开发，２００７，２１（６）：３１．
ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｏｆｔｏｔａｌｇｉｎｋｇｏｌｉｃａｃｉｄｓｉｎＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ
ｌｅａｖｅｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔａｇｅｄｔｒｅｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｌｅｃｔｉｎｇｓｅａｓｏｎｓ
ＪＵＪｉａｎｍｉｎｇ１，ＨＵＡＮＧＹｉｐｉｎｇ１，ＱＩＡＮＳｈｉｈｕｉ１，ＱＩＡＮＤａｗｅｉ１，ＤＵＡＮＪｉｎ′ａｏ２，ＣＡＯＦｕｌｉａｎｇ３
（１．ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２８，Ｃｈｉｎａ；
２．ＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００４６，Ｃｈｉｎａ；
３．ＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００３７，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｏｆｔｏｔａｌｇｉｎｋｇｏｌｉｃａｃｉｄｓｉｎＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｌｅａｖｅｓｏｆｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｔａｇｅｄｔｒｅｅｓａｎｄ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｌｅｃｔｉｎｇｓｅａｓｏｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌｇｉｎｋｇｏｌｉｃａｃｉｄｓｉｎＧ．ｂｉｌｏｂａｌｅａｖｅｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．ＡＡｌｔｉｍａＣ１８
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ａｎｄｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌａｎｄ１％ ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（９０∶１０）ｗｅｒｅｕｓｅｄ，ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ·
ｍｉｎ－１，ａｎｄｔｈｅｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ３１０ｎｍ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｅｘｔｅｒｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｏｔａｌ
ｇｉｎｋｇｏｌｉｃａｃｉｄｓｉｎＧ．ｂｉｌｏｂａｌｅａｖｅｓｗａｓｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０．４８％ ｔｏ２．５１％ ｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｌｅｃｔｉｎｇｓｅａｓｏｎｓ．Ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｒｅａｃｈｅｄｍａｘｉｍｕｍ
ａｔｔｈｅｅｎｄｏｆＭａｙａｎｄｔｈｅｂｅｇｉｎｎｉｎｇｏｆＪｕｎｅ，ａｎｄｔｈｅｎｄｅｃｌｉｎｅｄｇｒａｄｕａｌｙ．Ｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔａｇｅｄｔｒｅｅｓ，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｏｌｄｅｒａｇｅｓｗａｓ
ｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｙｏｕｎｇｅｒａｇｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｐｒｏｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｃｏｌｅｃｔｉｎｇｓｅａｓｏｎｏｆＧ．ｂｉｌｏｂａｌｅａｖｅｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｌｅａｖｅｓ；ｔｏｔａｌｇｉｎｋｇｏｌｉｃａｃｉｄｓ；ＨＰＬＣ；ｄｉｆｅｒｅｎｔａｇｅｄｏｆｔｒｅｅｓ；ｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｌｅｃｔｉｎｇｓｅａｓｏｎｓ；ｃｈａｎｇｉｎｇ
ｒｕｌｅｓ
［责任编辑　吕冬梅］
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第３４卷第７期
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