全 文 ：ＨＰＬＣ测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱
和氧化苦参碱的含量
田 娟１，２，王维皓１，高慧敏１，王智民１
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；
２．西北农林科技大学 生命学院，陕西 杨凌 ７１２１００）
［摘要］ 目的：建立用高效液相色谱法同时测定复方苦参注射液中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量。方法：
ＡＬＬＴＩＭＡＡＭＩＮＯ色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈３％磷酸溶液无水乙醇（８０∶１０∶１０）；流速１０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；检测波长２２０ｎｍ；柱温３０℃。结果：该方法回收率苦参碱为９９５％（ＲＳＤ１５８％），槐定碱为９９２％（ＲＳＤ
１４４％），氧化苦参碱为１００２％（ＲＳＤ１８５％）。结论：该方法简便、快速、准确、灵敏度高，可用于该品的质量控制。
［关键词］ 高效液相色谱法；复方苦参注射液；苦参碱；槐定碱；氧化苦参碱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０３０２２２０３
［收稿日期］ ２００５０７２５
［通讯作者］ 王智民，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１４１２８，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｍｗ１２３
＠２６３．ｎｅｔ
复方苦参注射液是由山西振东金晶制药有限公
司研制生产的纯中药抗癌制剂，处方由苦参、白土苓
组成，经过系列精制制成的具有抗癌、增强免疫、止
血、止痛、抗肿瘤等功效的产品，其主要成分为苦参
碱、槐定碱及氧化苦参碱等生物碱类成分。部颁标
准采用酸碱滴定法测定复方苦参注射液中总生物碱
含量［１］，而目前关于苦参及其制剂中生物碱类成分
含量测定仅见薄层色谱扫描法［２］、ＨＰＬＣ测定苦参
碱的报道［３，４］。本研究建立了同时测定制剂中３种
主要生物碱含量的ＨＰＬＣ分析方法，该法操作简便、
灵敏度高、分离度好，可用于复方苦参注射液的质量
控制。
１ 仪器和试药
Ａｌｔｅｃｈ４２６型高效液相泵，ＡｌｔｅｃｈＵＶＩＳ２００检
测器，Ａｌｃｈｒｏｍ化学工作站；苦参碱（批号 ０８０５
２００００５）、槐定碱（批号０７８４９７０２）及氧化苦参碱对
照品（批号０７８０２００００４）购于中国药品生物制品检
定所，乙腈、无水乙醇为色谱纯，水为高纯水，其余试
剂均为分析纯；复方苦参注射液由山西振东金晶制
药有 限 公 司 提 供 （批 号 ２００４０４０６，２００４０４０７，
２００４０４０９， ２００４０４１１， ２００４０４１２， ２００４０４１３，
２００４１００２，２００４１００３，２００４１００１１，２００４１００１２）。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 ＡｌｔｉｍａＡｍｉｎｏ色谱柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈３％磷酸溶液无水乙
醇（８０∶１０∶１０）；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２２０
ｎｍ；柱温３０℃。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷
减压干燥至恒重的苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱对
照品适量，加乙腈无水乙醇（８０∶２０）溶解，制成每１
ｍＬ含苦参碱００５０ｍｇ，槐定碱００４９ｍｇ，氧化苦参
碱０３７２ｍｇ的混合溶液，即得。
２．３ 供试品溶液的制备 精密量取复方苦参注射
液０５ｍＬ，置分液漏斗中，加入浓氨试液约１ｍＬ，用
４２ｍＬ氯仿分３次萃取（１５，１５，１２ｍＬ），收集氯仿
液，蒸干，残渣加无水乙醇适量使溶解，并转移至１０
ｍＬ量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤
膜（０４５μｍ）滤过，取续滤液，即得，见图１。
图１ 对照品和样品ＨＰＬＣ图
Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．苦参碱；２．槐定碱；３．氧化苦参碱
２．４ 阴性供试品的考察 取阴性溶液０５ｍＬ，按
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第３２卷第３期
２００７年２月
中 国 中 药 杂 志
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供试品溶液的制备方法制备样品，分别精密吸取一
定体积的样品溶液和对照品溶液进样测定。结果表
明阴性供试品溶液对样品溶液的测定无干扰。
２．５ 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶
液各１，２，４，６，８，１０，１２μＬ注入高效液相色谱仪，测
定。以进样量为横坐标（Ｘ），峰面积平均积分值为
纵坐标（Ｙ），绘制标准曲线，计算回归方程。结果表
明苦参碱在００５０～０６０５μｇ线性关系良好，回归
方程为Ｙ＝３９２４２４２Ｘ－９６８０（ｒ＝０９９９８）；槐定
碱在００４９～０５９０μｇ线性关系良好，回归方程为
Ｙ＝２９３６８１１Ｘ＋４０４６（ｒ＝０９９９８）；氧化苦参碱
在０３７２～４４６４μｇ线性关系良好，回归方程为Ｙ＝
３８４５７９５Ｘ－１７３１８６（ｒ＝０９９９９）。
２．６ 精密度试验 分别精密吸取上述对照品溶液各
５μＬ，连续进样６次，记录各色谱峰的峰面积，计算其
相对标准偏差（ＲＳＤ）。苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱
峰面积的ＲＳＤ分别是１９１％，０９２％和１８６％，结果
表明，仪器精密度良好。
２．７ 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在０，
１，２，４，８，１６ｈ进样，记录各色谱峰的峰面积，测定其
中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含量，计算 ＲＳＤ。
结果分别是０８４％，１３６％和１７６％，表明低温保
存下的复方苦参注射液稳定性较好，常温下１ｄ内
也能保持较好的稳定性。
２．８ 重复性试验 取同一供试品溶液５份，按上述
方法制备样品并进行检测，苦参碱、槐定碱和氧化苦
参碱的质量浓度分别为 １５８０，０３４５，７４３５ｍｇ·
ｍＬ－１，ＲＳＤ分别为 １８２％，１３８％和 １６５％，表明
供试品溶液的制备方法重复性良好。
２．９ 加样回收率试验 精密吸取已知含量的样品
溶液６份，精密加入适量的苦参碱、槐定碱和氧化苦
参碱，按同样的方法制备供试品溶液，测定苦参碱、
槐定碱和氧化苦参碱的含量，计算回收率和 ＲＳＤ，
结果见表１。
２．１０ 样品测定 分别精密吸取对照品溶液５μＬ
与供试品溶液５～１０μＬ，注入高效液相色谱仪，测
定，计算样品中苦参碱、槐定碱和氧化苦参碱的含
量，结果见表２。
３ 讨论
供试品溶液的制备中曾采用将注射剂直接稀释
表１ ３种成分的加样回收率（ｎ＝６）
测定成分
样品中含量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
苦参碱 ０３９５ ０３７５ ０７６３ ９８１ ９９５１１５８
０３９５ ０３７５ ０７６６ ９８１
０３９５ ０３０２ ０６９９ １００６
０３９５ ０３０２ ０６９５ ９９０
０３９５ ０４８０ ０８６７ ９８４
０３９５ ０４８０ ０８８５ １０２１
槐定碱 ００８６ ００８５ ０１７２ １００６ ９９２４１４４
００８６ ００８５ ０１７０ ９９０
００８６ ００７０ ０１５６ ９９１
００８６ ００７０ ０１５５ ９７８
００８６ ０１１０ ０１９４ ９７７
００８６ ０１１０ ０１９８ １０１２
氧化苦参碱 １８５８ １８４０ ３７０８ １００５ １００２２１８５
１８５８ １８４０ ３７４８ １０２７
１８５８ １３８０ ３２５７ １０１３
１８５８ １３８０ ３２０６ ９７６
１８５８ ２３２０ ４４１５ ９８５
１８５８ ２３２０ ４１９４ １００７
表２ 复方苦参注射液中３种成分含量（ｎ＝１０）
ｍｇ·ｍＬ－１
批号 苦参碱 槐定碱 氧化苦参碱
２００４０４０６ １８００ ０６３８ １２３７２
２００４０４０７ ２３４７ ０５８９ １１０５１
２００４０４０９ １６２８ ０３４６ ７６０８
２００４０４１１ １５０４ ０５０２ ８４９５
２００４０４１２ １６５８ ０５２７ ９２８９
２００４０４１３ １５６８ ０２７６ ８３２９
２００４１００２ １４４３ ０２７９ １５９４８
２００４１００３ １３５４ ０３３１ １３５５３
２００４１００１１ １０８６ ０９５３ １２０５６
２００４１００１２ １１４８ ０９６５ １２０５６
进样，样品溶液在上述色谱条件下杂质干扰较强，３
种生物碱无法得到良好分离。故采用浓氨水将注射
剂调为碱性，使生物碱游离出来后，用氯仿少量多次
萃取，挥干氯仿，无水乙醇稀释进样，苦参碱、槐定碱
和氧化苦参碱均能得到良好分离。
［参考文献］
［１］ 中华人民共和国卫生部药品标准［Ｓ］．中药成方制剂．第１４
册，１９９５，ＷＳ３Ｂ２７５２９７．
［２］ 杨梦玉，邬国庆，周富荣．薄层扫描法测定苦参中苦参碱的含
量［Ｊ］．中国中药杂志，１９９９，２４（６）：３３７．
［３］ 马长华，曹天海．ＨＰＬＣ法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱
的含量［Ｊ］．药物分析杂志，２０００，２０（６）：４０８．
［４］ 曹 红，魏 萍．高效液相色谱法测定磷酸苦参碱注射液中苦
参碱的含量［Ｊ］．解放军药学学报，２０００，１６（６）：３２５．
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Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００７
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｎｅ，ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｉｎ
ｃｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｂｙＨＰＬＣ
ＴＩＡＮＪｕａｎ１，２，ＷＡＮＧＷｅｉｈａｏ１，ＧＡＯＨｕｉｍｉｎ１，ＷＡＮＧＺｈｉｍｉｎ１
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＳｃｉＴｅｃｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍａｔｒｉｎｅ，
ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｉｎＣｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎＩｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ａｌｔｉｍａａｍｉｎｏｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ３％ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ
ａｃｉｄｅｔｈｙｌａｌｃｏｈｏｌ（８０∶１０∶１０）ａｓｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓａｔ２２０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆｍａ
ｔｒｉｎｅ，ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅｉｎＣｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎＩｎｊｅｃｔｉｏｎｗａｓ９９５１％ （ＲＳＤ１５８％），９９２４％ （ＲＳＤ１４４％）ａｎｄ
１００２２％ （ＲＳＤ１８５％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｑｕａｌｉｔｙ
ｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨＰＬＣ；ｃｏｍｐｏｕｎｄＫｕｓｈｅｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；ｍａｔｒｉｎｅ；ｓｏｐｈｏｒｉｄｉｎｅ；ｏｘｙｍａｔｒｉｎｅ
［责任编辑 鲍 雷］
蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛含量测定
代丽萍１，王智民２，高慧敏２，姜 旭２，丁广治２
（１．河南中医学院，河南 郑州 ４５０００８；
２．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］ 目的：建立蟾皮中蟾蜍噻咛的含量测定方法，比较不同产地及养殖方式对蟾皮中蟾蜍噻咛含量的影
响。方法：采用高效液相色谱法测定了不同产地蟾皮中蟾蜍噻咛的含量，色谱柱ＬｉｃｈｒｏｓｏｂＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ），流动相乙腈水（１０∶９０），检测波长２２５ｎｍ，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１。结果：回归方程为Ｙ＝７４８９×１０４＋２７９１×
１０５Ｘ，ｒ＝０９９９９，平均回收率为９９２％，蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数在３６４～６４１８μｇ·ｇ－１，华蟾素注射液中的
质量分数在２２４７～３３１６μｇ·ｍＬ－１。结论：蟾皮中蟾蜍噻咛在野生和养殖品种中的差异较大。该方法快速简便，
重复性良好，可用于蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛的含量测定。
［关键词］ 蟾皮；华蟾素注射液；蟾蜍噻咛；高效液相色谱法
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０３０２２４０３
［收稿日期］ ２００５１１２０
［通讯作者］ 王智民，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１４１２８，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｍｗ１２３
＠２６３．ｎｅｔ
蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Ｂｕｆｏｂｕｆｏｇａｒｇａ
ｒｉｚａｎｓＣａｎｔｏｒ的干燥皮，具有清热解毒、利水消胀之
功效［１］，蟾皮水溶性部位主要含有蟾蜍噻咛、Ｎ苯
基乙萘胺、氨基酸类化合物［２５］，其中蟾蜍噻咛是其
主要成分，而且体外抗肿瘤试验表明蟾蜍噻咛肿瘤
抑制率为８７０６％。以其水溶性成分开发的药品已
有多个上市，临床应用表明华蟾素注射液具有确切
的抗肿瘤疗效，而其药材和成品没有合适的有效成
分定量指标，难以控制制剂的质量。鉴于有关蟾蜍
噻咛的含量测定方法尚未见报道，作者拟采用高效
液相色谱法建立蟾蜍噻咛的含量测定方法，并对８
个产地的蟾皮药材中蟾蜍噻咛含量进行测定。实验
结果表明该法分离度好、精密度、重复性均满足要
求，可作为蟾皮药材和华蟾素注射液的质量控制方
法。
·４２２·
第３２卷第３期
２００７年２月
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ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
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