全 文 ：马兜铃内酰胺Ⅰ进入人肾小管上皮细胞及
细胞内分布和蓄积的观察
商 朴１，王 璇１，李晓玫２，唐嘉薇２，蔡少青１
（１．北京大学 药学院，北京 １０００８３；
２．北京大学 第一医院 肾内科暨卫生部肾脏疾病重点实验室，北京 １０００３４）
［摘要］ 目的：观察马兜铃内酰胺Ⅰ（ＡＬⅠ）能否进入肾小管上皮细胞及其在细胞内的分布、蓄积情况。方
法：以体外培养的人类近端肾小管上皮细胞系（ＨＫ２）为研究对象，用不同质量浓度的ＡＬⅠ（５～２０μｇ·ｍＬ－１）处
理细胞，采用荧光倒置显微镜观察细胞内由ＡＬⅠ产生荧光的有无及其分布，并在洗去含ＡＬⅠ的培养液后继续培
养ＨＫ２细胞４８ｈ，观察细胞内ＡＬⅠ荧光的持续情况以判断其蓄积性。结果：不同质量浓度的ＡＬⅠ（５～２０μｇ·
ｍＬ－１）处理细胞０５ｈ内，均能在肾小管上皮细胞内观察到蓝绿色的ＡＬⅠ荧光，并且荧光仅分布于细胞浆中，而在
细胞核内未观察到。在洗去含ＡＬⅠ培养液后继续培养时ＡＬⅠ的荧光可在细胞内持续存在４８ｈ以上，其持续存
在部位仍为细胞浆。结论：ＡＬⅠ可以在短时间内迅速进入肾小管上皮细胞，其分布部位在细胞浆，不进入细胞核；
ＡＬⅠ在细胞浆内的蓄积可能与其致肾损伤的毒性作用机制有关，即通过进入肾细胞并蓄积于细胞内在肾病过程
中持续发挥毒性作用。
［关键词］ 马兜铃内酰胺Ⅰ；肾小管上皮细胞；荧光显微镜观察；分布；蓄积
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０７０７９３０５
［收稿日期］ ２００７０６２１
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０３７１７４８）；国家科技支
撑计划项目（２００６ＢＡＩ１４Ｂ０１）；国家教育部９８５项目
［通讯作者］ 王璇，Ｔｅｌ：（０１０）８２８０６８１８，Ｆａｘ：（０１０）８２８０６８１８
Ｅｍａｉｌ：ｃｓｑｗｘ＠ｈｓｃ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；李晓玫，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｏｍｅｉｌ＠ｍｅｄｍａｉｌ．
ｃｏｍ．ｃｎ
马兜铃内酰胺Ⅰ（ａｒｉｓｔｏｌｏｌａｃｔａｍⅠ，ＡＬⅠ）是
马兜铃酸Ⅰ（ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃａｃｉｄⅠ，ＡＡⅠ）在人体内
的主要代谢产物［１］，同时也是许多马兜铃属植物中
的独立成分［２，３］。本课题组曾发现 ＡＬⅠ和 ＡＡⅠ
一样，也具有肾小管上皮细胞毒性［４，５］。有学者曾
在疑为木通（关木通）中毒患者的肾组织中发现肾
小管上皮细胞内有嗜碱性物质突向管腔，此物质为
层状结构［６］，认为很可能是（关）木通的代谢产
物［７］，提示ＡＡⅠ 或ＡＬⅠ有可能是通过进入细胞
内损伤细胞而导致马兜铃酸肾病（ＡＡＮ）。但马兜
铃酸（ＡＡｓ）及马兜铃内酰胺类（ＡＬｓ）成分的肾细胞
毒性机制，即是否通过该类成分进入细胞而起毒性
作用、进入细胞后的分布状况如何以及是否会在细
胞内蓄积而长期存在目前仍缺乏直接证据，国内外
迄今也尚无对细胞内 ＡＬｓ进行分析检测的报道。
因此，本研究拟利用 ＡＬⅠ具有较强荧光的性
质［１，８，９］，建立肾小管上皮细胞内 ＡＬⅠ的荧光显微
镜观察方法，进而研究其能否进入细胞及其在细胞
内的分布、蓄积情况，以期进一步探讨马兜铃酸和马
兜铃内酰胺类成分的肾细胞毒性机制。
１ 材料
１．１ 试剂与仪器
荧光倒置显微镜ＥＣＬＩＰＳＥＴＥ２０００－Ｓ（日本ＮＩ
ＫＯＮ公司，紫外光激发范围为３３０～３８０ｎｍ）。细胞
培养基Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ’ｓｍｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓｍｅｄｉｕｍ（简称
ＤＭＥＭ）和胎牛血清（美国Ｇｉｂｃｏ公司），二甲基亚砜
（ＤＭＳＯ，美国 Ｆｌｕｋａ公司）。氯化钾、磷酸二氢钾、
葡萄糖（ＤＧｌｕｃｏｓｅ）、酚红等试剂均为分析纯，北京
化学试剂公司生产。Ｈａｎｋ’ｓ平衡盐溶液（以下简称
ＨＢＳＳ）：含ＫＣｌ０４０ｇ，ＫＨ２ＰＯ４００６ｇ，ＮａＣｌ８００ｇ，
Ｎａ２ＨＰＯ４·７Ｈ２Ｏ００９ｇ、葡萄糖１００ｇ、酚红指示剂
００１ｇ和过柱纯净水适量，使定量至１００００ｍＬ，保
持ｐＨ在７１～７４，灭菌后４℃保存备用。其他常
用试剂均购自国内生物及化学试剂公司。
１．２ 药物与细胞株
马兜铃内酰胺Ⅰ由作者通过系统化学分离和
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制备液相的方法从植物天仙藤 Ａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉａｃｏｎｔｏｒｔａ
Ｂｕｎｇｅ（北京大学药学院蔡少青教授鉴定）茎叶中分
离纯化得到，纯度大于９８０％，溶解于二甲基亚砜
中，储液质量浓度为２０ｇ·Ｌ－１，于４℃保存。临用
时再用ＤＭＥＭ稀释到实验所需质量浓度，最终 ＤＭ
ＳＯ控制在０１％以下。人类近端肾小管上皮细胞
系（ＨＫ２）购自美国 ＡｍｅｒｉｃａｎＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｅｃ
ｔｉｏｎ（简称ＡＴＣＣ）公司。
２ 方法
２．１ 细胞培养
ＨＫ２细胞采用含 １０％的胎牛血清、１００Ｕ·
ｍＬ－１青霉素和１００Ｕ·ｍＬ－１链霉素的 ＤＭＥＭ培养
基培养，培养条件为５％ＣＯ２，３７℃恒温培养箱。细
胞爬片接种在３５ｍｍ培养皿里的盖玻片上，生长至
６０％～７０％融合后，按以下不同质量浓度加刺激物
ＡＬⅠ分别处理不同时间。
２．２ 用荧光显微镜观察 ＡＬⅠ能否进入细胞及其
分布
２．２．１ 分组 空白组（ＤＭＳＯ）：培养液中 ＤＭＳＯ的
终浓度分别为 ０２５‰，０５‰，１‰。ＡＬⅠ组：培养
液中含 ＡＬⅠ（ＤＭＳＯ溶解）终浓度分别为５，１０，２０
μｇ·ｍＬ－１。
为了排除ＤＭＳＯ作为溶剂对细胞膜的影响，实
验中同时设立了以下各组进行比较。
空白组（无水乙醇）：培养液中无水乙醇的终浓
度为０２５‰；ＡＬⅠ组（乙醇溶解）：培养液中含 ＡＬ
Ⅰ（乙醇溶解）终浓度为５μｇ·ｍＬ－１。
２．２．２ 样品制备和观察方法 各实验组分别处理
细胞０５ｈ后吸除培养液，迅速用 ＨＢＳＳ洗细胞 ４
次，即每次向培养皿中加入１０００μＬＨＢＳＳ，轻轻晃
洗细胞后吸除，重复操作４次以后，加入含０２％胎
牛血清的ＤＭＥＭ培养液（以下简称 Ｇ０液），在５～
１０ｍｉｎ内从培养皿取出载有细胞的盖玻片倒置盖于
载玻片上用荧光显微镜在紫外光（３３０～３８０ｎｍ）激
发下采集荧光图像。
另外同法采集实验高质量浓度组（ＡＬⅠ ２０μｇ
·ｍＬ－１，ＤＭＳＯ溶解）处理细胞１５ｍｉｎ后的荧光图
像，并与相同时间对照组进行比较。
２．３ ＡＬⅠ在肾小管上皮细胞内的蓄积性研究
ＡＬⅠ组：采用 ＤＭＳＯ溶解的 ＡＬⅠ （２０μｇ·
ｍＬ－１）处理细胞０５ｈ后，吸除含ＡＬⅠ培养液并
用ＨＢＳＳ洗净细胞，加入新鲜 Ｇ０液继续分别培养
６，２４，４８ｈ，吸除培养液，按２２２项下方法用
ＨＢＳＳ洗细胞４次，加入Ｇ０液后，在５～１０ｍｉｎ内
各不同培养时间ＡＬⅠ组分别于荧光显微镜紫外光
激发下采集细胞的荧光图像，实验方法同上述０５
ｈ组。
空白对照组：培养液中ＤＭＳＯ的终浓度为１‰，
实验操作方法同２．３项下。各组实验均重复 ３次，
由同一研究者完成观察及照相。
３ 结果
３．１ ＡＬⅠ在肾小管上皮细胞内的分布
３．１．１ 空白对照组 ＤＭＳＯ各剂量组和乙醇空白
对照组在分别处理１５ｍｉｎ和０５ｈ后，细胞状态良
好，形态正常。在紫外光激发下均无荧光，镜检视野
黑暗。表明在本实验条件下 ＤＭＳＯ和无水乙醇空
白对照组细胞均无荧光干扰。
３．１．２ ＡＬⅠ组 溶于ＤＭＳＯ不同质量浓度的ＡＬ
Ⅰ处理细胞０５ｈ内，各组细胞生长及形态均正常，
未见明显差异，基本无死亡细胞。各组在细胞核外
胞浆中均有蓝绿色荧光分布，细胞核轮廓清晰可见，
荧光强度随着 ＡＬⅠ浓度增大而增强。此外，实验
还发现ＡＬⅠ（２０μｇ·ｍＬ－１）处理细胞１５ｍｉｎ后细
胞内即有强烈荧光，说明 ＡＬⅠ在１５ｍｉｎ内即可以
进入肾小管上皮细胞，并且分布于细胞核外胞浆，见
图１，２。
采用无水乙醇溶解的 ＡＬⅠ（５μｇ·ｍＬ－１）处
理ＨＫ２细胞０５ｈ后，细胞生长及形态正常，细胞
核外胞浆中也有蓝绿色荧光分布，实验结果与 ＤＭ
ＳＯ溶解的ＡＬⅠ实验组完全一致，提示本研究所用
溶剂本身并不影响观察结果，进一步证实了结果的
可靠性。见图３。
３．２ ＡＬⅠ在肾小管上皮细胞内的蓄积性
用ＡＬⅠ（ＤＭＳＯ溶解，２０μｇ·ｍＬ－１）处理ＨＫ
２细胞０５ｈ后，吸除并洗净含 ＡＬⅠ培养液，继续
培养６，２４，４８ｈ后观察，各ＡＬⅠ组细胞核外胞浆中
均可见蓝绿色荧光，荧光强度无明显差异（图４，５）。
即ＡＬⅠ仍存在于肾小管上皮细胞内，说明其具有
蓄积性，其蓄积部位为细胞核外胞浆。而空白对照
组在相应的实验条件下均无荧光，镜检视野黑暗，无
荧光干扰。
４ 结论与讨论
马兜铃酸肾病（ＡＡＮ）以及与此相关的药材、中
成药的安全问题是当前医药学界研究的热点。导致
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图１ 不同质量浓度ＡＬⅠ（ＤＭＳＯ溶解）处理ＨＫ２细胞０５ｈ后细胞荧光图像
（横线段代表８μｍ长，图２５同）
Ａ．ＡＬⅠ５μｇ·ｍＬ－１组；Ｂ．ＡＬⅠ １０μｇ·ｍＬ－１组；Ｃ．ＡＬⅠ２０μｇ·ｍＬ－１组
图２ ＡＬⅠ（ＤＭＳＯ溶解，２０μｇ·ｍＬ－１）
处理ＨＫ２细胞１５ｍｉｎ后的细胞荧光图像
图３ ＡＬⅠ（乙醇溶解，５μｇ·ｍＬ－１）
处理ＨＫ２细胞０５ｈ后的细胞荧光图像
图４ ＡＬⅠ（ＤＭＳＯ溶解，２０μｇ·ｍＬ－１）进入ＨＫ２细胞不同时间的细胞荧光图像
Ａ．６ｈ；Ｂ．２４ｈ；Ｃ．４８ｈ
图５ ＡＬⅠ（ＤＭＳＯ溶解，２０μｇ·ｍＬ－１）
进入ＨＫ２细胞后２４ｈ的透射光及荧光合并图像
ＡＡＮ的病因目前普遍认为是马兜铃酸的肾毒性所
致［１０１２］，而马兜铃内酰胺Ⅰ（ＡＬⅠ）作为马兜铃
酸Ⅰ（ＡＡⅠ）在人体内的主要代谢产物［１］，同时也
是许多马兜铃属植物中的独立成分［２，３］，本课题组
前期已经证实外源性 ＡＬⅠ与 ＡＡⅠ同样具有直接
的肾小管上皮细胞损伤作用，在同等浓度情况下，
ＡＬⅠ 的直接细胞毒作用甚至较 ＡＡⅠ更强［４］，而
目前尚缺乏检测细胞内该类成分的方法。国内外对
于荧光显微镜的应用，多见于细胞内 ＤＮＡ，ＲＮＡ，蛋
白质和钙离子等的定位或定量研究，亦有少量应用
于细胞内药物分布研究，主要包括蒽醌类［１３，１４］、原
卟啉类［１５］、药物的荧光衍生物［１６］以及其他光敏物
质［１７］，但尚无将其应用于马兜铃内酰胺类成分的细
胞内观察或细胞内分布的研究报道。因此，本研究
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根据ＡＬⅠ在紫外光激发下具有荧光的特性，首次
应用荧光显微镜研究马兜铃内酰胺类成分在人类近
端肾小管上皮细胞系 ＨＫ２细胞内的分布，此方法
不需要进行任何荧光标记就可以检测细胞内的
ＡＬⅠ，方法简便、易操作。
本研究结果表明，ＡＬⅠ能够在１５ｍｉｎ内进入
肾小管上皮细胞，可分布于细胞浆中，但不进入细胞
核，提示ＡＬⅠ可能在胞浆中起毒性作用，其分布部
位与刺激浓度无关。实验还发现 ＡＬⅠ（２０μｇ·
ｍＬ－１）处理细胞０５ｈ后细胞内荧光强度明显强于
低浓度组，表明其进入细胞的量与刺激浓度成正比，
这可能是其细胞损伤作用呈浓度依赖性的基础［４］。
本课题组曾报道ＡＬⅠ（５～２０μｇ·ｍＬ－１）刺激ＨＫ
２细胞４８ｈ后具有促使转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）、
纤维连接蛋白（ＦＮ）分泌以及诱导肾小管上皮细胞
凋亡的直接毒性作用［４］，而此次发现的 ＡＬⅠ进入
细胞后可在细胞浆内蓄积存在４８ｈ以上的事实对
其持续的细胞毒性作用提供了又一个直接证据，对
于进一步揭示ＡＬⅠ的致肾损伤毒性作用机制具有
重要意义。
ＡＬⅠ具有同ＡＡⅠ相似的肾细胞毒性，可能是
含马兜铃酸中药导致肾脏损伤及其纤维化过程的毒
性成分之一［４］，且由于其能够在肾小管上皮细胞中
进行蓄积，因此也可能部分地介导了肾脏损伤的持
续性。至于ＡＬⅠ进入细胞的量多少、代谢情况如
何以及在细胞浆中作用于哪类细胞器，ＡＡⅠ等其
他马兜铃酸类毒性成分是否也能进入肾细胞发挥毒
性作用还值得进一步研究。
［致谢］ 北京大学第一医院中心实验室张瑛技师在荧
光显微镜图像采集实验中给予帮助。
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第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８
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ｈｕｍａｎｒｅｎａｌｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｂｙａｒｉｓｔｏｌｏｌａｃｔａｍⅠ
ＳＨＡＮＧＰｕ１，ＷＡＮＧＸｕａｎ１，ＬＩＸｉａｏｍｅｉ２，ＴＡＮＧＪｉａｗｅｉ２，ＣＡＩＳｈａｏｑｉｎｇ１
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＲｅｎａｌＤｉｖｉｓｉｏｎ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＦｉｒｓｔＨｏｓｐｉｔａｌ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ａｎｄＫｅｙＬａｂｏｆＲｅｎａｌＤｉｓｅａｓｅｓ，
ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＣｈｉｎａ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００３４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｗｈｅｔｈｅｒａｒｉｓｔｏｌｏｌａｃｔａｍⅠ （ＡＬⅠ）ｃａｎｅｎｔｅｒｒｅｎａｌｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓａｎｄｔｈｅ
ｓｉｔｕａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｃｕｌｔｕｒｅｄｈｕｍａｎｒｅｎａｌｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｉｎｅ（ＨＫ２）
ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｈｅｓｕｂｊｅｃｔ．ＩｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｆｒｏｍＡＬⅠ ａｎｄｉｔｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙａｆｔｅｒａ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＡＬⅠ，ｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｕｌａｒａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆＡＬⅠ ｗａｓａｌｓｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｉｎｃｕｂａｔｅｄｃｅｌｓｉｎ
ＡＬⅠｆｒｅｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒ４８ｈａｆｔｅｒｗａｓｈｉｎｇｏｕｔｔｈｅｍｅｄｉａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＡＬⅠ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＡｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡＬⅠ （ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｆｒｏｍ５μｇ
·ｍＬ－１ｔｏ２０μｇ·ｍＬ－１），ｇｌａｕｃｏｕｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｃｏｕｌｄｂｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｓｉｄｅｒｅｎａｌｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓａｔ０５ｈ，ａｎｄｔｈｅ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｏｎｌｙｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍｗｈｉｌｅｎｏｔｂｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｎｕｃｌｅｉ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｏｆＡＬⅠ ｃｏｕｌｄｂｅｋｅｐｔｉｎｃｙｔｏ
ｐｌａｓｍｆｏｒｍｏｒｅｔｈａｎ４８ｈａｆｔｅｒｗａｓｈｉｎｇｏｕｔｔｈｅｍｅｄｉａｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＡＬⅠ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡＬⅠ ｉｓａｂｌｅｔｏｅｎｔｅｒｒｅｎａｌｐｒｏｘｉｍａｌｔｕｂｕｌａｒｅｐ
ｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓｉｎｓｈｏｒｔｔｉｍｅａｎｄａｃｃｕｍｕｌａｔｅｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍ，ｂｕｔｎｏｔｅｎｔｅｒｎｕｃｌｅｉ．Ｔｈｉｓｐｒｏｐｅｒｔｙｍａｙｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｏｆｒｅｎａｌｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡＬⅠ，ｗｈｉｃｈｍａｙｐａｒｔｉａｌｙｅｘｐｌａｉｎｔｈｅｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｒｅｎａｌｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆＡＡｓａｎｄｉｔｓｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｅｎｔｏｆａｒｉｓｔｏｌｏｃｈｉｃａｃｉｄｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ａｒｉｓｔｏｌｏｌａｃｔａｍⅠ；ｒｅｎａｌｔｕｂｕｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ；ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ；ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０９２０
［基金项目］ 国家自然科学基金项目（３０５００６６３）
［通讯作者］ 胡素敏，Ｔｅｌ：（０１０）６４２８７００６，Ｅｍａｉｌ：ｃｉｎｎｄｙｈｕ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
中药复方对模拟失重大鼠骨代谢的影响
佟海英，胡素敏，周 鹏，傅 骞，杨 佳，高学敏，张建军，钟赣生
（北京中医药大学 基础医学院 方药教研室，北京 １０００２９）
［摘要］ 目的：观察中药复方对尾部悬吊模拟失重大鼠骨代谢的影响。方法：５０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠按随机区组实
验设计法分成正常组、模型组、悬吊中药低（３５２ｇ·ｋｇ－１）、中（７０４ｇ·ｋｇ－１）、高剂量（１４０８ｇ·ｋｇ－１）组，每组１０
只，实验周期２１ｄ。造模前７ｄ悬吊中药３个剂量组给予中药复方，空白与模型组给予蒸馏水灌胃，每日１次。第８
天灌胃１ｈ后，模型组与悬吊中药３个剂量组尾部悬吊，正常组大鼠笼中自由活动，继续饲养１４ｄ。实验结束，检测
各组动物血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、骨钙素（ＢＧＰ）、抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）、股骨羟脯氨酸（ＨＯＰ）含量及股骨、
腰椎骨密度（ＢＭＤ）的变化。结果：与正常组相比，模型组大鼠血清 ＡＬＰ显著降低（Ｐ＜００５），ＢＧＰ，ＴＲＡＰ含量无明
显变化，股骨、腰椎ＢＭＤ明显降低（Ｐ＜００５）；与模型组相比中药各剂量组血清 ＡＬＰ含量无显著变化，中药中剂量
组血清ＢＧＰ显著增高（Ｐ＜００５），中药中、高剂量组血清 ＴＲＡＰ显著降低（Ｐ＜００５），中药中剂量组股骨 ＢＭＤ显著
增加（Ｐ＜００５）。结论：中药复方能明显促进骨形成作用，有效抑制骨吸收作用，减弱溶骨过程从而促进骨矿盐的
沉积和矿化，增强ＢＭＤ而达到防治骨丢失的作用；有效的防护和治疗失重性骨丢失采取联合措施很有必要。
［关键词］ 中药复方；模拟失重；碱性磷酸酶；骨钙素；抗酒石酸酸性磷酸酶；羟脯氨酸；骨密度
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第３３卷第７期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ７
Ａｐｒｉｌ，２００８