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Determination of salvianolic acid B and paeoniflorin in Shuangdan granules by HPLC

HPLC测定双丹颗粒中丹酚酸B和芍药苷的含量



全 文 :似度除一批为 s1{z外 o其余均在 s1|s以上 o因此建
议在对复方大青叶注射液质量进行评价时 o ‹°≤
指纹图谱相似度应达到 |1s以上 o并且随着生产企
业生产水平的不断改进和提高 o复方大青叶注射液
的相似度阈值也将不断提高 ∀
≈参考文献 
≈t  国家药典委员会 1 卫生部药品标准 1 中药成方制剂k第 us
册l qt||{ }ust1
Φινγερπριντ αναλψσισ οφ χοµ ποσιτε Φολιι Ισατιδισινϕεχτιον βψ ΗΠΛΧ
Œ˜ •∏¬oŒ˜ «¬2ª¤±ªoŒ ¨¬o • ∞‘≤«²±ªo ≠˜„‘…²oŒ ƒ¤2° ¬¨
(Σχηοολ οφ Πηαρµαχψ, Σηενψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ §¨ √¨¯²³·«¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦©¬±ª¨µ³µ¬±·¶²©¦²°³²¶¬·¨ ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²± ¥¼ ‹°≤1 Μετηοδ : ׫¨ ¶¨³¤2
µ¤·¬²± º¤¶³¨µ©²µ° §¨²± ¤⁄¬¤°²±¶¬¯ ≤t{ ¦²¯∏°± º¬·«¤ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ¦²±¶¬¶·¬±ª²© ° ·¨«¤±²¯2º¤·¨µ2³«²¶³«²µ¬¦¤¦¬§¤¶ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯¨ ±·¤··«¨ ©¯²º
µ¤·¨ ²©t1s °#°¬±p t1 ׫¨ ˜∂ §¨·¨¦·¬²± º¤¶¶¨·¤·uxw ±°1 Ρεσυλτ : „ ¶·¤±§¤µ§ ‹°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·³µ²¦¨§∏µ¨ º¤¶§¨√¨¯²³¨ §©²µ¦²°³²¶¬·¨
ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²±oº¬·«us ¦²°°²± ³¨ ¤®¶¤±§¤¶¬°¬¯¤µ¬·¼·«µ¨¶«²¯§²©|1s ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §1 Χονχλυσιον : ׫¬¶° ·¨«²§º¤¶¤¦¦∏µ¤·¨oµ¨³¨ ¤·¤¥¯¨
¤±§∏¶¨©∏¯ ©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©¦²°³²¶¬·¨ ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²±1
[ Κεψ ωορδσ] ≤²°³²¶¬·¨ ƒ²¯¬¬Œ¶¤·¬§¬¶¬±­¨¦·¬²±~ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ~ ‹°≤ ©¬±ª¨µ³µ¬±·~¶¬°¬¯¤µ¬·¼
≈责任编辑 鲍 雷 
≈收稿日期  ussx2sy2us
≈基金项目  国家自然科学基金项目k|sus|ssxl
≈通讯作者  3 程翼宇 oר¯ }ksxztl{z|xttv{ o∞2°¤¬¯}¦«¨ ±ª¼¼ ƒ
½­∏q¨§∏q¦±
‹°≤测定双丹颗粒中丹酚酸 …和芍药苷的含量
葛志伟 o贺 庆 o水文波 o程翼宇 3
k浙江大学 药学院 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要  目的 }建立双丹颗粒中丹酚酸 …和芍药苷的含量测定方法 ∀方法 }采用高效液相色谱法 o²µ¥¤¬ ≥…2
≤t{色谱柱 o流动相 „s1sx h的磷酸水溶液 o…含 s1sx h磷酸的 w h乙腈甲醇溶液 o梯度洗脱 o流速 t °#°¬±p t o柱温
ux ε o检测波长 uvs ±° ∀结果 }丹酚酸 …在 s1zts ∗ uu1z Λªkρ€ s1||| |l o芍药苷在 s1tsv ∗ v1vs Λªkρ€ s1||| |l有
良好的线性关系 o测定了 v个批次双丹颗粒中丹酚酸 …和芍药苷的含量 o其中丹酚酸 …的含量范围为 y1wy ∗ tt1y
°ª#ªp t o芍药苷的含量范围为 t1ww ∗ t1z{ °ª#ªp t ∀结论 }该方法准确度好 !重复性好 !稳定可靠 o可以作为双丹颗粒
质量控制的方法 ∀
≈关键词  高效液相色谱法 ~双丹颗粒 ~丹酚酸 …~芍药苷
≈中图分类号  • u{w1t ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltv2tsyu2sv
双丹颗粒由丹参和丹皮 u味药组成 o具有改善
心肌微循环 o增加冠状动脉的血流量 o降低心肌的耗
氧量 o维持缺氧心肌的氧代谢供求平衡 o保护心脏的
功能 o还可抗血栓形成和抗动脉粥样硬化 ∀国家药
品标准选用 ׏≤2˜∂ 法≈≥v2uwvk÷2uvvl2ussskl 测
定原儿茶醛的含量 o该法处理繁琐 o误差较大 ~亦有
报道用 ‹°≤测定丹参素和原儿茶醛的含量来进行
质量控制≈t  o但这 u种成分均来自于丹参 o不能代表
全方药效物质基础 ∀为了更好地控制该制剂的质
量 o有必要建立一种更合理的含量分析方法 ∀本研
究以丹酚酸 …和芍药苷作为质量控制指标 o使用高
#uyst#
第 vt卷第 tv期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tv
∏¯¼ oussy
效液相色谱法测定二者在双丹颗粒中的含量 o并进
行方法学考察 o为改进和提高双丹颗粒的质量控制
标准提供依据 ∀
1 仪器与试药
„ª¬¯¨ ±·ttss型高效液相色谱仪k在线脱气机 !
四元梯度泵 !自动进样器 !柱温箱 !⁄„⁄检测器 !
≤«¨ °¶·¤·¬²±色谱工作站l ~׊p tyŠ高速台式离心
机k上海安亭科学仪器厂l ~∞×׏∞• p „∞uws型电
子天平k上海梅特勒2托利多仪器有限公司l ∀双丹
颗粒k山东孔圣堂制药有限公司l ~丹酚酸 …对照品
k天津天士力集团l o芍药苷对照品k中国药品生物制
品检定所 o纯度 ∴|{ h l ~甲醇与乙腈均为色谱纯 o磷
酸为分析纯 o水为超纯水 ∀
2 方法与结果
211 色谱条件 „ª¬¯¨ ±·²µ¥¤¬ ≥…2≤t{柱kw1y °° ≅
uxs °° ox Λ°l ~流动相 „s1sx h的磷酸水溶液 o…含
s1sx h磷酸的 w h 乙腈甲醇溶液 o洗脱梯度 s ∗ ts
°¬±ox h ∗ vv h …ots ∗ us °¬±ovv h …ous ∗ ux °¬±o
vv h ∗ ws h …oux ∗ xs °¬±ows h …~流速 t °#°¬±pt ~
柱温 ux ε ~检测波长 uvs ±°∀在上述色谱条件下 o
丹酚酸 …和芍药苷与其他峰能达到较好的分离 o对
照品溶液 o样品溶液与阴性对照色谱图见图 t ∀
图 t 双丹颗粒 ‹°≤图
„1 对照品 ~…1 缺丹皮阴性样品 ~≤1缺丹参阴性样品 ~
⁄1供试品 t1 芍药苷 ~u1 丹酚酸 …
212 对照品溶液的制备 精密称量丹酚酸 … !芍药
苷对照品适量 o分别加甲醇制成 s1zts ª#pt和
s1tsv ª#pt的对照品溶液 ∀
213 供试品溶液的制备 取本品约 ts ªo研为粉
末 o取粉末 t ªo精密称定 o精密加水 us °后称重 o
超声提取 t «o用水补足失量 o摇匀 o滤过ks1wx Λ°微
孔滤膜l o取续滤液 o即得 ∀
214 线性关系考察 分别精密移取丹酚酸 …和芍
药苷对照品溶液 s1t os1u os1w os1{ ot1y ov1u °o置于
ts °量瓶中 o加水稀释至刻度 o吸取上述溶液 ts
ˏ注入高效液相色谱仪 o依上述色谱条件测定 ∀以
进样量为横坐标k Ξ) ,以峰面积为纵坐标( Ψl o绘制
标准曲线 ∀回归方程 }丹酚酸 … Ψ€ tx| x1z Ξ p w1s|
(ρ€ s1||| |l o进样量在 s1zts ∗ uu1z Λª线性关系
良好 ~芍药苷 Ψ€ tvv s1w Ξ p u1{t(ρ€ s1||| |l o进
样量在 s1tsv ∗ v1vs Λª线性关系良好 ∀
215 精密度试验 分别精密吸取丹酚酸 …和芍药
苷对照品溶液 ts ˏo分别连续进样 x次 o依法测得
丹酚酸 …峰面积 • ≥⁄ s1su{ h o芍药苷峰面积 • ≥⁄
s1yu h ∀
216 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 ts
ˏo分别于 s ot ou ow oy o{ ots otu ouw «注入高效液相
色谱仪 o记录丹酚酸 …和芍药苷的峰面积 o计算峰
面积相对标准偏差 • ≥⁄分别为 v1s h和 u1s h o结果
显示样品溶液中丹酚酸 …和芍药苷在 uw «内稳定 ∀
217 阴性对照实验 取不含丹参丹皮阴性样品 o按
/供试品溶液的制备0项下的方法制备 o记录色谱图 o
结果在丹酚酸 …和芍药苷相对应的位置上未见色
谱峰 ∀
218 重复性试验 分别精密称取同一批次样品
ksvtsstlx份 o按/供试品溶液的制备0项下的方法 o
平行制备 x份样品 o按上述色谱条件进行测定 o计算
得丹酚酸 …和芍药苷的 • ≥⁄分别为 t1x h和 t1v h ∀
结果表明测定方法的重复性良好 ∀
219 加样回收率试验 精密称取同一批次
ksvtsstl已知含量双丹颗粒 s1xss ªo按样品含量的
{s h otss h otus h加入适量对照品k分别为对照品
t ∗ vl ∀按样品测定项下方法操作 o重复 v次取平均
值 o计算回收率 ∀结果如表 t ∀
表 t 丹酚酸 …及芍药苷加样回收率k ν € vl h
测定成分 回收率 • ≥⁄对照品 t对照品 u对照品 v对照品 t对照品 u对照品 v
丹酚酸 … || qws |{ qy| tss qt s qy{ s q{v s qvt
芍药苷 || q{t |{ qvu |{ qwv s qzy t qts s qxx
2110 样品含量测定 取 v批样品ksvtsst oswsust o
swszsyl o按/供试品溶液的制备0项下的方法制备 o
依法测定 o计算丹酚酸 …和芍药苷的含量 o结果见
表 u ∀
3 讨论
311 丹酚酸 …是丹参中主要的水溶性活性成分 o具
抗血栓 !改善血液循环 !抗氧化等作用≈u2w  o芍药苷是
丹皮中主要的单萜苷类活性成分≈x2z  o此 u种成分是
双丹颗粒中的重要活性成分 o含量较高 o且分别来源
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第 vt卷第 tv期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 u v批样品中丹酚酸 …和芍药苷含量k ν € vl
批号
丹酚酸 … 芍药苷
质量分数
r°ª#ªpt
• ≥⁄
r h
质量分数
r°ª#ªpt
• ≥⁄
r h
svtsst y qwy s q|{ t qww s qv{
swsust z qu{ u q|s t qwx s qwx
swszsy tt qy s q{v t qz{ t qv
于丹参和丹皮 o故本方法选择这两种物质作为考察
指标 ∀
312 考察了甲醇 !xs h甲醇和水 v种溶剂分别在超
声和热回流 u种提取方式下丹酚酸 …和芍药苷的提
出率 o结果显示用水作为提取溶媒要优于甲醇 o和
xs h甲醇提取率相当 ~对于丹酚酸 …的提取率超声
高于回流 o在加热回流条件下 o丹酚酸 …的含量随
着加热时间的延长显著下降 o这与丹酚酸 …的热不
稳定性和易降解特性≈{ 有关 ∀综合考虑 o采用以水
为溶媒 o超声提取的方法 ~亦对提取时间进行了优
化 o结果显示超声提取 t «能将丹酚酸 …和芍药苷
提取完全 ∀
313 芍药苷类化合物 Κ°¤¬为 uvs ±° o丹酚酸类化合
物 Κ°¤¬为 uuw ouxw ou{y ovs{ ±° o由于丹酚酸 …含量较
高且在 uvs ±°处吸收也较大 o且在该波长下干扰
少 o故选用检测波长为 uvs ±°∀
314 由于丹酚酸 …为酸性化合物 o流动相中不加酸
会产生拖尾现象 o故在流动相中加入酸来改善分离
效果 o由于醋酸在 uvs ±°容易发生基线的漂移 o故
选择加入磷酸 o同时也比较了甲醇与乙腈的分离效
果 o结合有关文献≈|  o最终确定本实验中的流动相 o
使得丹酚酸 …和芍药苷能够达到理想的分离效果 ∀
≈参考文献 
≈t  李正国 o郭凡岭 o张爱芩 q • °2‹°≤测定双丹颗粒中丹参素和
原儿茶醛含量 q药物分析杂志 oussw ouwkxl }xx{ q
≈u  彭司勋 o赵守训 o廖清江 o等 q药物化学进展 q第 t卷 q北京 }
中国医药科技出版社 ousss }ust q
≈v  中国医学科学院药物研究所 q中草药现代研究 q第 u卷 q北
京 }北京医科大学 中国协和医科大学联合出版社 ot||z }wzu q
≈w  戈升荣 o俞一心 o谢更新 q丹酚酸的药理作用研究进展 q中药
材 oussu ouxk|l }y{v q
≈x  高本波 o戴俐明 o徐淑云 q丹皮总甙和白芍总甙对自由基清除
作用的影响 q潍坊医学院学报 ot||y ot{ktl }wv q
≈y  戴俐明 o高本波 o徐淑云 q丹皮总甙肝保护作用的研究 q中国
药理学通报 ot||w otsktl }x{ q
≈z  王 瑜 o明 亮 o岑德意 o等 q丹皮总甙抗实验性癫痫的研究 q
中国药理学通报 ot||z otvkvl }uy{ q
≈{  王凤美 o李 磊 o柳先平 o等 q丹参药材中丹酚酸 …的提取及
其 ‹°≤测定 q现代中药研究与实践 oussw ot{k≥tl }yu q
≈|  程显隆 o王 峰 o冯玉飞 o等 q丹参中丹酚酸 …的高效液相色
谱法含量测定 q药物分析杂志 oussv ouvkul }tw| q
∆ετερµινατιον οφ σαλϖιανολιχ αχιδ Β ανδ παεονιφλοριν ιν
Σηυανγδαν γρανυλεσ βψ ΗΠΛΧ
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( Χολλεγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz , Χηινα)
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Μετηοδ : ׫¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¶¨³¤µ¤·¬²± º¤¶³¨µ©²µ° §¨²± ¤ ²µ¥¤¬ ≥… ≤t{ ¦²¯∏°± º¬·«¤ ¬¯±¨ ¤µªµ¤§¬¨±·¨¯∏·¬²± ²© ³«²¶³«²µ¬¦¤¦¬§2º¤·¨µ
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¶¨·¤·ux ε q׫¨ ˜∂ §¨·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·« º¤¶¶¨·¤·uvs ±° q Ρεσυλτ : ׫¨ ¬¯±¨ ¤µµ¤±ª¨µº¤¶²©s1zts2uu1z Λª©²µ¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§ … ¤±§
s1tsv2v1vs Λª©²µ³¤¨ ²±¬©¯²µ¬±q׫µ¨¨¥¤·¦«¨¶²©≥«∏¤±ª§¤± ªµ¤±∏¯ ¶¨º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §o¤±§·«¨ ¦²±·¨±·²©¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§…µ¤±ª¨§©µ²° y1wy2
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[ Κεψ ωορδσ] ‹°≤ ~≥«∏¤±ª§¤± ªµ¤±∏¯ ¶¨~¶¤¯√¬¤±²¯¬¦¤¦¬§…~³¤¨ ²±¬©¯²µ¬±
≈责任编辑 鲍 雷 
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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