免费文献传递   相关文献

Studies on content determination and fingerprint of active constituents in different parts of cortex moutan

牡丹皮不同部位有效成分含量测定及指纹图谱化学成分研究



全 文 :StudiesoncyclodextrininclusioncomplexesofDragon'sbloodand
itstabletspreparation
HANBinbin1,PEIHuina1,SUNHaisong2,NINGQuankui3,RENYong1
(1.JiangsuKeyLaboratoryforSupramolecularMedicinalMaterialsandApplications,Nanjing210046,China;
2.CenterofDrugDiscovery,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,China;
3.YunnanDihonPharmaceuticalCo.Ltd.,Kunming650000,China)
[Abstract] Objective:TostudythecyclodextrininclusioncomplexesofDragon'sbloodforimprovingthedrugsolubilityandthe
preparation.Method:Theinclusioncomplexeswerepreparedwithβcyclodextrin,HPβcyclodextrin,SBEβcyclodextrinandcon
firmedbyDTA.Theactivityoftheinclusioncomplexwastestedbyanimalexperiments.Inclusioncomplexestabletswerepreparedand
thedissolutiontestwasperformed.Result:Thesolubilityofinclusioncomplexeswasincreasedto137516839times.Theactivityof
theinclusioncomplexwasmarkedlyimproved,anddissolutionratewas7869%.Conclusion:Thecyclodextrininclusioncomplexesof
Dragon'sbloodhaveagoodsolubility,dissolutionrateandpharmacologicalactivity.
[Keywords] Dragon'sblood;inclusion;cyclodextrin
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080516
[基金项目] 河南省重大科技攻关项目(0422030700)
[通讯作者] 周刚,Tel:(010)68585566442,Email:zhoug@
cde.org.cn
牡丹皮不同部位有效成分含量测定及
指纹图谱化学成分研究
周 刚1,吕庆红2
(1.国家食品药品监督管理局 药品审评中心,北京 100038;
2.河南中医学院 第一附属医院,河南 郑州 450000)
[摘要] 目的:对牡丹皮不同部位进行化学成分研究,为牡丹皮的最佳产地加工方法提供依据。方法:采用高
效液相色谱法,测定牡丹皮各部位中丹皮酚、芍药苷的含量,并进行指纹图谱分析。结果:栓皮部与韧皮部比较,其
丹皮酚的含量约高出1倍,木心部中的含量接近韧皮部的1/2;栓皮部与韧皮部比较,其芍药苷的含量约高出35
倍,木心部中的含量约高出韧皮部的1倍;指纹图谱中,韧皮部中有效成分的含量较高。结论:产地加工时可以不
去皮而只去心,既能简化产地加工的繁琐程序又能提高样品中有效成分的含量。
[关键词] 牡丹皮;不同部位;化学成分;产地加工
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18207004
  牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹 Paeoniasuf
fruticosaAndr.的根皮。性微寒,味苦、辛。归心、
肝、肾经。具有清热凉血、活血化瘀之功效。洛阳的
牡丹皮产量很大,在当地占有很大的市场份额。
《中国药典》2005年版一部中“牡丹皮”项下中指出
其加工方法为:秋季采挖牡丹的根部,除去细根和泥
沙,剥取根皮,晒干[1]。目前市场上的牡丹皮加工
品有刮丹皮、熏丹皮和连丹皮,刮丹皮是取鲜根剪掉
须根,剪开分枝,趁鲜用玻璃片刮掉外表皮,抽出木
质部,晒干。熏丹皮是鲜根去掉须根、剪开分枝后,
·0702·
第33卷第18期
2008年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 18
September,2008
在密闭容器中用硫磺熏1h左右,取出,趁鲜刮去外
表皮,再密闭用硫磺熏一次,取出,晒干。连丹皮是
鲜根仅去掉木质部,不刮掉外表皮,晒干。目前产地
与市场中,以熏丹皮和刮丹皮为主流加工方法[2]。
本研究通过牡丹皮各部位中丹皮酚、芍药苷的含量
测定及其指纹图谱分析,对洛阳产牡丹皮的产地加
工方法进行探讨。
1 材料
2010A高效液相色谱仪(日本岛津),PDAD检
测器;KQ3200DE型医用数控超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司);电子天平(北京赛多利斯仪器
系统有限公司)。
甲醇(天津科密欧化学试剂开发中心,分析
纯);甲醇(天津四友生物医学技术有限公司,色谱
纯);水为娃哈哈纯净水;丹皮酚对照品(中国药品
生物制品检定所,批号110708200306)。
2 样品的制备
2.1 样品的采集
牡丹皮药材采自洛阳市土桥村,药材均为分株
移植3年的牡丹皮,每份样品按照不同地点各采集
3批。经河南中医学院生药教研室曹继华教授鉴
定。
2.2 不同部位样品的制备
挖取牡丹的根,用水迅速冲淋,晾至外表栓皮上
无水分,刮取栓皮部,抽取木心,并按照木心的直径
将其分为粗木心(直径3~5mm)、中木心(直径1~
3mm)和细木心(直径为05~1mm),将栓皮部、韧
皮部及木心部(3种规格)分别晒干,粉碎成粗粉,备
用。
3 方法与结果
3.1 牡丹皮各部位中丹皮酚的含量测定[13]
3.1.1 色谱条件 HypersilODS色谱柱(46mm×
250mm,5μm);流动相甲醇水(45∶55);检测波长
274nm;柱温30℃;流速10mL·min-1;进样量10
μL。
3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照
品适量,加甲醇溶解配制成237mg·L-1的对照品
溶液。
3.1.3 供试品溶液的制备[1] 称取牡丹皮不同部
位样品粗粉约05g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精
密加入甲醇50mL,密塞,摇匀,称定质量,超声处理
30min,取出,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的
质量,摇匀,滤过。精密量取续滤液1mL,置10mL
量瓶中,加甲醇稀释至刻度,用045μm的滤膜滤
过,即得各供试品溶液。
3.1.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液4,8,
12,16,20,20μL注入高效液相色谱仪,以对照品的
量为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,Y=
532×103X-7296940,r=09999,表明丹皮酚在
0047~047μg线性关系良好。
3.1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL,
按照上述色谱条件连续进样5次,依法测定,以丹皮
酚峰面积计算,RSD042%,符合要求。
3.1.6 重复性试验 取同一份样品(韧皮部)粉末
5份,按照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取
各供试品溶液10μL,按照上述色谱条件测定,以丹
皮酚含量计算,RSD044%,符合要求。
3.1.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液
10μL,按照上述色谱条件在0,05,1,2,3,4h进行
测定,以丹皮酚峰面积计算,RSD072%,表明样品
在4h内基本稳定。
3.1.8 加样回收率试验 取已知含量的牡丹皮粉末
9份,每份025g,分别精密称取,并分别精密加入高、
中、低不同量丹皮酚对照品,按照供试品溶液的制备
方法制备得到样品溶液,再照上述色谱条件进行丹皮
酚的含量测定,计算加样回收率,结果见表1。
表1 丹皮酚加样回收率
取样量
/g
样品中
含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
02513 636 948 1589 1005 1003 15
02508 634 951 1596 1016    
02497 632 952 1570 985    
02520 637 636 1264 986 1003 16
02511 635 633 1278 1016    
02508 634 634 1273 1008    
02494 631 319 945 984 998 16
02507 634 318 957 1016    
02510 635 320 953 994    
3.1.9 样品的测定 分别精密吸取上述各供试品
溶液(各3份)及对照品溶液各10μL,按照上述色
谱条件进行测定,将所得丹皮酚峰面积带入回归方
程计算,得到牡丹皮各部位中丹皮酚的含量。结果
见表2。
3.2 牡丹皮各部位中芍药苷的含量测定[14]
3.2.1 色谱条件 HypersilODS色谱柱(46mm×
250mm,5μm);流动相甲醇水(30∶70);检测波长
·1702·
第33卷第18期
2008年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 18
September,2008
   表2 不同部位样品中丹皮酚的质量分数
部位 平均值/% RSD/%
栓皮部   463 053
韧皮部   233 105
木心部 细 115 085
    中 110 150
    粗 102 103
230nm;柱温30℃;流速10mL·min-1;进样量
10μL。
3.2.2 芍药苷对照品溶液的制备 精密称取芍药
苷对照品适量,加甲醇溶解配制成0495g·L-1的
对照品溶液。
3.2.3 供试品溶液的制备[1] 称取牡丹皮不同部
位样品粗粉约05g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精
密加入甲醇25mL,密塞,摇匀,称定质量,浸泡4h,
超声处理20min,取出,放冷,再称定质量,用甲醇补
足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,用 045μm
的滤膜滤过,即得各供试品溶液。
3.2.4 线性关系考察 分别精密吸取芍药苷对照
品溶液(0495g·L-1)2,4,8,12,16,20μL,注入高
效液相色谱仪,以对照品的量为横坐标,峰面积为纵
坐标进行线性回归,Y=124×106X+18291055,
r=09998,表明芍药苷在099~990μg线性关系
良好。
3.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL,
按照上述色谱条件连续进样5次,依法测定,以芍药
苷峰面积计算,RSD048%,符合要求。
3.2.6 重复性试验 取同一份样品(韧皮部)粉末
5份,按照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取
各供试品溶液10μL,按照上述色谱条件测定,以芍
药苷含量计算,RSD10%,符合要求。
3.2.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液
10μL,按照上述色谱条件在0,05,1,2,3,4h进行
测定,以芍药苷峰面积计算 RSD088%,结果表明
样品在4h内基本稳定。
3.2.8 加样回收率试验 取已知含量的牡丹皮
(韧皮部)粉末9份,每份025g,分别精密称取,并
分别精密加入高、中、低不同剂量芍药苷对照品,按
照供试品溶液得制备方法得到样品溶液,再照上述
色谱条件进行芍药苷的含量测定,计算加样回收率,
结果见表3。
3.2.9 样品的测定 分别精密吸取上述各份供试
品溶液(每份3批)及对照品溶液10μL,按照上述
   表3 芍药苷加样回收率
取样量
/g
样品中
含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
02498 255 378 630 992 999 14
02513 256 382 643 989    
02537 259 381 646 1015    
02524 257 249 509 1012 1000 14
02482 253 253 502 984    
02509 256 252 509 1004    
02526 258 128 388 1015 1005 11
02514 256 124 381 1008    
02492 254 127 380 992    
色谱条件进行测定,将所得芍药苷峰面积带入回归
方程计算,得到牡丹皮各部位中芍药苷的含量。结
果见表4。
表4 不同部位样品中芍药苷的质量分数
部位 平均值/% RSD/%
栓皮部   471 048
韧皮部   108 067
木心部 细 233 048
    中 234 100
    粗 234 075
3.3 牡丹皮各部位HPLC指纹图谱研究[56]
3.3.1 丹皮酚对照品溶液的制备 精密称取丹皮
酚对照品适量,加甲醇配制成浓度为592mg·L-1
的对照品溶液。
3.3.2 芍药苷对照品溶液的制备 精密称取芍药
苷对照品适量,加甲醇配制成0512g·L-1的对照
品溶液。
3.3.3 色谱条件 HypersilODS色谱柱(46mm×
250mm,5μm);柱温30℃ ;流动相0~30min,乙
腈10~15%,05%冰醋酸 90% ~85%;30~60
min,乙腈15%~50%,05%冰醋酸85%~50%;流
速10mL·min-1;λs274nm;进样量10μL。
3.3.4 各供试品溶液的制备 精密称取牡丹皮各
部位粗粉约02g,精密称定,置于150mL烧瓶中,
精密加入甲醇50mL,称重,水浴加热回流提取1h,
取出,放凉,称重,用甲醇补足减失的质量,滤过。取
续滤液,045μm滤膜滤过,即得。
3.3.5 精密度试验 取同一供试品溶液(韧皮部
提取溶液),连续进样5次,考察色谱峰的相对保留
时间、峰面积比值的一致性,结果表明,RSD<3%,
符合指纹图谱的技术要求。
3.3.6 重复性试验 取牡丹皮(韧皮部提取溶液)5
份,依法测定,结果表明色谱峰的相对保留时间和峰
·2702·
第33卷第18期
2008年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 18
September,2008
面积的比值RSD<3%,符合指纹图谱的技术要求。
3.3.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(韧皮部提取
溶液),分别在2,4,6,8,10,12h检测。结果表明,其色
谱峰的相对保留时间和峰面积的比值基本没有明显变
化,RDS<3%,说明供试品溶液在12h内稳定。
3.3.8 样品HPLC指纹图谱分析 精密吸取供试
品溶液和对照品溶液各10μL,分别注入液相色谱
仪,按照上述色谱条件进行检测,记录60min的色
谱峰,结果见图1~3。
图1 丹皮酚对照品HPLC图
图2 芍药苷对照品HPLC图
4 讨论
由表2可知,栓皮部与韧皮部比较,其丹皮酚的
含量约高出1倍,不同粗细的木心部中含量差别不
大,接近韧皮部的1/2,由表4可知,栓皮部与韧皮
部比较,其芍药苷的含量约高出35倍,不同粗细的
木心部中含量差别不大,约高出韧皮部的1倍。由
  
从下至上依次为:栓皮部,韧皮部,粗木心部,
中木心部,细木心部
图3 不同部位样品HPLC叠加图
图3中可以看出,栓皮部中各有效峰[6]的含量亦较
高。笔者通过测定重量质量,发现栓皮部、韧皮部、木
心部分别占总重量质量的814%,8142%,1044%,
因此考虑可以不去皮而只去心,既能简化产地加工的
繁琐程序又能提高样品中有效成分的含量[7]。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S]2005:119.
[2] 吕文海,张 欣,宋 磊,等.山东菏泽牡丹皮产地加工品的定
量分析[J].中成药,2005,27(10:1162.
[3] 姜 萧,张广宏,刘学起.HPLC法测定牡丹皮中丹皮酚的含量
[J].齐鲁药事,2004,23(6):31.
[4] 朱山寅.反相高效液相色谱法测定牡丹皮药材及其制剂中芍
药苷的含量[J].医药导报,2005,24(11):1055.
[5] 许舜军,李 鹏,杨 柳,等.牡丹皮高效液相色谱指纹图谱研
究[J].中国中药杂志,2006,31(20):1677.
[6] 周立艳,梁生旺,王淑美,等.牡丹皮高效液相色谱“药效指纹
图谱”研究[J].时珍国医国药,2008,19(6):1337.
[7] 周立艳,王淑美,梁生旺,等.牡丹皮产地加工方法的研究[J].
时珍国医国药,2008,19(4):842.
Studiesoncontentdeterminationandfingerprintof
activeconstituentsindiferentpartsofcortexmoutan
ZHOUGang,LVQinghong
(1.CenterforDrugEvaluation,StateFoodandDrugAdministration,Beijing100038,China;
2.FirstAfiliatedHospital,HenanTraditionalChineseMedicineColege,Zhengzhou450000,China)
  [Abstract] Objective:TodeterminethechemicalconstituentsindiferentpartsofCortexMoutan,whichcanprovidesevi
dencestotheprocessingtechniquesofCortexMoutan.Method:Thecontentsofpaeonol,peoniflorinandfingerprintsindiferentparts
ofCortexMoutanweredeterminedbyHPLC.Result:Compareedwithphloem,paeonolincorkistwiceasmany,butpaeonolindura
menishalfasmanypeoniflorinincorkishalfandfourtimesasmany,peoniflorininduramenistwiceasmany,thecontentsofactive
ingredientsinduramenarehighinfingerprint.Conclusion:Ifweonlyabandonthecore,thenwemaygetsimpleprocessingswiththe
activeingredientcontentsincreasing.
[Keywords] CortexMoutan;difererntparts;chemicalconstituents;processingtechniques [责任编辑 李 禾]
·3702·
第33卷第18期
2008年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 18
September,2008