全 文 :StudiesoncyclodextrininclusioncomplexesofDragon'sbloodand
itstabletspreparation
HANBinbin1,PEIHuina1,SUNHaisong2,NINGQuankui3,RENYong1
(1.JiangsuKeyLaboratoryforSupramolecularMedicinalMaterialsandApplications,Nanjing210046,China;
2.CenterofDrugDiscovery,NanjingNormalUniversity,Nanjing210046,China;
3.YunnanDihonPharmaceuticalCo.Ltd.,Kunming650000,China)
[Abstract] Objective:TostudythecyclodextrininclusioncomplexesofDragon'sbloodforimprovingthedrugsolubilityandthe
preparation.Method:Theinclusioncomplexeswerepreparedwithβcyclodextrin,HPβcyclodextrin,SBEβcyclodextrinandcon
firmedbyDTA.Theactivityoftheinclusioncomplexwastestedbyanimalexperiments.Inclusioncomplexestabletswerepreparedand
thedissolutiontestwasperformed.Result:Thesolubilityofinclusioncomplexeswasincreasedto137516839times.Theactivityof
theinclusioncomplexwasmarkedlyimproved,anddissolutionratewas7869%.Conclusion:Thecyclodextrininclusioncomplexesof
Dragon'sbloodhaveagoodsolubility,dissolutionrateandpharmacologicalactivity.
[Keywords] Dragon'sblood;inclusion;cyclodextrin
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080516
[基金项目] 河南省重大科技攻关项目(0422030700)
[通讯作者] 周刚,Tel:(010)68585566442,Email:zhoug@
cde.org.cn
牡丹皮不同部位有效成分含量测定及
指纹图谱化学成分研究
周 刚1,吕庆红2
(1.国家食品药品监督管理局 药品审评中心,北京 100038;
2.河南中医学院 第一附属医院,河南 郑州 450000)
[摘要] 目的:对牡丹皮不同部位进行化学成分研究,为牡丹皮的最佳产地加工方法提供依据。方法:采用高
效液相色谱法,测定牡丹皮各部位中丹皮酚、芍药苷的含量,并进行指纹图谱分析。结果:栓皮部与韧皮部比较,其
丹皮酚的含量约高出1倍,木心部中的含量接近韧皮部的1/2;栓皮部与韧皮部比较,其芍药苷的含量约高出35
倍,木心部中的含量约高出韧皮部的1倍;指纹图谱中,韧皮部中有效成分的含量较高。结论:产地加工时可以不
去皮而只去心,既能简化产地加工的繁琐程序又能提高样品中有效成分的含量。
[关键词] 牡丹皮;不同部位;化学成分;产地加工
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)18207004
牡丹皮为毛茛科芍药属植物牡丹 Paeoniasuf
fruticosaAndr.的根皮。性微寒,味苦、辛。归心、
肝、肾经。具有清热凉血、活血化瘀之功效。洛阳的
牡丹皮产量很大,在当地占有很大的市场份额。
《中国药典》2005年版一部中“牡丹皮”项下中指出
其加工方法为:秋季采挖牡丹的根部,除去细根和泥
沙,剥取根皮,晒干[1]。目前市场上的牡丹皮加工
品有刮丹皮、熏丹皮和连丹皮,刮丹皮是取鲜根剪掉
须根,剪开分枝,趁鲜用玻璃片刮掉外表皮,抽出木
质部,晒干。熏丹皮是鲜根去掉须根、剪开分枝后,
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在密闭容器中用硫磺熏1h左右,取出,趁鲜刮去外
表皮,再密闭用硫磺熏一次,取出,晒干。连丹皮是
鲜根仅去掉木质部,不刮掉外表皮,晒干。目前产地
与市场中,以熏丹皮和刮丹皮为主流加工方法[2]。
本研究通过牡丹皮各部位中丹皮酚、芍药苷的含量
测定及其指纹图谱分析,对洛阳产牡丹皮的产地加
工方法进行探讨。
1 材料
2010A高效液相色谱仪(日本岛津),PDAD检
测器;KQ3200DE型医用数控超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司);电子天平(北京赛多利斯仪器
系统有限公司)。
甲醇(天津科密欧化学试剂开发中心,分析
纯);甲醇(天津四友生物医学技术有限公司,色谱
纯);水为娃哈哈纯净水;丹皮酚对照品(中国药品
生物制品检定所,批号110708200306)。
2 样品的制备
2.1 样品的采集
牡丹皮药材采自洛阳市土桥村,药材均为分株
移植3年的牡丹皮,每份样品按照不同地点各采集
3批。经河南中医学院生药教研室曹继华教授鉴
定。
2.2 不同部位样品的制备
挖取牡丹的根,用水迅速冲淋,晾至外表栓皮上
无水分,刮取栓皮部,抽取木心,并按照木心的直径
将其分为粗木心(直径3~5mm)、中木心(直径1~
3mm)和细木心(直径为05~1mm),将栓皮部、韧
皮部及木心部(3种规格)分别晒干,粉碎成粗粉,备
用。
3 方法与结果
3.1 牡丹皮各部位中丹皮酚的含量测定[13]
3.1.1 色谱条件 HypersilODS色谱柱(46mm×
250mm,5μm);流动相甲醇水(45∶55);检测波长
274nm;柱温30℃;流速10mL·min-1;进样量10
μL。
3.1.2 对照品溶液的制备 精密称取丹皮酚对照
品适量,加甲醇溶解配制成237mg·L-1的对照品
溶液。
3.1.3 供试品溶液的制备[1] 称取牡丹皮不同部
位样品粗粉约05g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精
密加入甲醇50mL,密塞,摇匀,称定质量,超声处理
30min,取出,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的
质量,摇匀,滤过。精密量取续滤液1mL,置10mL
量瓶中,加甲醇稀释至刻度,用045μm的滤膜滤
过,即得各供试品溶液。
3.1.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液4,8,
12,16,20,20μL注入高效液相色谱仪,以对照品的
量为横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归,Y=
532×103X-7296940,r=09999,表明丹皮酚在
0047~047μg线性关系良好。
3.1.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL,
按照上述色谱条件连续进样5次,依法测定,以丹皮
酚峰面积计算,RSD042%,符合要求。
3.1.6 重复性试验 取同一份样品(韧皮部)粉末
5份,按照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取
各供试品溶液10μL,按照上述色谱条件测定,以丹
皮酚含量计算,RSD044%,符合要求。
3.1.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液
10μL,按照上述色谱条件在0,05,1,2,3,4h进行
测定,以丹皮酚峰面积计算,RSD072%,表明样品
在4h内基本稳定。
3.1.8 加样回收率试验 取已知含量的牡丹皮粉末
9份,每份025g,分别精密称取,并分别精密加入高、
中、低不同量丹皮酚对照品,按照供试品溶液的制备
方法制备得到样品溶液,再照上述色谱条件进行丹皮
酚的含量测定,计算加样回收率,结果见表1。
表1 丹皮酚加样回收率
取样量
/g
样品中
含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
02513 636 948 1589 1005 1003 15
02508 634 951 1596 1016
02497 632 952 1570 985
02520 637 636 1264 986 1003 16
02511 635 633 1278 1016
02508 634 634 1273 1008
02494 631 319 945 984 998 16
02507 634 318 957 1016
02510 635 320 953 994
3.1.9 样品的测定 分别精密吸取上述各供试品
溶液(各3份)及对照品溶液各10μL,按照上述色
谱条件进行测定,将所得丹皮酚峰面积带入回归方
程计算,得到牡丹皮各部位中丹皮酚的含量。结果
见表2。
3.2 牡丹皮各部位中芍药苷的含量测定[14]
3.2.1 色谱条件 HypersilODS色谱柱(46mm×
250mm,5μm);流动相甲醇水(30∶70);检测波长
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表2 不同部位样品中丹皮酚的质量分数
部位 平均值/% RSD/%
栓皮部 463 053
韧皮部 233 105
木心部 细 115 085
中 110 150
粗 102 103
230nm;柱温30℃;流速10mL·min-1;进样量
10μL。
3.2.2 芍药苷对照品溶液的制备 精密称取芍药
苷对照品适量,加甲醇溶解配制成0495g·L-1的
对照品溶液。
3.2.3 供试品溶液的制备[1] 称取牡丹皮不同部
位样品粗粉约05g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精
密加入甲醇25mL,密塞,摇匀,称定质量,浸泡4h,
超声处理20min,取出,放冷,再称定质量,用甲醇补
足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,用 045μm
的滤膜滤过,即得各供试品溶液。
3.2.4 线性关系考察 分别精密吸取芍药苷对照
品溶液(0495g·L-1)2,4,8,12,16,20μL,注入高
效液相色谱仪,以对照品的量为横坐标,峰面积为纵
坐标进行线性回归,Y=124×106X+18291055,
r=09998,表明芍药苷在099~990μg线性关系
良好。
3.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL,
按照上述色谱条件连续进样5次,依法测定,以芍药
苷峰面积计算,RSD048%,符合要求。
3.2.6 重复性试验 取同一份样品(韧皮部)粉末
5份,按照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取
各供试品溶液10μL,按照上述色谱条件测定,以芍
药苷含量计算,RSD10%,符合要求。
3.2.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液
10μL,按照上述色谱条件在0,05,1,2,3,4h进行
测定,以芍药苷峰面积计算 RSD088%,结果表明
样品在4h内基本稳定。
3.2.8 加样回收率试验 取已知含量的牡丹皮
(韧皮部)粉末9份,每份025g,分别精密称取,并
分别精密加入高、中、低不同剂量芍药苷对照品,按
照供试品溶液得制备方法得到样品溶液,再照上述
色谱条件进行芍药苷的含量测定,计算加样回收率,
结果见表3。
3.2.9 样品的测定 分别精密吸取上述各份供试
品溶液(每份3批)及对照品溶液10μL,按照上述
表3 芍药苷加样回收率
取样量
/g
样品中
含量/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
02498 255 378 630 992 999 14
02513 256 382 643 989
02537 259 381 646 1015
02524 257 249 509 1012 1000 14
02482 253 253 502 984
02509 256 252 509 1004
02526 258 128 388 1015 1005 11
02514 256 124 381 1008
02492 254 127 380 992
色谱条件进行测定,将所得芍药苷峰面积带入回归
方程计算,得到牡丹皮各部位中芍药苷的含量。结
果见表4。
表4 不同部位样品中芍药苷的质量分数
部位 平均值/% RSD/%
栓皮部 471 048
韧皮部 108 067
木心部 细 233 048
中 234 100
粗 234 075
3.3 牡丹皮各部位HPLC指纹图谱研究[56]
3.3.1 丹皮酚对照品溶液的制备 精密称取丹皮
酚对照品适量,加甲醇配制成浓度为592mg·L-1
的对照品溶液。
3.3.2 芍药苷对照品溶液的制备 精密称取芍药
苷对照品适量,加甲醇配制成0512g·L-1的对照
品溶液。
3.3.3 色谱条件 HypersilODS色谱柱(46mm×
250mm,5μm);柱温30℃ ;流动相0~30min,乙
腈10~15%,05%冰醋酸 90% ~85%;30~60
min,乙腈15%~50%,05%冰醋酸85%~50%;流
速10mL·min-1;λs274nm;进样量10μL。
3.3.4 各供试品溶液的制备 精密称取牡丹皮各
部位粗粉约02g,精密称定,置于150mL烧瓶中,
精密加入甲醇50mL,称重,水浴加热回流提取1h,
取出,放凉,称重,用甲醇补足减失的质量,滤过。取
续滤液,045μm滤膜滤过,即得。
3.3.5 精密度试验 取同一供试品溶液(韧皮部
提取溶液),连续进样5次,考察色谱峰的相对保留
时间、峰面积比值的一致性,结果表明,RSD<3%,
符合指纹图谱的技术要求。
3.3.6 重复性试验 取牡丹皮(韧皮部提取溶液)5
份,依法测定,结果表明色谱峰的相对保留时间和峰
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面积的比值RSD<3%,符合指纹图谱的技术要求。
3.3.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(韧皮部提取
溶液),分别在2,4,6,8,10,12h检测。结果表明,其色
谱峰的相对保留时间和峰面积的比值基本没有明显变
化,RDS<3%,说明供试品溶液在12h内稳定。
3.3.8 样品HPLC指纹图谱分析 精密吸取供试
品溶液和对照品溶液各10μL,分别注入液相色谱
仪,按照上述色谱条件进行检测,记录60min的色
谱峰,结果见图1~3。
图1 丹皮酚对照品HPLC图
图2 芍药苷对照品HPLC图
4 讨论
由表2可知,栓皮部与韧皮部比较,其丹皮酚的
含量约高出1倍,不同粗细的木心部中含量差别不
大,接近韧皮部的1/2,由表4可知,栓皮部与韧皮
部比较,其芍药苷的含量约高出35倍,不同粗细的
木心部中含量差别不大,约高出韧皮部的1倍。由
从下至上依次为:栓皮部,韧皮部,粗木心部,
中木心部,细木心部
图3 不同部位样品HPLC叠加图
图3中可以看出,栓皮部中各有效峰[6]的含量亦较
高。笔者通过测定重量质量,发现栓皮部、韧皮部、木
心部分别占总重量质量的814%,8142%,1044%,
因此考虑可以不去皮而只去心,既能简化产地加工的
繁琐程序又能提高样品中有效成分的含量[7]。
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S]2005:119.
[2] 吕文海,张 欣,宋 磊,等.山东菏泽牡丹皮产地加工品的定
量分析[J].中成药,2005,27(10:1162.
[3] 姜 萧,张广宏,刘学起.HPLC法测定牡丹皮中丹皮酚的含量
[J].齐鲁药事,2004,23(6):31.
[4] 朱山寅.反相高效液相色谱法测定牡丹皮药材及其制剂中芍
药苷的含量[J].医药导报,2005,24(11):1055.
[5] 许舜军,李 鹏,杨 柳,等.牡丹皮高效液相色谱指纹图谱研
究[J].中国中药杂志,2006,31(20):1677.
[6] 周立艳,梁生旺,王淑美,等.牡丹皮高效液相色谱“药效指纹
图谱”研究[J].时珍国医国药,2008,19(6):1337.
[7] 周立艳,王淑美,梁生旺,等.牡丹皮产地加工方法的研究[J].
时珍国医国药,2008,19(4):842.
Studiesoncontentdeterminationandfingerprintof
activeconstituentsindiferentpartsofcortexmoutan
ZHOUGang,LVQinghong
(1.CenterforDrugEvaluation,StateFoodandDrugAdministration,Beijing100038,China;
2.FirstAfiliatedHospital,HenanTraditionalChineseMedicineColege,Zhengzhou450000,China)
[Abstract] Objective:TodeterminethechemicalconstituentsindiferentpartsofCortexMoutan,whichcanprovidesevi
dencestotheprocessingtechniquesofCortexMoutan.Method:Thecontentsofpaeonol,peoniflorinandfingerprintsindiferentparts
ofCortexMoutanweredeterminedbyHPLC.Result:Compareedwithphloem,paeonolincorkistwiceasmany,butpaeonolindura
menishalfasmanypeoniflorinincorkishalfandfourtimesasmany,peoniflorininduramenistwiceasmany,thecontentsofactive
ingredientsinduramenarehighinfingerprint.Conclusion:Ifweonlyabandonthecore,thenwemaygetsimpleprocessingswiththe
activeingredientcontentsincreasing.
[Keywords] CortexMoutan;difererntparts;chemicalconstituents;processingtechniques [责任编辑 李 禾]
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