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Influence of daidzein on left ventricular remodeling in rats with hypertrophic myocardium induced by pressure overload

大豆苷元对压力负荷性心肌肥厚大鼠心室重构的影响



全 文 :大豆苷元对压力负荷性心肌肥厚
大鼠心室重构的影响
周 俐 3 o周 青 o熊小琴 o刘建新 o何 蔚
k赣南医学院 o江西 赣州 vwtsssl
≈摘要   目的 }研究大豆苷元 k§¤¬§½¨ ¬±o⁄⁄l对压力负荷性心肌肥厚大鼠心室重构的保护作用及其机制 ∀方
法 }采用腹主动脉缩窄法制备大鼠心肌肥厚模型 ∀分假手术组 !模型组 !⁄⁄kvsoysotus °ª# ®ªpt l治疗组 ~w周后
处死大鼠 o测量大鼠全心质量指数 k‹ • r…• l和左室质量指数 k∂ • r…• 即 ∂ Œlo测定左室心肌纤维直径 k ⁄lo
检测左室心肌组织羟脯氨酸 k‹ ¼³l!一氧化氮 k‘’l!血管紧张素 µ k„±ªµ l含量和一氧化氮合酶 k‘’≥lo‘¤n 2Žn 2
„×°¤¶¨o≤¤u n 2„×°¤¶¨活性 ~检测血浆 „±ªµ含量 ∀结果 }与模型组比较 ⁄⁄能显著提高心肌组织 ‘’含量和结构型
‘’≥k¦‘’≥lo‘¤n 2Žn 2„×°¤¶¨o≤¤u n 2„×°¤¶¨活性 ~降低心肌组织诱生型 ‘’≥k¬‘’≥l活性 ~抑制血浆及心肌组织 „±ª
µ和胶原的产生 ~减轻心脏质量参数 k‹ • r…• o∂ Œl及  ⁄∀结论 }⁄⁄对压力负荷性心肌肥厚大鼠心室重构具有
保护作用 ~其机制与升高 ‘’含量 !抑制 „±ªµ产生有关 ∀
≈关键词   大豆苷元 ~心室重构 ~压力超负荷 ~一氧化氮 ~血管紧张素 µ
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszltw2tww|2sw
≈收稿日期   ussy2ts2tt
≈基金项目   江西省卫生厅中医药资助项目 kussy„yyl
≈通讯作者   3 周俐 oר¯}ksz|zl{uy|zzvo∞2°¤¬¯}½«²∏¯¬ys||ƒ
¼¤«²²q¦²°q¦±
心肌肥厚是心脏长期负荷过重的一种适应性反
应 o是以心肌细胞及间质细胞蛋白质合成增加和细
胞体积增大为主要特征的心室重构 o是多种心血管
系统疾病的常见并发症 o可导致心力衰竭 !严重的心
律失常和重要的动脉分支破裂 o如何预防与逆转心
室重构已成为当今治疗的重要目标 ∀研究表明压力
负荷可能通过刺激心肌内分泌活化并产生多种舒缩
血管的活性物质而诱导心肌肥厚 ≈tou  ∀大豆苷元是
一种从大豆中分离提取的异黄酮类化合物 ~研究发
现其具有广泛的生物学作用 o如雌激素样作用 !抗肿
瘤 !抗心率失常 !抗脑缺血等 ≈v  o对心血管有良好的
保护作用 ≈w  ∀本研究采用腹主动脉缩窄法致大鼠
压力负荷性心肌肥厚模型 o探讨大豆苷元对心室重
构的保护作用及其作用机制 ∀
1 材料和方法
1q1 药品与试剂 大豆苷元 k§¤¬§½¨ ¬±o⁄⁄o宜化化
工有限责任公司 l~‹¼³o‘’o‘’≥o„×°酶和考马斯
亮蓝蛋白测定试剂盒 k南京建成生物工程研究所 l~
„±ªµ放射免疫分析试剂盒 k解放军总医院科技开
发中心东亚免疫所 l~其他试剂均为国产分析纯 ∀
1q2 仪器 zuu‘可见分光光度计 k上海精密科学
仪器有限公司 loŽ⁄≤ p uswy低速冷冻离心机 k合肥
科大创新股份有限公司中佳分公司 lo׊vu{…型光
学分析天平 k湘仪天平仪器厂 lo≥‘p y|x型智能放
免 Χ测量仪 k上海核福光电仪器有限公司 lo麦克奥
迪病理图像分析系统 k麦克奥迪公司 l∀
1q3 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 o雄性 o体重 kuus ∗ uxsl ªo
由赣南医学院实验动物中心提供 ∀
1q4 分组与给药 大鼠按体重随机分成 x组 o每组 z
只 }假手术组 o腹主动脉缩窄模型组 o⁄⁄vsoysotus °ª
# ®ªpt治疗组 ∀参照文献 ≈x 制备大鼠心肌肥厚模
型 }用 tsh水合氯醛溶液 kvxs °ª# ®ªpt o¬³l麻醉 o无
菌条件下从大鼠左侧腹部切口 o在肾动脉上方 s1x ¦°
处分离主动脉 o用 w号丝线将腹主动脉和 {号针头一
同结扎 o确认扎紧后抽去针头 o造成该部位不完全结
扎 o逐层缝合腹部切口 ∀术后 t周每只大鼠 ¬°青霉
素 x万 ˜抗感染 ∀假手术组动物分离腹主动脉但不
结扎 o其余步骤同造模组 ∀治疗组大鼠于造模第 u天
开始分别灌胃给药 ⁄⁄ vsoysotus °ª# ®ªpt # §pt连
续 w周 o假手术组和模型组大鼠每日灌胃相同体积的
溶剂 ∀药物 ⁄⁄ vsoysotus °ª# ®ªpt临用时溶于
s1xh羧甲基纤维素钠 k≤ ≤2‘¤l溶剂中 ∀
#|wwt#
第 vu卷第 tw期
ussz年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tw
∏¯¼o ussz
1q5 心脏质量参数及左室  ⁄测定 末次给药后
禁食 tu «o大鼠称体重后处死 o取出心脏 o去除大血
管 !心外膜脂肪组织 o用 ‘≥清洗 o吸干后称全心重
k‹ • lo剪除心房和右心室 o称左心室重 k∂ • lo计
算心重指数 k全心重 r体重 o‹ • r…• l和左心室质量
指数 k左心室重 r体重 o∂ • r…• o即 ∂ Œl∀在左室
长轴中点处垂直方向切取 v ∗ w ε 厚组织片 o用中性
甲醛固定后 o制成 v Λ°厚的切片 o‹∞染色 o放大
wss倍 o用麦克奥迪病理图像分析系统观察切片 o每
张切片随机取 x个视野 o测 vs个心肌纤维的直径
k ⁄lo取平均值 ∀
1q6 左室 ‹¼³o‘’含量和 ‘’≥!„×°酶活性测定
取 xs ∗ {s °ª左室心肌组织 o用碱水解法按试剂盒
说明测定 ‹¼³含量 ∀另取 txs °ª左室心肌组织 o用
‘≥在冰浴中制成 tsh 组织匀浆 ow ε ov xss µ#
°¬±pt o离心 ts °¬±o取上清液按试剂盒说明用硝酸
还原酶法测定 ‘’含量 ~心肌 ‘’≥同工酶活性按
‘’≥分型试剂盒说明书测定 ¬‘’≥和总 ‘’≥活力 ~
¦‘’≥活力用总 ‘’≥活力减去 ¬‘’≥活力 ∀ ‘’≥活
力以每毫克组织蛋白每分钟生成 t ±°²¯ ‘’为一个
酶活力单位表示 ∀ ‘¤n 2Žn 2„×°酶 !≤¤u n 2„×°酶活
性测定按试剂盒说明采用定磷法 o以每毫克每小时
分解 „×°产生的无机磷 k°¬l的量表示酶活性 kΛ°²¯
# °ªpt # «pt l∀蛋白定量采用考马斯亮蓝法 o以牛
血清白蛋白为标准 ∀
1q7 „±ªµ浓度测定 实验结束时 o颈动脉取血 w
°置于含有抑肽酶的试管中 o于 w ε ov sss µ#
°¬±pt o离心 ts °¬±o取血浆保存于 p us ε 冰箱备
用 ~另取 vss °ª左室心肌组织 o用 ‘≥在冰浴中制成
vxh匀浆 ow ε ov xss µ# °¬±pt o离心 ts °¬±o取上
清液置于 p us ε 冰箱保存备用 ~检测时按照试剂盒
程序说明表进行 o用放免分析法测定 „±ªµ含量 o放
射标记物为 tux Œ2„±ªµ ∀
1q8 统计学处理 所有数据用 cξ ? σ表示 o多组间
比较用单因素方差分析 o两两比较用 θ检验 ∀
2 结果
2q1 ⁄⁄对大鼠心脏质量参数及左室  ⁄的影响
与假手术组比较 o模型组大鼠 ‹ • r…• o∂ Œo ⁄显
著增加 kΠ  s1stl~⁄⁄ vsoysotus °ª# ®ªpt # §pt
治疗组大鼠的 ‹ • r…• o∂ o ⁄与模型组比较明显
降低 kΠ  s1sxoΠ  s1stlk表 tl∀常规 ‹∞染色在
光学显微镜下观察 o假手术组心肌纤维排列整齐 o横
纹清楚 ~模型组心肌纤维增粗 !紊乱 !断裂 o核增大 o
形态不规则 o核仁浓染 o间质增生等改变 k图 toul~
⁄⁄治疗组心肌有不同程度的病理改变 o与模型组
比较 o心肌损害明显较轻 ∀
表 t ⁄⁄对大鼠心脏质量指数及左心室  ⁄的影响
kcξ ? σ, ν € zl
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
‹ • r…•
r°ª# ªpt
∂ Œ
r°ª# ªpt
 ⁄
rΛ°
假手术 p u1|| ? s1t{ u1t| ? s1tx wu1u{ ? u1wx
模型 p v1xv ? s1uuul u1x| ? s1usul xv1s| ? t1uyul
⁄⁄ vs v1ut ? s1t|vl u1vs ? s1uvvl wz1zt ? t1wxwl
ys v1tz ? s1u{vl u1uy ? s1u{vl wx1|u ? u1wxwl
tus v1tw ? s1uswl u1uv ? s1tyvl ww1vy ? t1{uwl
注 }与假手术组比较 tl Π  s1sxoul Π  s1st~与模型组比较 vl Π 
s1sxowl Π  s1stk表 uov同 l
图 t 假手组心肌组织病理改变 k‹∞o ≅ wssl
图 u 模型组心肌组织病理改变 k‹∞o ≅ wssl
图 v 治疗组心肌组织病理改变 k‹∞o ≅ wssl
2q2 ⁄⁄对左室心肌组织 ‹¼³o‘’和血浆及心肌组
织 „±ªµ的影响 与假手术组比较 o模型组大鼠心
#sxwt#
第 vu卷第 tw期
ussz年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tw
∏¯¼o ussz
肌组织 ‹¼³和血浆及心肌组织 „±ªµ的含量显著升
高 kΠ s1sxoΠ  s1stlo心肌组织 ‘’含量显著下
降 kΠ  s1stl~与模型组比较 o⁄⁄ vsoysotus °ª#
®ªpt # §pt治疗组大鼠心肌组织 ‹¼³的含量均显著
降低 kΠ  s1stlo血浆及心肌组织 „±ªµ的含量明
显降低 kΠ  s1sxoΠ  s1stlo心肌组织 ‘’水平明
显升高 kΠ s1sxoΠ s1stlk表 ul∀
2 q3 ⁄⁄对左室心肌组织 ¬‘’≥和 ¦‘’≥及 ‘¤n 2
表 u ⁄⁄对大鼠心肌组织 ‹ ¼³o‘’和血浆及心肌组织 „±ªµ的影响 kcξ ? σ, ν € zl
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
‹ ¼³
r°ª# ªpt
‘’
r˜# °ªpt
心肌组织 „±ªµ
r±ª# pt
血浆 „±ªµ
r±ª# pt
假手术 p s1uy ? s1sy t|1wtu ? x1wy u|t1u ? w|1| uuw1u ? w|1w
模型 p s1wu ? s1syul tt1xy ? t1uzul xwz1x ? t|v1utl wsy1u ? {|1xul
⁄⁄ vs s1vw ? s1swvl ty1v ? w1ztvl vwv1{ ? xz1vvl uyv1{ ? ts{1zwl
ys s1vs ? s1s|vl tz1{| ? v1vvwl vvy1{ ? |t1uvl uxx1{ ? zw1{wl
tus s1u{ ? s1s|wl us1xv ? w1sywl vs|1u ? y{1wvl uws1{ ? xv1|wl
Žn 2„×°酶和 ≤¤u n 2„×°酶活力的影响 与假手术
组比较 o模型组大鼠心肌组织 ¬‘’≥活力显著升高 o
¦‘’≥活力显著降低 kΠ  s1stlo‘¤n 2Žn 2„×°酶和
≤¤u n 2„×°酶活性显著降低 kΠ  s1stl~与模型组比
较 o⁄⁄ vsoysotus °ª# ®ªpt # §pt治疗组大鼠心肌
组织 ¬‘’≥活力明显降低 kΠ  s1sxoΠ  s1stlo
¦‘’≥活力显著升高 kΠ  s1stlo‘¤n 2Žn 2„×°酶和
≤¤u n 2„×°酶活性显著提高结果 kΠ s1stlk表 vl∀
表 v ⁄⁄对大鼠心肌组织 ¬‘’≥和 ¦‘’≥及 ‘¤n 2Žn 2„×°o≤¤u n 2„×°活力的影响 kcξ ? σ, ν € zl
组别
剂量
r°ª# ®ªpt
¬‘’≥
r˜# °ªpt
¦‘’≥
r˜# °ªpt
‘¤n 2Žn 2„×°
rΛ°²¯# °ªpt # «pt
≤¤u n 2„×°
rΛ°²¯# °ªpt # «pt
假手术 p s1vu ? s1sx t1zv ? s1s| y1v| ? s1uv y1wv ? s1yv
模型 p s1xt ? s1tuul t1xu ? s1ttul w1w{ ? s1wyul w1xw ? s1u{ul
⁄⁄ vs s1vx ? s1ttvl t1zt ? s1s{wl x1z| ? s1wxwl x1|x ? s1ztwl
ys s1vv ? s1sxwl t1zw ? s1tswl y1st ? s1xywl y1s{ ? s1zzwl
tus s1vt ? s1tuwl t1zy ? s1tuwl y1tv ? s1wzwl y1t| ? s1xzwl
3 讨论
腹主动脉缩窄术可引起大鼠压力超负荷性心肌
肥厚和心室重构 ∀本实验模型组的心脏质量指标
k‹ • r…• o∂ Œl!形态学指标 k ⁄l及心肌组织 ‹¼³
含量均显著高于假手术组 o⁄⁄在一定浓度内可抑
制心脏质量及形态学指标和心肌组织 ‹¼³含量的
升高 o说明 ⁄⁄可减轻腹主动脉缩窄所致的大鼠心
肌肥厚 ∀
研究证实 o血液动力学 !神经内分泌等众多因素
参与了心肌肥厚的发生发展过程 o心室重构是心肌
肥厚的重要体现 ~心脏后负荷增加导致的神经内分
泌系统如肾素 2血管紧张素系统 k• „≥l和 ‘’在心
室重构中起重要作用 ≈tou  ∀ „±ªµ作为 • „≥的主要
活性产物在促进心肌肥厚和心血管重构过程中具有
重要作用 o尤其以心脏局部分泌和释放的 „±ªµ为
重要 ≈y2{  ∀ ‘’可抑制心肌细胞和血管增殖 o成纤维
细胞增生和间质胶原合成 o而抑制心肌肥厚 !心脏纤
维变性和心脏重构 ≈|ots  ~¦‘’≥k结构型 ‘’≥l产生的
‘’可以通过舒张血管 o减少心脏的前后负荷 o直接
灭活氧自由基等途径 o产生心肌保护作用 ~¬‘’≥k诱
生型 ‘’≥l产生的过量 ‘’则会降低心肌收缩功能
并使心肌损害 o这可能与 ‘’病理性生成和超氧化
物相互作用加重内皮和心肌损伤有关 ≈ttotu  ∀ „×°
酶对调节细胞内外离子浓度梯度 o维持细胞膜电位
有重要作用 ≈tv  ~‘¤n 2Žn 2„×°酶和 ≤¤u n 2„×°酶活
性下降 o导致细胞内 ‘¤n o≤¤u n增多 o胞内 ‘¤n增多
引起 ‘¤n o≤¤u n交换增加 o进一步加剧细胞内 ≤¤u n
浓度升高 o造成心肌细胞内钙超载 o诱导心肌细胞肥
大和心肌细胞凋亡 o引起心肌肥厚 ≈tw  ∀本实验结果
提示 o⁄⁄对压力负荷性心肌肥厚大鼠心室重构有
明显的改善作用 ∀检测结果显示 o模型组血浆及心
肌组织中 „±ªµ明显增高 o表明循环和心肌局部
• „≥的激活 ~模型组心肌组织 ¬‘’≥的活性升高 o
¦‘’≥o„×°酶的活性下降 o心肌局部 ‘’合成减少 o
表明心室肥厚与 ‘’及胞内 ≤¤u n浓度密切相关 ∀应
用 ⁄⁄治疗后 o大鼠血浆及左心室 „±ªŒŒ含量均显著
降低 ~心肌组织中 ¦‘’≥o„×°酶的活性升高 o¬‘’≥
活性下降而 ‘’含量升高 ∀提示 ⁄⁄可通过抑制心
脏局部 „±ªŒŒ的生成 o调节心肌组织中不同 ‘’≥活
性 o增强 ¦‘’≥活性 o抑制 ¬‘’≥的活性 o增加心肌组
织中 ‘’的含量 ~还可阻抑心肌 ‘¤p 2Žn 2„×°酶和
≤¤u n 2„×°酶活性下降 o减轻心肌细胞内钙超载 o抑
制心肌细胞肥大和凋亡 ~从而减轻大鼠心肌肥厚及
心室重构 o产生心肌保护作用 ∀
#txwt#
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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综上所述 o⁄⁄对压力负荷性心肌肥厚大鼠心
室重构的保护作用与抑制心脏局部 „±ªŒŒ的生成 o
调节心肌组织中不同 ‘’≥的活性 o升高 ‘’含量 o
减轻心肌细胞内钙超载等有关 ∀
≈参考文献  
≈t  ≥«¬²·¤‘o • ¼¶¤o Ž²√¤± ±¨ ° ×o ·¨¤¯q „ µ²¯¨©²µ¦¤µ§¬¤¦°¤¶·
¦¨¯¯¶¬± ·«¨ ³¤·¥²ª¨ ± ¶¨¬¶²©«¼³¨ µ·¨±¶¬√¨«¨ ¤µ·§¬¶¨¤¶¨≈ q ‹¼³¨ µ2
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≈x  黄生宁 o杨 鸿 o张晨晖 o等 q大鼠心脏血压超负荷诱导左心
室 ≥‹°zs基因表达 ≈ q生理学报 ot||wowykwl}vvvq
≈y  …²µª¨ ¶≤o ≥¬¯√¤„ µo Š²° ¶¨ „o ·¨¤¯q ײ±¬± ¬± µ¤·º¬·«
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纤维化的保护作用 ≈ q中国药理学通报 oussxoutktul}txtwq
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≈tv  孙 蓉 o吕丽莉 o刘国卿 q芍药苷对土鼠不全性脑缺血后能量
代谢 !‘’和 ‘’≥的影响 ≈ q中国中药杂志 oussyovtktsl}
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¬±§∏¦¨§¥¼ ²√ µ¨¯²¤§¬±ª ³µ¨¶¶∏µ¨ ¬± µ¤·¶≈  q „¦·¤ °«¤µ° ≥¬±o
usswov|kvl}tzuq
Ινφλυενχε οφ δαιδζειν ον λεφτ ϖεντριχυλαρ ρεµ οδελινγ ιν ρατσωιτη
ηψπερτροπηιχ µ ψοχαρδιυµ ινδυχεδ βψ πρεσσυρε οϖερλοαδ
‹’˜ ¬o ‹ ’˜ ±¬±ªo ÷ Œ’‘Š ÷¬¤²2´ ¬±ªo Œ˜ ¬¤±2¬¬±o ‹∞ • ¬¨
(Γανναν ΜεδιχαλΧολλεγε, Γανζηου vwtsss, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²©§¤¬§½¨ ¬± k⁄⁄l ²± √ ±¨·µ¬¦∏¯¤µµ¨°²§¨ ¬¯±ª¬± µ¤·¶º¬·«°¼²¦¤µ§¬¤¯
«¼³¨ µ·µ²³«¼ ¬±§∏¦¨§¥¼ ³µ¨¶¶∏µ¨ ²√ µ¨¯²¤§¤±§¬·¶° ¦¨«¤±¬¶°q Μετηοδ :  ¼²¦¤µ§¬¤¯ «¼³¨ µ·µ²³«¼ °²§¨ ¯²©µ¤·¶¬±§∏¦¨§¥¼ ³µ¨¶¶∏µ¨ ²√ µ¨2
²¯¤§º¤¶³µ¨³¤µ¨§¥¼ ¦²±¶·µ¬¦·¬±ª¤¥§²°¬±¤¯ ¤²µ·¤q ׫¨ ²³¨ µ¤·¨§µ¤·¶º µ¨¨ µ¤±§²° ¼¯ §¬√¬§¨ §¬±·² ¶«¤° ²³¨ µ¤·¨§¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o ¤²µ·¤2
¦²±¶·µ¬¦·¨§°²§¨ ¯ªµ²∏³¤±§·«µ¨¨⁄⁄ ªµ²∏³¶kvso yso tus °ª# ®ªpt lq ƒ²∏µº¨¨ ®¶ ¤¯·¨µo ·«¨ «¨ ¤µ·2º ¬¨ª«·k‹ • lo ¯¨ ©·√ ±¨·µ¬¦∏¯¤µ
º ¬¨ª«·k∂ • lo ·«¨ µ¤·¬² ²©‹ • r…• ¤±§∂ • r…• k∂ Œl ¤±§·«¨ ¦¤µ§¬²2°¼²¦¼·¨ §¬¤° ·¨¨µ¶k ⁄l ¤©·¨µ§¼¨ ¬±ª¥¼ ‹∞ ¦²¯¤µº µ¨¨
° ¤¨¶∏µ¨§q ׫¨ «¼§µ²¬¼µ²¯¬± o¨ ±¬·µ¬¦²¬¬§¨ k‘’l ¤±§·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²©±¬·µ¬¦²¬¬§¨ ¶¼±·«¨ ·¤¶¨ k‘’≥l ¤±§‘¤n 2Žn 2„×°¤¶¨o ≤¤u n 2„×2
°¤¶¨ ¬± ¯¨ ©·√ ±¨·µ¬¦¯¨º µ¨¨ ∏´¤±·¬©¬¨§º¬·«¶³¨ ¦·µ²³«²·²° ·¨µ¼ ¤±§·«¨ ¤±ª¬²·¨±¶¬²±µ k„±ªµ l ¬± ¯¨ ©·√ ±¨·µ¬¦¯¨¤±§¶¨µ∏° º¤¶° ¶¨¶∏µ¨§
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≈责任编辑 刘  
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第 vu卷第 tw期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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