全 文 ：ＰＣＲ，ｃｌｏｎｅａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｒＤＮＡＩＴＳｏｆＮｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａｆｒｏｍ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｏｒｉｇｉｎｓｉｎＣｈｉｎａ
ＬＩＮＳｈａｎ１，２，ＺＨＥＮＧＷｅｉｗｅｎ２，ＷＵＪｉｎｚｈｏｎｇ１，ＺＨＯＵＬｉｊｕａｎ２，ＳＯＮＧＹａｎａ２
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＦｕｊｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＦｕｊｉａｎＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｐｒｏｖｉｄｅＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＮｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａｂｙｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆ
ｎｒＤＮＡＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＮｎｕｃｉｆｅｒａｏｒｉｇｉｎａｔｅｄｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｓＭｅｔｈｏｄ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｎｒＤＮＡＩＴＳｂａｓｅｓｅｑｕｅｎｃｅｕｓｉｎｇｓｐｅｃｉｆｉｃ
ＰＣＲＩＴＳＲｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＩＴＳａｎｄ５８ＳｒＤＮＡ，ａｎｄｔｈｅｐａｒｔｉａｌｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆ１８ＳｒＤＮＡａｎｄ２６ＳｒＤＮＡ，ｔｏｔａｌｙ７５０
ｂｐ，ｆｒｏｍＮｎｕｃｉｆｅｒａｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄＴｈｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓａｍｏｎｇＮｎｕｃｉｆｅｒａｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｈａｂｉｔａｔｓａｎｄｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｉｖａｒｓｗｅｒｅ
ｆｏｕｎｄＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＮｎｕｃｉｆｅｒａａｍｏｎｇｄｉｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｔｏｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｔｈｅｉｒｆａｋｅｓＩｔｐｒｏｖｉｄｅｄ
ｔｈｅｂａｓｉｓｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇＮｎｕｃｉｆｅｒａｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｒｅｇｉｏｎｓｂｙｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｉｒＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅｓ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｎｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａ；ＩＴＳｒｅｇｉｏｎ；ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ
［责任编辑 张宁宁］
吡虫啉在麻黄中残留的分析方法
陈美艳，陈 君，薛 健，于 晶，程惠珍
（中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研究所，北京 １０００９４）
［摘要］ 目的：研究建立吡虫啉在麻黄中残留的液相分析方法。方法：样品经二氯甲烷提取，色谱柱净化，采
用十八烷基键合硅胶柱，流动相为甲醇水（２０∶８０）；检测波长２７０ｎｍ。结果与结论：该方法的最小检出量为０４×
１０－９ｇ，最低检出质量分数为００２ｍｇ·ｋｇ－１，平均回收率为８５３７％ ～９０６５％，ＲＳＤ为２２３％ ～３４５％；该方法的
灵敏度、精密度和准确度符合农药残留分析的要求。
［关键词］ 高效液相色谱法；吡虫啉；麻黄；残留
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）０８０６７５０３
［收稿日期］ ２００６０１１９
［基金项目］ 国家中医药管理局项目（０２０３ＺＰ０３）
［通讯作者］ 陈君，Ｔｅｌ：（０１０）６２８９９７３１
中药材生长过程中经常遭受多种害虫的危害，
其中蚜虫由于其个体小、繁殖速度快等特点，成为目
前生产上较难防治的一种害虫。麻黄蚜 Ａｐｈｉｓｅｐｈｅ
ｄｒａｐｏｓｉｓｓｐ．ｎｏｖ是近年来危害麻黄的一种主要害
虫，在宁夏种植基地发生十分普遍。试验表明吡虫
啉对麻黄蚜具有良好的防治效果，种植基地比较普
遍地使用吡虫啉［１］。
吡虫啉（ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ）化学名称１（６氯３吡啶
甲基）Ｎ硝基亚咪唑烷２基胺，又名一遍净、蚜虱
净、大功臣、康复多、必林等，是德国拜尔公司开发生
产的一种新型超高效、强内吸、广谱、低毒杀虫剂，它
对蚜虫、稻飞虱、叶蝉、蓟马等害虫及稻纵卷叶螟具
有很好的防治效果［２４］。有关吡虫啉残留分析方法，
国内外报道的较多，但其在麻黄中的残留分析方法
尚未见报道，本试验拟采用高效液相色谱法建立一
套前处理简便，又具有较好灵敏度、准确度和精密度
的吡虫啉残留分析方法，为科学控制农药使用、安全
生产中药材提供科学依据。
１ 材料与仪器
１．１ 材料 麻黄样品采自宁夏沿山路麻黄基地，喷
施２０００倍１０％吡虫啉可湿性粉剂样品及清水空白
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中 国 中 药 杂 志
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对照样品，－２０℃低温冰箱保存。
１．２ 仪器与试剂 Ｗａｔｅｒｓ６００－４８６高效液相色谱
仪，ＮＥ－１型真空旋转浓缩仪。
吡虫啉对照品：纯度９９８％（农业部农药检定
所）；甲醇、二氯甲烷、石油醚（沸程６０～９０℃）、无
水硫酸钠均为分析纯，重蒸水（自制），中性氧化铝
（１００～２００目，３００～４００℃活化 ４ｈ，５％水分脱
活）。试验农药：１０％吡虫啉可湿性粉剂（上海华泰
农药有限公司）。
２ 方法与结果
２．１ 液相色谱条件 Ｃ１８柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）；流动相甲醇水（２０∶８０）；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；
波长２７０ｎｍ；进样量２０μＬ；柱温室温。最小检出量
为０４×１０－９ｇ；最小检出质量分数为 ００２ｍｇ·
ｋｇ－１。在此条件下的色谱图见图１。
图１ 麻黄的ＨＰＬＣ图
Ａ．麻黄样品；Ｂ．麻黄空白样品；１．吡虫啉
２．２ 供试品溶液的制备 从－２０℃低温冰箱中取
出麻黄样品，５５℃烘约１０ｈ至干后粉碎备用。取２
ｇ细粉于５０ｍＬ具塞锥形瓶中，加３０ｍＬ二氯甲烷
及１ｍｏｌ·Ｌ－１盐酸１ｍＬ，摇匀，浸２～３ｈ，超声提取
２０ｍｉｎ，经无水硫酸钠过滤至另一磨口三角瓶中，剩
余残渣再分２次加入２０，１０ｍＬ二氯甲烷分别超声
提取１５ｍｉｎ，过滤，合并三次滤液浓缩至约２ｍＬ。
净化：采用氧化铝柱净化法，将二氯甲烷浓缩液
转移到中性氧化铝柱（底部塞一小团脱脂棉，柱内
两端各１ｃｍ无水硫酸钠，中间２ｇ氧化铝）。先用
２０ｍＬ石油醚乙醚（１０∶１）混合液洗脱，弃洗脱液，
再用４０ｍＬ甲醇洗脱，收集洗脱液，６０℃旋转浓缩，
最后定容至２ｍＬ，０４５μｍ滤膜过滤后待测。
２．３ 对照品溶液的制备 吡虫啉对照品１００ｍｇ，
将其定容至 １０ｍＬ，得 １０ｍｇ·ｍＬ－１对照品储备
液，再将其稀释成１０μｇ·ｍＬ－１的对照品溶液。
２．４ 线性关系考察 取吡虫啉对照品储备液适量，
分别配成５０，３０，２０，１０，０５，０２μｇ·ｍＬ－１的
系列标准溶液，各进样２０μＬ，以浓度和吸收值做标
准曲线。计算回归方程为 Ｙ＝４９１０２５８Ｘ＋
２９８４５，ｒ＝０９９９５，说明吡虫啉在０００４～０１μｇ
线性关系良好。
２．５ 加样回收率 在空白样品中添加不同量的农
药对照品液，每种添加量重复３次，按２．２项下操作
进行提取、净化及测定，计算回收率。结果见表１。
表１ 吡虫啉加样回收率（ｎ＝３）
加入量／μｇ 测得量／μｇ 平均回收率／％ ＲＳＤ／％
００５ ００４２１ ８８４１ ３０５
００３ ００２６１ ８６９９ ２２３
００２ ００１８１ ９０６５ ２８９
００１ ０００８５４ ８５３７ ３４５
０００５ ０００４３６ ８７２０ ２４６
２．６ 准确度和精密度试验 吡虫啉在麻黄中的平
均添加回收率较高，为 ８５３７％ ～９０６５％，相对标
准偏差较小，为 ２２３％ ～３４５％，符合农药残留量
分析和农残试验的要求。
３ 讨论
３．１ 提取溶剂的选择对吡虫啉的回收率有着重要
的影响，国外主要以体积比为８０∶２０的乙腈和水的
混合液作为提取溶剂［５７］，用超声波提取３～４次，可
以达到比较满意的提取效果。由于乙腈的价格较
高，所以国内主要用二氯甲烷［８］和甲醇［９］或体积比
为３∶１的甲醇和水的混合液作为提取溶剂［１０］，考虑
到二氯甲烷对吡虫啉有良好的溶解性，本实验选择
二氯甲烷作为提取溶剂。
３．２ 在超声时间的选择上，采取了１０，５，５ｍｉｎ；１５，
１０，１０ｍｉｎ；２０，１５，１５ｍｉｎ及２０，２０，２０ｍｉｎ等４种方
案，考虑到时间及提取效率，本实验选择第 ３种方
案。
３．３ 在进行甲醇洗脱过程中，为确定所需甲醇的体
积，在色谱柱上直接加入５０μＬ标准工作液，２０ｍＬ
混合液去杂后，依次用５个１０ｍＬ甲醇洗脱，洗脱液
分别装入５个小试管中，待上机测定。结果表明，前
３个管中有吡虫啉检出，说明收集３０ｍＬ淋洗剂即
可，为了结果更加准确，试验中收集４０ｍＬ。
３．４ 联合国粮农组织（ＦＡＯ）／世界卫生组织
（ＷＨＯ）规定的吡虫啉在麻黄中的最高残留限量
（ＭＲＬ）标准尚未见到。加拿大规定的吡虫啉及其
代谢物在蔬菜及作物上的最高残留限量为００５～
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００８ｍｇ·ｋｇ－１；美国新法规中规定，在大豆种子中
含吡虫啉及其代谢物的混合残留的临时限量定为
１０ｍｇ·ｋｇ－１；我国宁波市质量技术监督局规定吡
虫啉在雪菜中的最高残留限量为０３ｍｇ·ｋｇ－１，而
本方法中吡虫啉在液相色谱仪上的最小检出量为
０４×１０－９ｇ，在麻黄中的最小检出质量分数是００２
ｍｇ·ｋｇ－１，低于以上作物或蔬菜的最高残留限量，
可以用来测定吡虫啉在麻黄中的残留量及残留动态
的分析。本方法采用高效液相色谱法分析测定吡虫
啉在麻黄中的残留量，方法的准确度、灵敏度和精密
度符合农药残留分析要求，试验结果表明，本方法简
便可行，重复性好。
中药材是中药产品的源头，其质量的好坏直接
关系到中药的疗效及安全性。目前我国种植的上百
种中药材，病虫害防治仍以化学防治为主，但目前每
年登记的上千种农药中没有一种农药在中药材上登
记，而这些农药在药材生产中普遍使用，农药残留测
定方法的研究将为药材的安全生产及评价农药的安
全性提供技术支持，对制定农药在药材中的安全采
收期也具有重要意义，所以农药残留在中药材上的
分析需给予关注和重视。
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ＣＨＥＮＭｅｉｙａｎ，ＣＨＥＮＪｕｎ，ＸＵＥＪｉａｎ，ＹＵＪｉｎｇ，ＣＨＥＮＧＨｕｉｚｈｅｎ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｒｅｓｉｄｕｅａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｏｆｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄｉｎＥｐｈｅｄｒａｓｉｎｉｃａｂｙＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｉｍｉｄａｃｌｏ
ｐｒｉｄｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｗｉｔｈｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ，ｃｌｅａｎｅｄｕｐｗｉｔｈｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｃｏｌｕｍｎ，ｔｈｅｎｓｅｐａｒａｔｅｄｏｎＳｐｈｅｒｉｓｏｒｂＣ１８ｃｏｌｕｍｎｂｙｕｓｉｎｇ
Ｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒ（２０∶８０），ｄｅｔｅｃｔｅｄａｔ２７０ｎｍ．ＲｅｓｕｌｔａｎｄＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＬＯＤ）ａｎｄｌｉｍｉｔｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＬＯＱ）
ｗｅｒｅ０４×１０－９ｇａｎｄ００２ｍｇ·ｋｇ－１，ｍｅａｎｒｅｃｏｖｅｒｙａｎｄｒｅｌａｔｅｄｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ（ＲＳＤ）ｗｅｒｅ８５３７％９０６５％ ａｎｄ２２３％
３４５％．Ｉｔｉｓｃｏｎｃｌｕｄｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｃｏｕｌｄｓａｔｉｓｆｙｔｈｅｐｅｓｔｉｃｉｄｅｒｅｓｉｄｕｅａｎａｌｙｓｉｓｄｅｍａｎｄｓｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｐｒｅｃｉｓｉｏｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨＰＬＣ；ｉｍｉｄａｃｌｏｐｒｉｄ；Ｅｐｈｅｄｒａｓｉｎｉｃａ；ｒｅｓｉｄｕｅ
［责任编辑 张宁宁
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
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毉
毉
毉
毉
］
《中国中药杂志》发表的论文“基于地理信息系统的苍术道地药材气候
生态特征研究”（作者：郭兰萍，黄璐琦，阎 洪，等），被评为“第四届中国科
协期刊优秀学术论文”。
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