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Study on effect of different combinations of traditional Chinese medicine preparation active parts on metabolism of puerarin in plasma of rats

不同中药复方有效部位组合对脑缺血大鼠血浆中葛根素代谢变化的研究



全 文 :不同中药复方有效部位组合对脑缺血大鼠
血浆中葛根素代谢变化的研究
郭 莹 t o万海同 t3 o张 莉 t o王 玉 t o韩 进 t o余 勤 t o潘远江 u
ktq浙江中医药大学 心脑血管病研究所 o浙江 杭州 vtssxv~
uq浙江大学 化学系 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要   目的 }建立 ‹ °≤测定血浆中的葛根素的方法 o观测养阴通脑颗粒中主要有效部位的不同组合对脑
缺血大鼠血浆中葛根素代谢变化的影响 ∀方法 }以乙腈提取处理血浆 o以对羟基苯甲酸为内标 o流动相甲醇 2s1xh
醋酸水 ku{Βzulo’⁄≥ ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ txs °°ox Λ°l为固定相 o以紫外检测器在 uw{ ±°测定血浆中葛根素的
吸收 ∀结果 }葛根素在 s1sux ∗ v1u Λª# °pt线性关系良好 o• ≥⁄  tsh o平均回收率为 |z1yh ~有效部位配伍不
同 o血浆中葛根素的代谢变化不同 ∀结论 }此法灵敏 !可靠 o可较好地用于口服中药复方养阴通脑颗粒主要有效部
位组合后血浆中葛根素的测定 o可为有效成分的体内分析提供方法 ~不同配伍可影响成分的体内变化 ∀
≈关键词   葛根素 ~中药复方养阴通脑颗粒 ~有效部位 ~血药浓度
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszluv2uxvt2sw
≈收稿日期   ussy2s|2ts
≈基金项目   国家自然科学基金项目 kvsvztz{|ovsyzuyxul~浙江
省自然科学基金项目 kuswwuwl
≈通讯作者   3 万海同 oר¯}ksxztl{yytvzttoƒ¤¬}ksxztl{yyt
vztuo∞2°¤¬¯}º¤±«¤¬·²±ªƒ ½­·¦°q± ·¨
葛根为豆科植物野葛 Πυεραρια λοβαταk• ¬¯¯§ql
’«º¬或甘葛藤 Π. τηοµ σονιι … ±¨·«q的根 ∀葛根的主
要有效部位为异黄酮类化合物 o葛根素 k³∏¨ µ¤µ¬±l为
其中的主要有效成分之一 o对脑缺血损伤具有保护
作用 ≈tou  ∀
中药复方养阴通脑颗粒 k由葛根等药组成 l主
要用于缺血性脑血管病治疗 ∀本研究建立了养阴通
脑颗粒有效部位组合 k黄酮 !生物碱 !皂苷 !挥发油 l
用量配比不同的 |个组合 o建立大鼠血浆中葛根素
的 ‹°≤测定方法 o观测不同的有效部位组合对血
浆中葛根素代谢变化的影响 o探讨中药复方配伍的
内在机制 ∀
1 材料
1q1 仪器与色谱条件 岛津 ≤ p ts„⁄液相色谱
仪 }手动进样器 !≤ p ts „⁄∂ °泵 !≥°⁄ p ts„∂ °检
测器 ∀ °«¨ ±²° ±¨ ¬¨ Š∞ Œ‘Œ ≤t{柱 kw1y °° ≅ txs
°°ox Λ°l~流动相为甲醇 2s1xh醋酸水 ku{Βzul~
流速 t1s °# °¬±pt ~检测波长 uw{ ±°∀
 ¬¯¯¬³²µ¨超纯水仪 ! ·¨¯ µ¨×²¯ §¨² „Štvx电子天
平 !‹ ·¨¬¦«˜±¬√ µ¨¶¤¯ vu高速离心机 ov°|z软件等 ∀
1q2 药品与试剂 葛根素对照品 k中国药品生物制
品检定所 o批号 ttszxu2ussus|l~甲醇为市售色谱纯 o
乙腈 !对羟基苯甲酸 !冰醋酸等均为市售分析纯 o水为
超纯水 ∀养阴通脑颗粒是中药复方制剂 o主要含葛
根 !川芎等 o有效部位由浙江大学化学系提取 ∀
1q3 动物 老年清洁级 ≥⁄大白鼠 o雄性 o体重
vus ∗ vys ªo由浙江省医学科学院动物中心提供 o动
物合格证号 ≥≠ ÷Žk浙 lussv2ssst∀
2 方法与结果
2q1 脑缺血模型大鼠的制作 采用改良的
°∏¯¶¬±¨¯ ¬¯四血管法造模 }以 tsh水合氯醛每 tss ª
体重 s1w °腹腔麻醉 o大鼠俯卧位固定于手术台
上 o在第一颈椎水平做一正中切口 o找到两侧翼小
孔 o直视下电凝 o永久性闭塞双侧椎动脉 ∀颈部皮肤
侧切口 o分离颈总动脉 o用微动脉夹夹闭双侧颈总动
脉 ovs °¬±后进行再灌注 ∀
2q2 分组与给药 将 ≥⁄大鼠随机分为 |个组 o每
组 {只 o将养阴通脑颗粒 w个主要有效部位 k黄酮 !
生物碱 !皂苷 !挥发油 lo及高 !中 !低 v个剂量 o按照
正交试验法组成 w因素 v水平表 o采用正交试验设
计方法 o组成用量配比不同的 |个组合 o并用生理盐
水溶解 o配成混悬液 o再灌注同时灌胃给药 ∀
2q3 血浆样本预处理及色谱分离 于给药后 xo
#tvxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
txovsoysotusot{souwsovys °¬±从颈动脉取血 t1s
°o枸橼酸钠抗凝 o离心后吸取上清获得血浆 o同法
以生理盐水灌胃得到空白血浆 ∀
用微量加样器吸取血浆 s1x °o置于 x °离
心试管中 o以微量加样针准确加入内标液 ux ˏo电
动涡旋器充分混匀 tx ¶o准确加入 t1x °乙腈 o涡
旋混匀 u °¬±oy sss µ# °¬±pt离心 ts °¬±o取上清
t1s °o氮气吹干 os1x °流动相溶解 ot万 µ#
°¬±pt离心 o取上清待测 ∀
分别吸取空白血浆 !空白血浆加对照品和供试
品预处理后的上清液 us ˏo注入色谱系统 ouw{ ±°
波长检测 o绘制色谱图 k图 tlo在此色谱条件下 o脑
缺血大鼠血浆中葛根素和内标物分离完全 o空白血
浆无干扰 o样品中无其他物质的干扰 ∀
图 t 空白血浆 k„lo空白血浆 n对照品 n内标 k…lo含药血浆 k≤l‹ °≤图谱
tq对羟基苯甲酸 ~uq葛根素
2q4 方法学考察 取空白血浆 s1x °于 x °离
心管中 o分别定量加入葛根素标准溶液使其含葛根
素分别为 }s1suxos1sxos1tos1uos1wos1{ot1yov1u
Λª# °pt o在每管中分别加入内标液 ux ˏo余按
2q3项下方法进行 ∀将色谱图上葛根素和内标物的
峰面积比值与其相对应的浓度值作线性回归 o得到
该色 谱 条 件 下 的 葛 根 素 的 线 性 回 归 方 程
Ψ €s1||{ tΞ p s1swu {oρ € s1||{ zo结果表明 o在
s1sux ∗ v1u Λª# °pt o葛根素呈良好的线性关系 ∀
取空白血浆作底物 o选择 t §内不同时间和不
同天数检测同一已知样品 o将其理论值与测定值相
比得其回收率 o并计算日内和日间精密度 ∀葛根素
的平均回收率为 |z1yh o回收率和精密度符合要
求 o• ≥⁄ tsh ∀
2q5 葛根素血药浓度的测定 取 2q3中给药后所
获得的血浆 o按照 2q3项下的方法处理后 o采用本实
验中的色谱条件进行测定 o结果见表 to药动学参数
见表 u∀
表 t 给药 |个组合后不同时间点葛根素的血药浓度 kcξ ? σl Λª# °pt
组合
时间点
x °¬± tx °¬± vs °¬± ys °¬± tus °¬± t{s °¬± uws °¬± vys °¬±
t t1xws ? s1usu t1wxx ? s1t|t u1ux| ? s1u|y u1swy ? s1uy{ t1sz| ? s1twu s1x{u ? s1szy s1u{t ? s1svz s1txt ? s1st|
u t1xys ? s1usx t1{xy ? s1uww u1zy{ ? s1vss t1ywt ? s1tz{ s1zwu ? s1s{t s1vwz ? s1sv{ s1t|{ ? s1sut s1tsz ? s1stu
v u1u{z ? s1uw{ u1|zu ? s1vuv u1yxt ? s1u{{ t1xu| ? s1tyy t1yww ? s1uty t1uty ? s1tys s1xvy ? s1szs s1uxz ? s1svw
w t1uz| ? s1ty{ t1xxu ? s1usw t1|zu ? s1ux| s1|wu ? s1tuw s1xty ? s1sy{ s1u{y ? s1sv{ s1vtv ? s1swt s1ttx ? s1stx
x t1s{w ? s1twu u1w{| ? s1vuy u1zuz ? s1u|y u1xtz ? s1vvs t1yuy ? s1utv s1|ts ? s1tt| t1wws ? s1t{| s1vtv ? s1swt
y t1usz ? s1tx{ t1wwy ? s1t|s t1ywy ? s1uty u1wxy ? s1vuu t1xyv ? s1usx s1|ws ? s1tuv s1xts ? s1syz s1utu ? s1su{
z t1tts ? s1twy s1|ty ? s1tus t1wz{ ? s1t|w u1x{| ? s1vws t1w{{ ? s1t|x s1|sv ? s1tt{ s1vxu ? s1swy s1uvt ? s1svs
{ t1zss ? s1uuv u1ssz ? s1uyv u1vxu ? s1vs| t1xvt ? s1ust t1vyy ? s1tz| s1{|w ? s1ttz t1uws ? s1tyv s1vxv ? s1swy
| t1xvx ? s1ust t1yu| ? s1utw u1yvx ? s1vwy u1{uz ? s1vsz u1ux{ ? s1u|y t1||z ? s1uyu s1yyz ? s1s{{ s1{|u ? s1ttz
3 讨论
3q1 血样预处理方法的选择 实验中曾采用甲醇
法 !水浴法 ≈v 沉淀血样中的蛋白 o沉淀效果均较好 o
但对比空白血浆和空白血浆加标准品图谱 o发现空
白血浆图谱上葛根素出峰时间处有一杂质峰干扰 o
未能通过流动相的调整将干扰避开 ∀采用乙腈处理
蛋白的同时可将干扰峰除去 o也是本实验选用乙腈
处理血样的原因 ∀
第 vo{组 k如 v号组方 }生物碱 us °ª# ®ªpt o黄
酮 txs °ª# ®ªpt o皂苷 txs °ª# ®ªpt o挥发油 tx °ª
# ®ªpt l吸收较快 o分别于 z1w|wotx1zt °¬±达到血
药浓度的峰值 ~第 yozo|组 k如 |号组方 }生物碱 ys
°ª# ®ªpt o黄酮 txs °ª# ®ªpt o皂苷 tss °ª# ®ªpt o
挥发油 x °ª# ®ªpt l吸收较慢 o分别于 wx1xuo
w|1wzox{1wz °¬±达到血药浓度的峰值 ~第 |组消除
最慢 o消除半衰期 kτtruΒ l为 uux1| °¬±~第 xo|组的
#uvxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
表 u 给药 |个组合后葛根素的药动学参数
参数 t u v w x y z { |
ΑkΛª# °pt l w1vsv v1vxs u1xv{ y1xy{ t1xyy v1y|z u1xyx u1wy{ v1|tt
ΒkΛª# °pt l s1|xx s1{{z s1wv| t1s{y u1ytz s1vyv t1www
Αk°¬±pt l s1stz s1sus s1ssz s1swx s1suv s1ssz s1sts
Βk°¬±pt l s1ssx s1ssy s1ssy s1ssy s1ssw s1ssw s1ssv
Κ¨k°¬±pt l s1ss{ s1ssz
Κ¤k°¬±pt l s1sxs s1s|w s1x|y s1szv s1s|t s1swz s1swy s1uux s1svw
∂ rƒk¦l ≈°ª# kΛª# °pt l  w1syz {1yt{ tx1u{ w1vss {1t|y tw1x{ x1|vw tu1xy ts1{|
τtruΑk°¬±l ws1wv vx1ys tsv1y tx1vy vs1ux tsw1z zw1sy
τtruΒk°¬±l tvs1y tsz1y ttx1y tsz1| tx|1u tyv1| uux1|
τtru Κ¤k°¬±l tv1{t z1v{w t1tyv |1xus z1yxz tw1yv tw1|| v1s{s us1yv
τtru Κ¨k°¬±l {{1xw |w1sx
Κut k°¬±pt l s1ss{ s1sts s1ssy s1stz s1stz s1ssx s1ssx
Κts k°¬±pt l s1stt s1stv s1ssz s1stz s1ssy s1ssy s1ssy
Κtu k°¬±pt l s1ssv s1ssv s1sss t s1st{ s1ssw s1sss t s1ssu
„˜≤kΛª# °pt # °¬±l vuy1uy uyw1y wwz1{ us|1x yuv1u v|w1u wts1t vuw1s zu{1|
≤k¶l ≈k°ª# °¬±pt l# kΛª# °pt l pt   s1swy s1ttv s1tst s1szu s1sw{ s1ttw s1svz s1s|v s1syu
Τ³k°¬±l vx1|{ uu1x{ z1w|w us1yz u{1tt wx1xu w|1wz tx1zt x{1wz
Χ°¤¬kΛª# °pt l u1uw{ u1wty u1{ss t1{vz u1{s| u1tyt t1{wy u1tuz u1zt{
生物利用度较高 o„˜≤值分别为 yuv1uozu{1| Λª#
°pt # °¬±∀
3q2 内标物及流动相的选择 曾选择对羟基苯甲
醛 !鞣花酸等作为内标物 o发现对羟基苯甲酸较为合
适 o且发现对羟基苯甲酸对酸性流动相很敏感 o对酸
的敏感程度远大于甲醇 o流动相中微量的酸性可使
保留时间大大提前 ∀
3q3 进样溶液溶剂的选择 2q3中曾用乙腈处理
血浆样品后离心得到的上清液直接注入色谱系统进
行检测 o发现此时的对羟基苯甲酸峰分裂出 t ∗ u个
肩峰 o改用氮气吹干后用流动相溶解 o可消除这一现
象 o峰形较好 ∀
3q4 有效部位配伍不同 o指标成分体内过程各异
/有效部位 0作为一类化学组分与有效成分 k化学成
分复杂 l相比 o其 /相对有限 0≈w  o且更能反映中医药
防病治病的整体特征 ~其与中药材相比 o较之富集了
有效物质 o并可避免因药材产地 !品种不同所带来的
质量难控制 ∀
有研究提示 o葛根素的药动学参数可反映葛根
黄酮的药动学参数 ≈x  o方剂有效成分的浓度与疗效
呈良好的相关性 ∀以葛根素为检测指标 o研究治疗
缺血性中风的现代中药复方制剂养阴通脑颗粒 k临
床批件号 }≤stswvl主要有效部位组合的体内过
程 o开展中药复方中主要有效部位间的配伍研究 o有
助探讨本中药复方内在配伍规律 k组分合和 lo逐步
建立本中药复方配伍的质量标准化 ∀
≈参考文献  
≈t  赵 雍 o杜贵友 o崔海峰 o等 q复方葛根素对脑缺血损伤保护的
实验研究 ≈ q中国中药杂志 oussxovskzl}xw{q
≈u  王磊一 o赵爱平 o王福文 o等 q葛根素对大鼠急性脑缺血的保护
作用 ≈ q中国中药杂志 ot||zouuktul}zxuq
≈v  张 莉 o黄 熙 o任 平 o等 q三维 ‹°≤同步测定犬血浆中的
葛根素及阿魏酸 ≈ q沈阳药科大学学报 ousstot{ktl}wxq
≈w  王小如 q中药复杂体系中重大科学问题探讨 ≈   q厦门 }厦门
大学出版社 ot||{}vxq
≈x  卢 弘 o邢东明 o孙 虹 o等 q金森脑泰注射剂中葛根素在正常
和缺血再灌注模型大鼠体内的药动学研究 ≈ q中国药学杂
志 oussuovzktl}wtq
Στυδψ ον εφφεχτ οφ διφφερεντ χοµ βινατιονσ οφ τραδιτιοναλΧηινεσε µ εδιχινε
πρεπαρατιον αχτιϖε παρτσ ον µ εταβολισµ οφ πυεραριν ιν πλασµ α οφ ρατσ
Š˜’ ≠¬±ªt o • „‘‹¤¬2·²±ªt o ‹ „‘Š ¬t o • „‘Š ≠∏t o ‹ „‘¬±t o ≠ ˜ ±¬±t o °„‘ ≠∏¤±2­¬¤±ªu
(t. Ινστιτυτε οφ Ηεαρτ Βραιν ςεσσελ∆ισεασε, Ζηεϕιανγ Χηινεσε ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssxv, Χηινα;
u. Χηεµ ιστρψ ∆επαρτµ εντ, Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz, Χηινα)
#vvxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¥∏¬¯§¤± ¬¨³¨ µ¬° ±¨·¤¯ ° ·¨«²§·² §¨ ·¨µ°¬±¨·«¨ ¦²±·¨±·²©³∏¨ µ¤µ¬± ¬± ³¯¤¶°¤o ²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·²©
§¬©©¨µ¨±·¦²°¥¬±¤·¬²±¶²©·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬± ¶¨¨ ° §¨¬¦¬±¨³µ¨³¤µ¤·¬²± ¤¦·¬√¨³¤µ·¶²± ° ·¨¤¥²¯¬¶° ²©³∏¨ µ¤µ¬± ¬± ³¯¤¶°¤²©µ¤·¶¶∏©©¨µ¬±ª¦¨µ2
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µ¬± ¬± ³¯¤¶°¤º¤¶ ¬¨·µ¤¦·¨§¥¼ ¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ q ˜¶¬±ª«¼§µ²¬¼¥¨ ±½²¤·¨ ¤¶¬±·¨µ¬²µ¶·¤±§¤µ§o ° ·¨«¤±²¯ 2s1xh ¤¦¨·¬¦¤¦¬§º¤·¨µ¶²¯∏·¬²± ¤¶
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[ Κεψ ωορδσ] ³∏¨ µ¤µ¬±~ ·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬± ¶¨¨ ° §¨¬¦¬±¨³µ¨³¤µ¤·¬²±~≠¤±ª¼¬± ײ±ª±¤²ªµ¤±∏¯ ¶¨~ ¤¦·¬√¨³¤µ·¶~ ¦²±¦¨¦·µ¤·¬²± ²©§µ∏ª
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≈责任编辑 刘  
≈收稿日期   ussy2s|2ux
≈通讯作者   3 赵绪元 oר¯}kszvtlxu|utu|o∞2°¤¬¯}½«¤²¬∏¼∏¤±
ƒ ¶¬±¤q¦²°
清开灵注射液中黄芩苷在大鼠体内
代谢动力学的研究
肖 兰 tou o王 峰 t o李焕德 t o赵绪元 t3
ktq中南大学 湘雅二医院 临床药学研究室 o湖南 长沙 wtsstt~
uq长沙市卫生学校 o湖南 长沙 wtstssl
≈摘要   目的 }研究清开灵注射液中黄芩苷在大鼠体内的代谢动力学 o为探索清开灵注射液的体内效应物质
基础提供依据 ∀方法 }大鼠尾静脉注射清开灵粉针剂后 o于不同时间点取血 !肝 !肺组织 o采用高效液相质谱联用法
测定样品中黄芩苷含量 o并用 v°{z拟合求算药代动力学参数 ∀结果 }静脉给药后 o黄芩苷在大鼠体内符合二室模
型 ∀ wx °¬±时肝组织中分布达峰值 o接着肝中浓度急剧下降 otus °¬±后开始缓慢回升 o呈现双峰现象 ∀肺组织中
黄芩苷浓度远高于肝组织中浓度 o且消除较肝脏慢 o但达峰时间同肝脏 ∀结论 }静注清开灵后 o黄芩苷迅速分布至
效应器官肺 !肝中 o黄芩苷为清开灵注射液的肝肺效应物质基础之一 ∀黄芩苷在大鼠体内可能存在一定程度的肝
肠循环 ∀
≈关键词   清开灵注射液 ~黄芩苷 ~肝 !肺组织 ~代谢动力学
≈中图分类号   • u{xqx ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszluv2uxvw2sx
清开灵注射液 k±Žl是依据名方安宫牛黄丸
拆方改制而成的一种中药复方注射液 o由黄芩 !栀
子 !牛黄 !珍珠母 !板蓝根 !水牛角 !金银花 z味药组
成 o临床广泛用于急慢性肝炎 !乙型肝炎 !上呼吸道
感染 !肺炎 !高烧以及脑血栓形成 !脑出血等有高热 !
神昏 !谵语等证候者 o疗效显著 o是国家首批公布的
中医急症必备中成药之一 ≈t  ∀黄芩苷 k¥¤¬¦¤¯¬±o
…≤l为清开灵注射液中含量最高的组分 o是唇形科
植物黄芩的主要活性成分 o具有抑菌抗炎 !清热解
毒 !保肝利胆和清除超声阴离子等多方面的作
用 ≈u  ∀为探索清开灵注射液的肝 !肺效应物质基
础 o本实验采用高效液相质谱联用法 k‹°≤ 2 ≥l对
黄芩苷在大鼠体内的代谢动力学过程进行研究 ∀
1 试验材料
1q1 仪器
美国 • ¤·¨µ¶公司 uy|s型高效液相色谱系统 o
±质谱检测器 o ¤¶¶¼±¬v1x工作软件 ∀旋涡振荡
仪 k上海第一医学院仪器厂 lo ∞×׏∞• ג∞⁄’
„Šu{x trts万天平 oŠus„ 低温高速离心机 o
#wvxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz