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Study on antioxidant activity of pigment of Lycium ruthenicum

黑果枸杞色素的抗氧化活性研究



全 文 :黑果枸杞色素的抗氧化活性研究
李 进t ou o瞿伟菁t 3 o张素军t o吕海英u
kt1 华东师范大学 生命科学学院 o上海 usssyu ~
u1 新疆师范大学 生命与环境科学学院 o新疆 乌鲁木齐 {vssxwl
≈摘要  目的 }研究黑果枸杞色素的抗氧化活性 ∀方法 }通过测定黑果枸杞色素的还原能力和对化学模拟体
系中二苯代苦味酰基k⁄°°‹#l清除能力 o以及对小鼠红细胞溶血性 !小鼠血清抗活性氧能力 !小鼠肝组织脂质过氧
化产物 ⁄„生成的影响和小鼠肝线粒体肿胀度的影响 o探讨了黑果枸杞色素的体外抗氧化活性 ∀结果 }黑果枸杞
色素在化学本质上具有一定的抗氧化能力 o有很强的 ⁄°°‹#清除活性 oŒ≤xs达到 s1tyw °ª#°pt ~能显著的抑制小鼠
红细胞溶血 oŒ≤xs为 s1ttu °ª#°pt ~能增强小鼠血清抗活性氧能力 o抑制小鼠肝组织脂质过氧化产物 ⁄„生成和
小鼠肝线粒体肿胀度 o并显示出一定的量效关系 ∀结论 }黑果枸杞色素在一定浓度范围内具有抗氧化活性 ∀
≈关键词  黑果枸杞 ~色素 ~抗氧化 ~体外
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltw2ttz|2sx
≈收稿日期  ussx2s|2tu
≈基金项目   新疆维吾尔自治区自然科学基金项目
kussvutttsl
≈通讯作者  3瞿伟菁 oר¯ }ksutlyuuvust| oƒ¤¬}ksutlyuuvvzxw o
∞2°¤¬¯}º­´ ∏ƒ ¥¬²q¨¦±∏q¨§∏q¦±
黑果枸杞 Λψχιυµ ρυτηενιχυµ ∏µµ1 是茄科枸杞
属的多年生耐盐 !抗旱植物 o分布于我国西北地区 o
是民族医药中的常用药材 o据5晶珠草本6 !5四部医
典6记载 o藏医以其成熟的果实入药 o治疗心热病 !心
脏病等病症≈t  ~而5维吾尔药志6记载 o维吾尔医常用
黑果枸杞果实及根皮治疗尿道结石 !癣疥 !齿龈出血
等症 o民间作滋补强壮以及降压药≈u  ∀其成熟浆果
中富含紫红色素 o又属于珍稀的天然花色苷类色
素≈v 资源 ∀当前 o花色苷类色素因其安全无毒 !兼具
一定的营养和药理作用≈w2y  o在食品 !医药等方面日
益受到重视 ∀黑果枸杞的色素成分是否是其营养和
药效的物质基础之一 o主要作用机制尚未见报道 ∀
本研究将黑果枸杞果实中提取的色素 o通过体外试
验对其抗氧化活性进行了初探 o欲为中药数据库和
种质资源库的建立提供民族医药的信息资料 o促进
资源的合理利用 ∀
1 材料
黑果枸杞成熟干燥果实 o采自新疆吐鲁番盆地 o
由新疆师范大学海鹰教授鉴定 ∀经适当破碎k以不
将种子打碎为度l o过 ws目筛 o置于干燥器中备用 ∀
zuu型光栅分光光度计k上海第三分析仪器
厂l oŽp {u„ 型真空干燥箱k上海市实验仪器总
厂l ~≥‹…pŒŒŒ循环水式真空泵k上海申胜生物技术
有限公司l ~• ∞p usss型旋转蒸发仪k上海亚荣生化
仪器厂l o≥‹ p {u型水浴恒温振荡器k江苏太仓医
疗器械厂l o‹p t 恒流泵k上海市沪西仪器厂l o
⁄uss p v电子天平k上海天平仪器厂l o׏p ty• 台
式高速冷冻离心机k上海市离心机机械研究所l o玻
璃组织匀浆器等 ∀
所用试剂均为分析纯级 ∀
2 方法
211 黑果枸杞色素的制备 取经过脱脂处理的黑
果枸杞果实粉末 o用 ws 倍量 ³‹ v1s的 {s h乙醇溶
液 k以 w °²¯#pt的 ‹≤¯ 溶液调 ³‹l在 xs ε 浸提 v
«o抽滤 o得到紫红色澄清提取液 o减压浓缩回收乙
醇 o得到无乙醇味的浓缩液 o经水适当稀释后 o流经
大孔吸附树脂进行吸附 o再用 |x h乙醇溶液洗脱 o
收集洗脱液 o减压蒸馏得紫色色浆 o真空干燥即得暗
紫色色素粉末≈z  ∀
212 黑果枸杞色素色价及总多酚含量的测定 色
价 ∞tht ¦°的测定方法 }精确称取自制的黑果枸杞色素
s1t ªo溶于 tss °³‹ v1s的柠檬酸2磷酸氢二钠缓
冲液中 o再吸取 ts °o用缓冲液稀释至 tss °o在
最大吸收波长 xux ±°≈v 处测定其 Αo用公式 ∞tht ¦° €
Α≅ ρ/ Ω计算色价 o式中 Α为吸光度 , Ω为样品的
#|ztt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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质量(γ) , ρ为测定吸光度时所吸取样品的稀释倍
数≈z  ∀
总多酚类物质含量采用福林2酚比色法kƒ²¯¬±2
≤¬²¦¤¯·¨∏l o以焦性没食子酸作为参照标准测定≈{  ∀
213 还原力的测定 取不同浓度样品溶液 u1x °
于试管中 o依次加入 u1x °s1u °²¯#pt的磷酸缓冲
液k°…≥ o³‹ y1yl和 u1x °的 t h六氰合铁酸钾溶
液 o于 xs ε 水浴保温 us °¬±后 o快速冷却 o再加入
u1x °的 ts h三氯乙酸溶液 o取反应液 u1x °o依
次加入 u1x °蒸馏水 !s1x °的 s1t h三氯化铁溶
液 o充分混匀 o静置 ts °¬±后 o在 zss ±°下测定其吸
光度 Αk以蒸馏水做参比液l o吸光度越大表示还原
能力越强≈| ots  ∀
214 对二苯代苦味酰基自由基k⁄°°‹#l的清除能
力 分别取不同含量待测样品的乙醇溶液 s1u °o
加入 s1sux °ª#°pt⁄°°‹#乙醇溶液 oz1{ °立即混
匀 o用分光光度计于 xtz ±°处 o测定反应 vs °¬±时
的吸光度 ∀样品对 ⁄°°‹#的清除率可由下式得到 ∀
对 ⁄°°‹#的清除率k h l € ≈t p k Ατ p Αχ)/ Αs  ≅ tss h
式中 Αs 为 s 时刻体系的吸光度 ks1u °
乙醇 n z1{ °s1sux °ª# °pt ⁄°°‹#乙醇溶液在
xtz ±°处的吸光度l oΑχ为 s1u °待测样品的乙醇
溶液 n z1{ °乙醇在 xtz ±°处的吸光度 o Ατ为 τ时
刻体系的吸光度ks1u °待测样品的乙醇溶液 n z1{
°s1sux °ª#°pt ⁄°°‹#乙醇溶液 o在 xtz ±°处的
吸光度l ∀
以样品的含量对 ⁄°°‹#的清除率作图 o就可以
得到清除 xs h ⁄°°‹#时所需样品的量 o即Œ≤xs值≈{  ∀
215 对红细胞保护作用 小鼠眼眶取血 o肝素抗凝
全血 o用生理盐水u sss µ#°¬±pt ox °¬±离心洗涤 v
次 o去除血浆后 o以生理盐水配制 s1x h的红细胞悬
液 ow ε 保存备用 ∀取 t °s1x h的红细胞悬液 o加
入 s1t °不同质量浓度ks1sux os1sx os1t os1u o
s1w os1{ ot1y °ª#°ptl的样品溶液 o混匀后 o再加
入 s1t °tss °°²#pt ‹u’u ovz ε 下保温 t «o然
后用 w °生理盐水稀释 ou sss µ#°¬±pt离心 x °¬±o
取上清液测 wtx ±°处的吸光度kΑχl ∀空白管以 s1t
°生理盐水代替样品液 o其余操作同样品管 o测得
空白管吸光度k Αsl ∀样品对由 ‹u ’u引起溶血的抑
制率 € ≈kΑs p Αχ)/ Αs  ≅ tss h ∀样品对红细胞溶血
的半抑制量kŒ≤xsl是指对红细胞溶血抑制达到 xs h
时的样品质量浓度≈tt  ∀
216 对小鼠血清抗活性氧能力的影响 分别取
s1t °小鼠血清用含有不同含量色素样品的生理
盐水稀释 us倍 o使该体系中色素样品为 s os1sux o
s1sx os1t os1u os1w os1{ ot1y °ª#°pt o于 vz ε 温
浴 t «后 o吸取 s1u °直接按照活性氧试剂盒k南京
建成生物工程研究所l方法测定 Αxxs ±° o计算抗活性
氧单位 o并以反应体系中色素样品含量作对体系的
吸光度和抗活性氧单位值的变化曲线≈|  ∀
抗活性氧单位定义 }每毫升样品液在 vz ε 下反
应 t °¬±o使反应体系中 ‹u’u浓度降低 t °²¯#pt为
t个抗活性氧单位k˜l ∀计算公式 }抗活性氧单位k˜
#°ptl € k对照管吸光度 p测定管吸光度l Αk对照
管吸光度 p 空白管吸光度l ≅ 对照管浓度k{1{uw
°°²¯#ptl ≅样品测试前稀释倍数 ∀
217 对小鼠肝组织脂质过氧化产物 ⁄„生成的影
响 取小鼠脱颈椎处死 o迅速取肝脏组织以 s ∗ w ε
的生理盐水洗净血渍 o以滤纸吸干水分后称重 o按
tΒ|取相应体积的 s ∗ w ε 生理盐水于冰浴中将肝组
织剪碎 !在玻璃匀浆器中制成匀浆液 o以 v xss µ#
°¬±pt离心 tx °¬±o上清液即为 ts h肝组织匀浆液 ∀
取 s1u °ts h肝匀浆液和 s1t °不同含量色
素样品溶液于试管中混匀 o作为测定管 ovz ε 温浴 t
«k对照以等体积生理盐水代替样品溶液l后 o冰浴冷
却 o加入 {1t h十二烷基硫酸钠k≥⁄≥ls1u °o混匀
后再分别加入 t1x °s1u °²¯ #pt醋酸盐缓冲液
k³‹ v1xl和 s1{ h 硫代巴比妥酸kׅ„l o最后加入
s1x °双蒸水 o混匀 o避光沸水浴 ys °¬±o取出后流
水冷却至室温 o测定 xvu ±°处的吸光度k Α∏l ∀另外
分别取 s1v °ts ±°²¯#°pt的四乙氧基丙烷k×∞°l
对照品溶液和生理盐水作为对照管 !空白管 o其余操
作同测定管 o以生理盐水做对照调零 o于 xvu ±°处
测定标准管吸光度k Α¶l和空白管吸光度k Αsl ∀计
算公式 }脂质过氧化产物 ⁄„ 质量浓度k±°²¯ #ªpt
湿组织l €测定样体积 ≅ ≈k Α∏ p Αslrk Α¶p Αsl  ≅
k对照品质量浓度r对照品体积l ≅ 组织样测试前稀
释倍数 ∀由此计算样品的抑制率≈{ o|  ∀
另取 u 组试管分别测定色素样品对 ƒ ≥¨’w与
‹u’u诱导小鼠肝匀浆产生 ⁄„ 的影响 ∀一组试管
加 s1t °的 t °°²¯#pt ƒ ≥¨’w o另一组加 s1t °的
tss °°²¯#pt ‹u’u o然后各管加 s1t °的 ts h肝匀
浆液及 s1t °的相应色素溶液混匀 o于 vz ε 温浴 t
«k对照以等体积生理盐水代替色素样品溶液l o其余
#s{tt#
第 vt卷第 tw期
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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步骤同前 ∀
218 对小鼠肝线粒体肿胀度的影响 取新鲜的小
鼠肝组织以冷的生理盐水洗净血渍 !吸干表面水分
后 o按 tΒ|的比例加冰冷的 ³‹ z1w等渗 °…≥kx °°²¯
#pt °…≥ o³‹ z1w o含 s1tx °²¯#pt ‘¤≤¯ l o用玻璃匀
浆器在冰浴中匀浆制成 ts h肝组织匀浆液 ow ε 下
以 t sss ≅ γ 离心 tx °¬±o收集上清液 o再以 ts sss ≅
γ 离心 tx °¬±o收集沉淀并以等渗 °…≥液洗涤 u次 o
再以等渗 °…≥将沉淀分散制成悬液 o用考马斯亮蓝
法测定该悬浮液的蛋白质含量k以牛血清白蛋白
为l o调整成蛋白质为 s1x °ª#°pt的线粒体悬浮
液 ow ε 保存备用≈| otu  ∀
分别取 s1w °样品溶液 !v1s °线粒体悬浮
液 !s1w °s1x °°²¯ #pt ƒ ≥¨’w os1w °s1x °°²¯ #
pt维生素 ≤ 溶液 o迅速混匀后 ovz ε 温浴 o以 °…≥
溶液调零 o于 xus ±°处测定 s和 ys °¬±时的吸光度
Αs , Ατ o用吸光度的降低幅度表示线粒体的肿胀度 o
即吸光度降幅 € k Αs p Ατ)rΑs ∀正常组以等体积
°…≥代替样品及 ƒ ≥¨’w和维生素 ≤溶液 o对照组以等
体积 °…≥代替样品溶液 o其余同样品体系≈| otu  ∀
219 统计学处理 实验数据用 cξ ? σ表示 o以
≥°≥≥tu1s统计软件进行单因子方差分析 o各组间比
较用 ⁄∏±¦¤±法 ∀
3 结果
311 黑果枸杞色素色价及总多酚含量 黑果枸杞
色素属于花色苷类色素≈v  o在 ³‹ v1s的柠檬酸2磷
酸氢二钠缓冲液中于 xux ±°处有一最大吸收峰 o在
此吸收峰处测得自制色素的色价 ∞tht ¦°为 vy1z ?
t1s ∀同时 o测得黑果枸杞色素中总多酚含量达到
kvw1u ? s1{l h o而多酚类物质又具有优越的抗氧
化功能 o故进行抗氧化性能的研究 ∀
312 黑果枸杞色素的还原能力 黑果枸杞色素的
还原能力随着含量的增大而增强 o最终接近平衡状
态 o二者具有明显的量效关系k Π s1stl ∀以维生
素 ≤ 作参照 o发现在相同含量下 o黑果枸杞色素的
还原能力略低于维生素 ≤ ∀
313 对 ⁄°°‹#自由基的清除能力 随着含量的升
高 o维生素 ≤对 ⁄°°‹#的清除率显示出了迅速而大
幅的上升趋势k Π  s1stl oŒ≤xs为 s1szw °ª# °pt ∀
同样 o黑果枸杞色素也显示出很强的自由基清除活
性 o随着质量浓度的上升其对 ⁄°°‹#的清除率也显
著提高k Π s1stl o直至达到与维生素 ≤ 接近的稳
定状态 oŒ≤xs达到 s1tyw °ª#°pt ∀
314 对红细胞保护作用 黑果枸杞色素能有效的
抑制溶血现象的发生 o保护红细胞结构的完整性 o并
显示出一定的量效关系k Π  s1stl o其对红细胞溶
血的 Œ≤xs为 s1ttu °ª#°pt o而维生素 ≤ 的 Œ≤xs值为
s1tt{ °ª#°pt o由此可见在低含量下黑果枸杞色素
的抑制效果略高于维生素 ≤ o但随着质量浓度的增
高 o其抑制效果趋于平缓 ∀
315 对小鼠血清抗活性氧能力的影响 随着色素
含量的升高 o反应体系的吸光度明显下降 o预示着
’‹ p的生成量在逐渐降低 ~而体系中相对应的抗活
性氧单位值却逐渐上升 o说明黑果枸杞色素在一定
含量范围内能显著的提高小鼠血清抗活性氧能力 o
量效关系明显k Π s1stl k图 tl ∀
图 t 黑果枸杞色素对小鼠血清抗
活性氧能力的影响k ν € xl
以 s °ª#°pt为对照 oΠ s1stk图 u ∗ w同l
316 对小鼠肝组织脂质过氧化的影响 在试验测
定范围内 o黑果枸杞色素对小鼠肝组织脂质自氧化
产物 ⁄„的生成有极显著的抑制作用 o并显示出一
定的量效关系k Π s1stl ∀但在 t1y °ª#°pt时 o其
抑制作用明显下降 o这可能因为黑果枸杞色素在高
含量时 o其本身所具有的色泽对吸光度测定产生干
扰的结果k图 ul ∀
当向小鼠肝匀浆液中添加 ƒ ≥¨’w和 ‹u’uu种自
由基诱导剂后 o肝脂质氧化产生的 ⁄„ 量明显增
加 o黑果枸杞色素对由 ƒ ≥¨’w和 ‹u ’u诱导的小鼠肝
组织脂质过氧化也具有极显著的抑制作用k Π 
s1stl o但随着质量浓度升高 o抑制效果出现了缓慢
下降的趋势 o而且黑果枸杞色素对 ‹u’u诱导组的抗
氧化效果略低于 ƒ ≥¨’w诱导组k图 v owl ∀
317 对小鼠肝线粒体肿胀度的的影响 以 s °ª#
°pt样品作对照 o发现黑果枸杞色素为 s1sux °ª#
°pt时 o体系的吸光度降幅最大 o表明低含量下可
#t{tt#
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图 u 黑果枸杞色素对小鼠肝组织
脂质自氧化的影响k ν € xl
图 v 黑果枸杞色素对 ƒ ≥¨’w诱导的小鼠
肝组织脂质过氧化的影响k ν € xl
图 w 黑果枸杞色素对 ‹u’u诱导的小鼠
肝组织脂质过氧化的影响k ν € xl
能导致线粒体肿胀的发生 o而在 s1sx °ª#°pt以上
时 o对线粒体肿胀具有明显的抑制作用 o显示出一定
量效关系 o而且在高质量浓度 s1u ∗ t1y °ª# °pt
时 o抑制作用极为显著k Π s1stl ∀
4 讨论
在还原力测定反应体系中 o黑果枸杞色素表现
为良好的电子供体 o其供应的电子可使 ƒ v¨ n还原成
ƒ u¨ n o并与自由基形成较稳定的物质 o从而能中断自
氧化连锁反应 o说明黑果枸杞色素具有抗氧化作用
潜力 ∀
⁄°°‹#是一种很稳定的以氮为中心的自由基 o
广泛的被用来评价抗氧化活性 ∀黑果枸杞色素对
⁄°°‹#的清除作用表明 o该物质在化学本质上具有
降低羟自由基 !烷自由基或过氧化自由基的有效浓
度和打断脂质过氧化链反应的作用≈{  ∀而羟自由
基 !烷自由基或过氧化自由基又是体内较活泼 !进攻
性强的活性氧 o危害较大 o可介导多种病理变化 o黑
果枸杞色素对他们的清除能力显示出其较好的抗氧
化性能和保健功能 o同时也表明了其潜在的药食两
用价值 ∀
ƒ ±¨·²±反应是最常见的产生羟自由基的化学反
应 o其中 ‹u’u的量和 ƒ ±¨·²±反应产生的 ’‹ p量成正
比 o当给予电子受体后 o用 ªµ¨¶¶试剂显色 o形成红色
物质 o其呈色与 ’‹ p的量成正比 ∀当向该反应体系
中加入一定含量的黑果枸杞色素样品时 o可对 ’‹ p
的生成产生一定抑制性作用 o说明受试物能抑制或
清除羟自由基的产生 ∀
通过测定脂质过氧化产物 ) ) ) ⁄„的生成量 o
可知黑果枸杞色素对小鼠肝组织脂质过氧化具有抑
制作用 o但它对 ‹u ’u诱导组的抗氧化效果略低于
ƒ ≥¨’w诱导组 o这可能是因为 ‹u ’u诱导体系中产生
的自由基 k单线态氧l强于 ƒ ≥¨’w诱导的自由基
k#’‹l o超出了体系中黑果枸杞色素对活性氧清除
的能力范围 ~另一种可能是 ‹u’u诱导体系中产生的
自由基与黑果枸杞色素反应后 o又产生出新自由基
的缘故 ∀总之 o在一定含量范围内 o黑果枸杞色素能
有效的抑制肝组织脂质过氧化产物 ⁄„的生成 o说
明其在肝组织水平具有明显的抗氧化作用 ∀
红细胞内含有启动和催化脂质过氧化反应的金
属络合物血红蛋白 o细胞膜上富含多价不饱和脂肪
酸 o这些特点均使该类细胞对氧化损伤极为敏感 o当
向红细胞悬液中加入 ‹u’u后 o红细胞膜会受到氧化
损伤 o而导致溶血现象的发生≈tv  o因此 o红细胞膜常
被用作分析和筛选天然抗氧化剂的实验体系 ∀黑果
枸杞色素所具有的对红细胞溶血的抵抗作用 o说明
它在细胞水平上具有较好的抗氧化活性 o可以有效
的减弱体外的脂质过氧化反应 o这在某种程度上也
预示着其在预防肿瘤和延缓衰老等方面具有一定的
应用前景 ∀
线粒体是生物体内 „×°生成的主要场所 o又是
多种药物的细胞内作用靶点 o但其膜上富含的多不
饱和脂肪酸磷脂分子极易受到自由基攻击 o发生脂
质过氧化损伤 o引起线粒体膜结构变形 o活性降低 o
膜通透性改变 o从而诱发疾病的产生≈tw  ∀而线粒体
肿胀度与线粒体的生理和病理性反应有关 o过度的
#u{tt#
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肿胀则是线粒体结构损伤的表现≈tu  ∀维生素 ≤ 和
ƒ ≥¨’w可以诱导鼠肝线粒体膜发生脂质过氧化反应 o
造成膜结构损伤 o导致线粒体发生肿胀 o使得反应体
系中线粒体悬液的吸光度值下降 ∀黑果枸杞色素能
通过清除自由基作用防止线粒体膜脂质过氧化反
应 o从而减低线粒体肿胀度 o这些证明黑果枸杞色素
在细胞器水平上也具有很好的抗氧化功能 o对于维
持线粒体结构和功能的完整性 o乃至维持组织细胞
和整个生物体的正常生命活动都具有重要的意义 ∀
可见 o黑果枸杞色素在小鼠血清 !细胞器 !细胞
及组织水平上都拥有较好的体外抗氧化活性 o预示
了其对生物机体的保健功效 ∀
在民族医药中 o黑果枸杞具有治疗心热病 !心脏
病的功效≈t  ∀其原植物资源广泛 o易于种植 o从果实
中提取的色素色价 ∞tht ¦°为 vy1z ? t1s o总多酚含量
达kvw1u ? s1{l h o具有较好的抗氧化活性 o有望用
于与自由基相关的心血管疾病等的防治方面 o若以
此为基础开发新药 o将具有广阔的应用前景 ∀
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ƒ²²§≥¦¬× ¦¨«±²¯ oussw otxktl }t| q
≈y   ²±¬¦¤ Š¬∏¶·¬o •²±¤¯§ ∞ •µ²¯¶·¤§q „¦¼¯¤·¨§¤±·«²¦¼¤±¬±¶©µ²°
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Œ¬±tou o ±˜ • ¬¨2­¬±ªt o‹„‘Š ≥∏2­∏±t o∂ ‹¤¬2¼¬±ªu
(t . Σχηοολ οφ Λιφε Σχιενχε , Εαστ Χηινα Νορµαλ Υνιϖερσιτψ, Σηανγηαι usssyu , Χηινα ;
u . Λιφε ανδ Ενϖιρονµεντ Σχιενχε Ινστιτυτε , Ξινϕιανγ Νορµαλ Υνιϖερσιτψ, Υρυµθι {vssxw , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¨¯√¤∏¯¤·¨·«¨ ¤±·¬²¬¬§¤±·¤¦·¬√¬·¼ ²©·«¨ ³¬ª° ±¨·²© Λψχιυµ ρυτηενιχυµ q Μετηοδ : ׫¨ ¤±·¬²¬¬§¤±·¤¦·¬√¬·¬¨¶
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[ Κεψ ωορδσ] Λψχιυµ ρυτηενιχυµ ~³¬ª° ±¨·~¤±·¬²¬¬§¤±·¤¦·¬√¬·¼~ ιν ϖιτρο
≈责任编辑 刘  
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第 vt卷第 tw期
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中 国 中 药 杂 志
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