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Pharmacokinetics of pueraria flavonoids from Pueraria lobata by anti-oxidant pharmacodynamics effect method

抗氧化效应法研究葛根黄酮微丸的药动学



全 文 : 表 u 彝肤软膏重楼皂苷 ´和重楼皂苷 µ含量测定
kν € vl
测定成分 样品批号 平均值 r°ª# ªpt • ≥⁄rh
重楼皂苷 ´ systst s1|w{ w s1x
systsu s1|xz w
systsv s1|xy u
重楼皂苷 µ systst s1yy| y s1{
systsu s1yzt {
systsv s1yyt u
卡波姆黏度或过氧化铝柱除去卡波姆 ∀实验表明 o
加入氯化钠后 o色谱峰基线平稳 o分离度良好 o且简
便易行 o回收率高 o因此 o提取方法中选用氯化钠为
强电解质降低卡波姆黏稠度 o保证实验的稳定性 ∀
在流动相选择方面 o曾考查了不同比例甲醇 2水
和乙腈 2水 ≈v  o发现在保留时间太长或分离度不好 o
后用乙腈 2s1suh磷酸 kwvΒxzl作流动相 o重楼皂苷
´ !重楼皂苷 µ达到基线分离 o且峰形对称尖锐 ∀
≈参考文献  
≈t  张 艺 o孟宪丽 o张 静 o等 q民族药物学与新药开发 ≈ q世界
科学技术 ) ) ) 中医药现代化 oussxozkxl}xwq
≈u  • ≤罗 o° 舍斯基 o° 维勒 q药用辅料手册 ≈  q郑俊民主译 q
北京 }化学工业出版社 oussw}tszq
≈v  中国药典 ≈≥ q一部 qussx}t{vq
Στυδιεσ ον θυαλιτψ στανδαρδ οφΨιφυ οιντµ εντ
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(t. Ετηνοµ ιδιχινε Ινστιτυτε οφ Χηενγδυ Υνιϖερσιτψ οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Χηενγδυ ytttvz, Χηινα;
u. Λυναν Πηαρµ αχευτιχαλΓρουπ Χορπορατιον, Λινψι uzysss, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ§¨ √¨¯²³¤° ·¨«²§©²µ·«¨ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©≤«²±ª¯²∏¶¤³²±¬±´ ¤±§≤«²±ª¯²∏¶¤³²±¬±µ ¬± ≠¬©∏²¬±·° ±¨·q
Μετηοδ : ׫¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦¶¨³¤µ¤·¬²± º¤¶³¨ µ©²µ° §¨²± ‹¼³¨ µ¶¬¯ ’⁄≥u ≤t{ ¦²¯∏°± kw1y °° ≅ txs °°o x Λ°l ¤±§Œ…… 2ytuttt
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[ Κεψ ωορδσ] ≠¬©∏²¬±·° ±¨·~ ¦«²±ª¯²∏¶¤³²±¬± ´ ~ ¦«²±ª¯²∏¶¤³²±¬± µ ~ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨§¨ ·¨°¬±¤·¬²±
≈责任编辑 鲍 雷  
≈收稿日期   ussz2st2tu
≈基金项目   江苏省中医药管理局科学技术研究专项 k≠svswl~江苏省卫生厅 / tvx工程 0重点人才项目 kyx• ≤ussusyxl
≈通讯作者   3 陈彦 oר¯}ksuxl{xyvz{s|o∞2°¤¬¯}¼¦«¨ ±usuƒ ¼¤«²²q¦²°q¦±
抗氧化效应法研究葛根黄酮微丸的药动学
贾晓斌 tou o蔡 垠 tou o陈 彦 t3 o成旭东 t o范晨怡 t o施亚芳 t
ktq江苏省中医药研究院 江苏省现代中药制剂工程技术研究中心 o江苏 南京 utssu{~
uq江苏大学 o江苏 镇江 utustvl
≈摘要   目的 }研究葛根黄酮微丸的药动学 ∀方法 }采用抗氧化效应法测定给药后不同时间点大鼠血浆中所
含黄酮类成分的抗氧化能力 o计算出血浆中黄酮类物质的含量 o得到大鼠给药葛根黄酮后血浆中黄酮类物质的含
#szvu#
第 vu卷第 uu期
ussz年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ uu
‘²√ °¨¥¨ µo ussz
量的变化曲线 o得出微丸制剂在体内的药动学过程 ∀结果 }葛根黄酮微丸给药后的 „˜≤为愈风宁心片的 w1ws倍 ∀
结论 }将葛根黄酮制成微丸能够有效提高葛根中黄酮类物质的生物利用度 ∀
≈关键词   抗氧化效应法 ~葛根素 ~葛根黄酮 ~微丸 ~愈风宁心片
≈中图分类号   • u{v ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszluu2uvzs2sw
葛根为豆科植物野葛 Πυεραρια λοβατα的块根 ∀
葛根中主要含有异黄酮及其苷类成分 o主要有葛根
素 k³∏¨µ¤µ¬±l!大豆苷元 k§¤¬§½¨ ¬±l!大豆苷 k§¤¬§2
½¬±l!芒柄花素 k ©²µ°²±²± ·¨¬±l!金雀花异黄素
kª¨ ±¬¶·¨¬±l!染料木素 kª¨ ±¬¶·¬±l等 ≈t2v  ∀葛根总黄酮
可以改善脑部微循环 ≈w  o松弛血管平滑肌 ≈x  o扩张
冠状动脉血管 ≈y  o改善正常和缺血心肌的代谢 ≈z  o
抗心律失常 ≈{  o抑制血小板聚集 ≈|  ∀
尽管葛根异黄酮具有明显的生物活性 o但是葛
根中所含有的主要异黄酮葛根素的生物利用度却很
低 o特别是口服制剂 ∀与葛根素注射剂相比 o愈风宁
心片和愈风宁心胶囊的生物利用度仅为 v1|xh ≈ts 
和 x1wxh ≈tt  ∀由于微丸制剂可以增加药物与消化
道的接触面积 o从而增加药物的口服生物利用度 o本
实验室通过现代制备技术将葛根黄酮制备成微丸来
改善其生物利用度 ∀
经典的主成分血药浓度法只能够说明活性成分
本身的药代动力学特点 o而不能反映含有这种成分
的中草药及其方剂的药代动力学 ∀所以在实验中采
用抗氧化效应法来评价葛根黄酮微丸制剂相对于一
般制剂在体内吸收上的优势 ∀
1 材料
实验动物 }成年雄性 • ¤¶·¨µ大鼠由江苏省中医
药研究院实验动物中心提供 o许可证号 }≥≠ ÷Žk苏 l
ussu2sssz∀葛根素对照品 k中国药品生物制品检定
所 o批号 szxu2||szl~葛根黄酮 k杭州绿天生物技术
有限公司 o含葛根素 vuh l~愈风宁心片 k承德燕峰
药业有限责任公司 lo甲醇 k色谱纯 o µ¨®公司 lo二
氢罗丹明 tuvk§¬«¼§µ²µ«²§¤°¬± t¨uv ⁄‹ • o¶¬ª°¤公
司 lo亚硝酸钠 o碳酸氢钠 o二甲基甲酰胺 k§¬¨·«¼¯ 2¨
± ·¨µ¬¤°¬± ³¨¨ ±·¤¤¦¨·¬¦¤¦¬§o⁄×°„lo二乙烯三胺五乙
酸 o氢氧化钠 o丙酮 o戊巴比妥钠 o过氧化氢 k上药集
团 lo纯净水 ∀
2 方法
2q1 模型制备 将成年雄性 • ¤¶·¨µ大鼠 k体重 vss
ª左右 l称重 o按照体重给予 xh 戊巴比妥钠溶液
s1t °每 tss ªo将其麻醉 ∀仰面向上稍做固定 o静
脉插管 ∀注入 tss ˜肝素抗凝 ∀插管末端固定于大
鼠背上 o放入鼠笼继续饲养恢复 t §o进行实验 ∀
2q2 大鼠给药和采血 将大鼠 tu只 o随机分为两
组 o按照上述方法进行手术 ∀实验前禁食 tu «o不禁
水 o按照葛根素 tx °ª每 tss ª大鼠剂量灌胃给药 o
给药后于 tsousowsoyso|sotusot{souwsovysow{s
°¬±进行采血 o每次约 s1w °o采完后用 us ˜肝素
注入采血管抗凝 ∀采出的血置于含肝素的离心管
中 o离心 k׊p tyŠ台式高速离心机 o上海安亭仪
器厂 lo分出血浆 o冷冻保存 ∀
2q3 抗氧化实验 ≈tuotv  过氧化亚硝酸盐的制备
s1yy °²¯ # pt ‹u ’u用 s1z °²¯ # pt ‹ ≤¯酸化和
s1y °²¯# pt ‘¤‘’u混合发生反应 o以 v °²¯ # pt
‘¤’‹结束反应 ∀
过氧化亚硝酸盐浓度测定 用紫外分光光度计
在 vsu ±°处测定吸光度 o其摩尔吸光系数 Εvsu ±° €
t yzs °²¯# pt # ¦°pt ∀利用吸光度公式 Α € ΕΧ可
以推出过氧化亚硝酸盐的浓度 ∀
二氢罗丹明试液的制备 取 ⁄‹ • tuv用二甲基
甲酰胺配置成 u{1| Λ°²¯ # pt的溶液 o p us ε 保
存 ∀
血浆预处理 取分离好的血浆 o加入 w倍体积
的甲醇沉淀蛋白质 otx sss µ# °¬±pt高速离心 o取上
清液 ‘u吹干 o加入 uss ˏ甲醇定容 ∀
试验反应 分别取适量配制好的二氢罗丹明试
液 !炭酸氢钠试液和二乙烯三胺五乙酸反应体系中
k含有 ux Λ°²¯ # pt ⁄‹ • tuvo ux °°²¯ # pt
‘¤‹≤’v otss Λ°²¯ # pt ⁄×°„lo混匀 o加入待测溶
液 uss ˏo加入 t1u Λ°²¯ # pt过氧化亚硝酸盐开
始反应 ∀
荧光检测 k岛津 • ƒ p xvst°≤荧光分光光度计 l
反应后立即检测 ∀激发波长和发射波长分别为
w|v ±°和 xuw ±°∀
2q4 含药血浆的抗氧化能力与葛根素质量浓度的
关系考察 取空白血浆 o分别加入葛根素质量浓度
w1y|{ Λª# °pt葛根黄酮溶液 o制成含葛根素
wy1|{ouvw1|owy|1{o|v|1you vw| ±ª# °pt的葛根
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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黄酮对照血浆 o按照 1q2q3项下操作 o考察含药血浆
的抗氧化能力与葛根黄酮浓度的关系 ∀
2q5 葛根黄酮微丸与愈风宁心片抗氧化效应比较
取大鼠 tu只 o分成两组 o按照 1q2q1项下操作 o进
行动物手术 o手术后饲养 t ∗ u §进行恢复 ∀将手术
大鼠分为 v组 o按照 1q2q2项下操作 o分别灌胃给予
葛根黄酮微丸 !愈风宁心片 k剂量按葛根黄酮中葛
根素计 ys Λª每 tss ª体重 lo并于预设的时间点进
行采血 o分离血浆 o加入丙酮进行沉淀 o离心 o取上清
液 tss ˏo按照 1q2q3项下进行抗氧化试验 ∀
3 结果
3q1 含药血浆的抗氧化能力与葛根素质量浓度的
关系考察结果 含有不同量葛根黄酮的对照血浆的
抗氧化能力有着明显的差距 o结果见表 to图 t∀
表 t 葛根黄酮抗氧化能力与荧光强度的线性关系
k以葛根素计 l
葛根黄酮 kΧl
r±ª# °pt
±¯Χ 荧光强度 相对荧光强度rh
¥¯¤±® vzx1s
wy1|{ v1{ vtt1x {v1sz
uvw1| x1x uuy1u ys1vu
wy|1{ y1u t|u1| xt1ww
|v|1y y1{ tyt1t wu1|y
u vw|1s z1{ ttx1x vs1{s
图 t 不同含量对照血浆的抗氧化图
由表 t!图 t中可以看出 o葛根素浓度越强 o其
荧光值越低 ∀对相对荧光强度与葛根素浓度自然对

数进行回归分析 o结果表明相对荧光强度与葛根素
浓度对数呈线性关系 o回归方程 Ψ € p tv1vsv ±¯Χ n
tvv1zuoρ€ s1||| u∀
3q2 葛根黄酮微丸与愈风宁心片抗氧化效应比较
将葛根黄酮微丸与愈风宁心片抗氧化试验结果通
过 2q1方程进行回归折算成葛根黄酮的浓度 o以葛
根素计 o结果如图 u∀
图 u 葛根黄酮微丸 !愈风宁心片相对生物利用度对比
对上述数据利用 v°|z进行计算 o结果见表 u∀
葛根黄酮微丸在大鼠体内的葛根黄酮浓度明显
高于愈风宁心片 o通过 v°|z软件计算 o葛根黄酮微
丸 „˜≤为愈风宁心片的 w1ws倍 o表明葛根黄酮微
丸能够有效提高葛根中黄酮类物质的生物利用度
kΠ s1sxl∀
4 讨论
本实验中以大鼠为实验对象研究了以含药血浆
抗氧化效应为指标研究葛根总黄酮不同剂型大鼠体
内的药动学过程 ∀实验结果表明葛根黄酮微丸制剂
与愈风宁心片的主要药动学参数均有较大的差异 o
说明微丸制剂用材料改变了葛根黄酮的体内吸收 !
分布 !代谢和排泄的行为 ∀葛根黄酮微丸与愈风宁
心片的 Χ°¤¬分别为 u vts1zot|t1x ±ª# °pt oτ°¤¬分
别为 s1sxyos1wvx «o„˜≤分别为 t xzv1zowuw1| ±ª
# «# °pt ∀表明葛根黄酮微丸与愈风宁心片比
较 o达峰浓度显著提高 o达峰时间有所延长 o葛根黄
酮微丸的 „˜≤为愈风宁心片的 w1ws倍 o表明将葛
表 u 葛根黄酮微丸 !愈风宁心片的药动学参数
单位
Α
r±ª# °pt
Κ¨
r«pt
ΚΑ
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¤ª·¬°¨

ΤtruŽΑ

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Χ°¤¬
r±ª# °pt
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r# «pt
∂ rƒk≤l

微丸 u x|u1s t1y yz1{ s1tyv s1sts s1wvt s1sxy u vts1z t xzv1z s1s|x s1sx|
片 uzv1t s1y x1| s1tuy s1ttz t1t|x s1wvx t|t1x wuw1| s1vxv s1ys|
根黄酮制成微丸可以大幅度提高其口服生物利用
度 o从而提高疗效 ∀实验结果已经明显反映了不同
药物机型对药物体内过程的影响 o虽然实验中由于
实验动物的因素这种影响并没有体现完全 o本实验
室将进一步研究不同剂型整体给药条件下药物体内
过程比较 ∀一种中药的效应具有多重性 o内含的不
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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同成分往往具有不同的药理活性 ∀所以仅通过主成
分血药浓度法很难确定哪种成分的作用能反应主方
的药效 o以及药物配伍对化学成分在体内的药效发
挥和药动学参数造成显著的影响 ∀在实验中也发现
葛根素和含有等量葛根素的葛根黄酮给药后抗氧化
效应曲线具有明显变化 o说明抗氧化效应法评价葛
根黄酮微丸在体内的药动学过程要较主成分血药浓
度法更能体现中药提取物或者复方制剂在体内的药
动学过程 ∀
≈参考文献  
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¤±§ ∏´¤±·¬©¬¦¤·¬²± ²©¬¶²©¯¤√²±²¬§¶¬± Ž∏§½∏§¬¨·¤µ¼ ¶∏³³¯ °¨ ±¨·¶
¥¼ «¬ª«2³¨ µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ ¤±§¨¯ ¦¨·µ²¶³µ¤¼ ¬²±¬2
½¤·¬²± ·¤±§¨ ° °¤¶¶¶³¨ ¦·µ²° ·¨µ¼≈ q „ªµ¬¦ƒ²²§ ≤«¨ °o ussvo
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²³·¬°¤¯ ¦²±§¬·¬²±¶©²µ·«¨ ¶¼±·«¨ ¶¬¶²©³¨ µ²¬¼±¬·µ¬·¨ ¥¼ °¬¬¬±ª¤2
¦¬§¬©¬¨§«¼§µ²ª¨ ± ³¨ µ²¬¬§¨ º¬·«±¬·µ¬·¨≈ 1ƒµ¨¨• ¤§¬¦…¬²¯  §¨o
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≈tv  ‘• Ž²²¼o „ • ²¼¤¯ o¯ ‹ Œ¶¦«¬µ²³²∏¯²¶o ·¨¤¯q °µ²ª¬¼±¬·µ¬·¨2° 2¨
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Πηαρµ αχοκινετιχσ οφ πυεραρια φλαϖονοιδσ φρο µ Πυεραρια λοβατα βψ
αντι2οξιδαντ πηαρµ αχοδψναµ ιχσεφφεχτ µ ετηοδ
Œ„ ÷¬¤²2¥¬±tou o ≤„Œ≠¬±tou o ≤‹∞‘≠¤±t o ≤‹∞‘Š ÷∏2§²±ªt o ƒ„‘≤«¨ ±2¼¬t o ≥‹ Œ≠¤2©¤±ªt
(t. ϑιανγσυ Αχαδεµ ψ οφ Χηινεσε Μεδιχινε Σχιενχεσ, ϑιανγσυ Ενγινεερινγ ανδ Τεχηνολογψ Ρεσεαρχη
ΧεντερφορΜοδερν Χηινεσε Πηαρµ αχευτιχαλΠρεπαρατιον, Νανϕινγ utssu{, Χηινα;
u. ϑιανγσυ Υνιϖερσιτψ, Ζηενϕιανγ utustv, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ·«¨ ³«¤µ°¤¦²®¬± ·¨¬¦¶²©³∏¨ µ¤µ¬¤©¯¤√²±²¬§¶k°ƒl ©µ²° Πυεραρια λοβαταq Μετηοδ : „± ¤±·¬2²¬¬2
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° ¤¨¶∏µ¨¶·«¨ ©¯∏²µ¨¶¦¨±¦¨ ¬±·¨±¶¬·¼o ¤±§¦¤¯¦∏¯¤·¨¶·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©¦²°³²± ±¨·¶¬± ³¯¤¶°¤o ·«¨ ± º¨¦¤± ª¨··«¨ ³¯²·²©·«¨ ¦«¤±ª¨
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[ Κεψ ωορδσ] ¤±·¬2²¬¬§¤±·³«¤µ°¤¦²§¼±¤°¬¦¶ ©¨©¨¦·° ·¨«²§~ ³∏¨ µ¤µ¬±~ ³∏¨ µ¤µ¬¤ ©¯¤√²±²¬§¶~ ³¨ ¯¯ ·¨¶~ ¼∏©¨±ª±¬±ª¬¬± ·¤¥¯ ·¨¶
≈责任编辑 鲍 雷  
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