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Fast and simultaneous determination of four index components in Qingwei Huanglian tablets by RP-HPLC

RP-HPLC快速测定清胃黄连片中4种指标成分的含量



全 文 :纯化的目的 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 qussx}ywq
≈u  杨树彬 o王 承 q龙胆化学成分和药理作用研究进展 ≈ q中医
药学报 oussxovvkyl}xwq
≈v  罗集鹏 o楼之岑 q中药龙胆中龙胆苦苷 !獐牙菜苦苷和当药苷
的分离与鉴定 ≈ q中草药 ot|{yotzkwl}tq
≈w  • ¤±ª÷o • ¤±ª≠ ± o Š ±¨ª≠ o ·¨¤¯qŒ¶²¯¤·¬²± ±¨§³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ²©
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≈y  张天佑 q逆流色谱技术 ≈   q北京 }北京科学技术出版社 o
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(Χολλεγε οφ Πηαρµ αχψ, ∆αλιαν ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, ∆αλιαν ttysuz, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³¤° ·¨«²§©²µ·«¨ ³µ¨³¤µ¤·¬√¨¶¨³¤µ¤·¬²± ²©ª¨ ±·¬²³¬¦µ¬± ©µ²° Ραδιξ Γεντιαναε ¥¼ «¬ª«2¶³¨ §¨
¦²∏±·¨µ2¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ k‹ ≥≤≤≤lq Μετηοδ : ׫¨ ¦µ∏§¨ ¤¯¦²«²¯ ¬¨·µ¤¦·¶º µ¨¨ ¨¯∏·¨§²± ¤°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ¦²¯∏°± ¤±§·«¨ ±
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º µ¨¨ ²¥·¤¬± §¨©µ²° vss °ª¦µ∏§¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ²± ¼¯ ¬± ²± 2¨¶·¨³¶¨³¤µ¤·¬²± ¤±§¯¨¶¶·«¤± uss °¬±∏·¨¶q Χονχλυσιον: ׫¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §° ·¨«2
²§¬¶¶¬°³¯ o¨ «¬ª« ©¨©¬¦¬¨±¦¼ ¤±§¶∏¬·¤¥¯¨©²µ ¤¯µª¨ 2¶¦¤¯¨¶¨³¤µ¤·¬²± ²©ª¨ ±·¬²³¬¦µ¬±q
[ Κεψ ωορδσ] • ¤§¬¬Š ±¨·¬¤±¤¨ ~ «¬ª«2¶³¨ §¨¦²∏±·¨µ2¦∏µµ¨±·¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼~ °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±~ ª¨ ±·¬²³¬¦µ¬±
≈责任编辑 鲍 雷  
≈收稿日期   ussz2sy2st
≈基金项目   河北省科技公关计划项目 ksyuzyt|xyl
≈通讯作者   3 蒋晔 oר¯}ksvttl{yuyysy|o∞2°¤¬¯}­¬¤±ª¼¨ ƒ «¨ ¥°∏q §¨∏q¦±
• °2 ‹°≤快速测定清胃黄连片中
w种指标成分的含量
李艳荣 o蒋 晔 3 o郝 福 o丁翔宇
k河北医科大学 药学院 o河北 石家庄 sxsstzl
≈摘要   目的 }建立 • °2‹ °≤测定清胃黄连片中栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱和甘草酸铵 w种指标成分含量
的方法 ∀方法 }采用 ‹ ¼³¨ µ¶¬¯ ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox1s Λ°l~流动相为乙腈 2s1xh 三乙胺水溶液 k磷酸调
³‹ v1sl采用梯度洗脱 o检测波长 uvs ±°~流速 t1s °# °¬±pt ∀结果 }栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱和甘草酸铵的线
性范围分别为 }w1{u ∗ zz1uox1{s ∗ |u1{ot1yv ∗ uy1t oy1ws ∗ tsu Λª# °pt ks1||| z  ρ s1||| |lo平均回收率均
#z|xu#
第 vu卷第 uw期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
大于 |{1sh ∀结论 }该方法专属性强 o结果准确可靠 o重复性好 o可用于清胃黄连片中栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱
和甘草酸铵的含量测定 o能更好的控制清胃黄连片的质量 ∀
≈关键词   • °2‹ °≤~清胃黄连片 ~栀子苷 ~黄芩苷 ~盐酸小檗碱 ~甘草酸铵
≈中图分类号   • u{wqt ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszluw2ux|z2sw
清胃黄连片具有清胃泻火 o解毒消肿之功效 o用
于口舌生疮 o牙龈 !咽喉肿痛 k中药郭颂标准 t||{
ut|2t{{l∀方中君药黄连具有泻胃火的作用 o其指
标成分为盐酸小檗碱 ~黄芩 !栀子和黄柏为臣药 o具
有清胃及三焦之火的作用 o其指标成分分别为栀子
苷 !黄芩苷和盐酸小檗碱 ~甘草为使药 o具有调和诸
药的作用 o其指标成分为甘草酸铵 ∀现行的清胃黄
连片国家药品标准没有含量测定项 o仅对部分药味
采用了鉴别手段进行质量控制 ∀虽有文献 ≈t 测定
了盐酸小檗碱的含量 o但同时测定 w中指标成分含
量的方法未见报道 ∀根据中医理论 o复方中药药效
的发挥是各药味多种组分共同作用的结果 o它们含
量的多少及的比例关系都会影响其疗效 o因此多指
标成分同时测定能更好地表征清胃黄连片的质量 ∀
本研究首次建立了同时测定清胃黄连片 w中指标成
分的含量测定方法 o可以节约分析成本 o减少分析误
差 o适于清胃黄连片的含量测定及质量控制 ∀
1 仪器与试药
液相色谱仪系统包括 }°∞• ŽŒ‘ ∞ ∞• ≥ µ¨¬¨¶
uss泵 k美国 lo„³³¯¬¨§…¬²¶¼¶·¨°¶z{x„检测器 k美
国 lo‹ • 色谱工作站 k南京千谱软件有限公司 l∀
对照品 }栀子苷 kttszw|2ussvs|l!黄芩苷 kttsztx2
ussutul!盐酸小檗碱 kttzstv2ussus{l和甘草酸铵
kttszvt2ussws{l均由中国药品生物制品检定所提
供 ~甲醇 !乙腈为色谱纯 ~水为重蒸水 ~其他试剂均为
分析纯 ∀清胃黄连片 }武汉康乐药业股份有限公司
k批号 sxststosxsvswosxszs|l~栀子 !黄芩 !大黄 !
黄柏及甘草等药材均为市售品 o并由河北医科大学
生药教研室聂凤禔教授鉴定 ∀
2 方法与结果
2q1 色谱条件及系统适用性试验 ‹¼³¨ µ¶¬¯ ≤t{色
谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox1s Λ°l~流动相 „乙腈 2…
s1xh三乙胺水溶液 k磷酸调 ³‹ v1sl∀洗脱梯度时
间程序 }„2… kusΒ{sl us °¬± „2…kxsΒxslx °¬± „2…
kxsΒxslx °¬±„2…kusΒ{sl~检测波长 uv{ ±°~流速 t
°# °¬±pt ~柱温为室温 ~进样量 us ˏ∀在此条件
下样品各组分分离良好 o对照品溶液 !样品溶液 !及
各阴性对照溶液的色谱图见图 t∀
图 t 清胃黄连片色谱图
„q对照品 ~…q样品 ~≤q栀子阴性对照 ~⁄q黄芩阴性对照 ~
∞q黄连和黄柏阴性对照 ~ƒq甘草阴性对照
tq栀子苷 ~uq黄芩苷 ~vq盐酸小檗碱 ~wq甘草酸铵
2q2 对照品溶液及供试品溶液的制备 对照品溶
液的制备 }精密称取栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱和
甘草酸铵对照品各适量 o用甲醇制成一定浓度的栀
子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱 !甘草酸铵的储备液 ∀分
别取上述储备液适量置 ts °量瓶中 o加甲醇稀释
至刻线 o摇匀 o制成质量浓度分别为 v{1yowy1wo
tv1toxt1s Λª# °pt的栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗
碱 !甘草酸铵的混合对照品溶液 ∀
供试品溶液的制备 }精密称取清胃黄连片细粉
约 s1u ª置 ux °量瓶 o加甲醇适量 o超声 vs °¬±o
放冷 o用甲醇稀释至刻线 o摇匀 ∀取上清液 o微孔滤
膜过滤 o取续滤液 u °置 ts °量瓶用甲醇定容 o
摇匀作为供试品溶液 ∀
2q3 精密度试验 取同一混合对照品溶液 o重复进
样 x次 o每次进样 us ˏo记录色谱峰面积 o计算栀
子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱 !甘草酸铵的色谱峰面积 o
其 • ≥⁄分别为 t1uh os1{h ot1sh ot1vh kν € xlo
结果表明精密度良好 ∀
2q4 重复性试验 取同一批号清胃黄连片细粉 k批
号 sxststlo按 2q1项下方法 o精密称定 x份 o制备供
试品溶液 o平行测定 o计算含量 o栀子苷 !黄芩苷 !盐酸
小檗碱和甘草酸铵含量的 • ≥⁄分别为 t1wh ot1th o
s1|h ot1uh o表明方法的重复性良好 ∀
2q5 稳定性试验 取同一样品溶液 o分别在 souo
woyo{otu «进样 us ˏo记录色谱峰面积 o计算栀子
#{|xu#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱 !甘草酸铵色谱峰的峰面积
的 • ≥⁄分别为 t1vh ot1sh os1|h ot1wh kν € xlo
说明样品在 tu «内稳定 ∀
2q6 线性试验 精密量取栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小
檗碱和甘草酸铵储备溶液各适量置 ts °量瓶 o加
甲醇稀释至刻度 o摇匀 o制成质量浓度分别为 zz1uo
|u1{ouy1totsu Λª# °pt的栀子苷 !黄芩苷 !盐酸
小檗碱和甘草酸铵的混合对照品溶液 o然后采用倍
比稀释法制成系列浓度的溶液 o在 2q1的色谱条件
下 o取 us ˏ注入液相色谱仪 o记录色谱峰面积 ∀以
峰面积 Α为纵坐标 o对照品浓度 Χ为横坐标 o进行
线性回归 o结果见表 t∀
表 t 各指标成分的线性关系
指标成分 线性方程 ρ
线性范围
rΛª# °pt
栀子苷 Α € u1ts ≅ tswΧ n u1vx ≅ tsv s1||| | w1{u ∗ zz1u
黄芩苷 Α € u1zt ≅ tswΧ n z1ts ≅ tsv s1||| | x1{s ∗ |u1{
盐酸小檗碱 Α € y1zt ≅ tswΧ n y1ww ≅ tsv s1||| z t1yv ∗ uy1t
甘草酸铵 Α € x1xx ≅ tsvΧ n x1{y ≅ tsu s1||| z y1ws ∗ tsu
2q7 加样回收率试验 取已知栀子苷 !黄芩苷 !盐酸
小檗碱和甘草酸铵含量的同一批样品 k批号 sxststl
y份 o每份约 s1t ªo精密称定 ∀分别加入栀子苷 !黄芩
苷 !盐酸小檗碱 !甘草酸铵储备液适量置 ux °量瓶
中 o挥干 o按 2q2项下的方法制备对照品溶液和供试
品溶液 o按 2q1项下的方法进行测定 o以 ux °中的
绝对含量计算加样回收率 o回收率结果见表 u∀
表 u 各组分回收率测定结果 kν € yl
组分
样品中含量
r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
rh
• ≥⁄
rh
栀子苷 t1ss t1sv u1st |{1u t1u
黄芩苷 w1wy w1yw |1tt tss1w s1|
盐酸小檗碱 s1|u s1|w t1{w |{1s t1s
甘草酸铵 v1{{ v1|{ z1{u ||1t t1w
2q8 专属性试验 按处方制备不含栀子 !黄芩 !黄
连和黄柏 !甘草药材的样品 o2q2项下制备方法制备
阴性对照溶液 o取各阴性对照溶液 us ˏo注入液相
色谱仪 o记录色谱图 o见图 to由色谱图可知阴性样
品溶液对样品含量测定无干扰 ∀
2q9 含量测定 取清胃黄连片样品 us片 o精密称
定 o除去包衣 o研细 ∀精密称取细粉约 s1u ªo按 2q2
项下方法制备对照溶液和供试品溶液 o分别吸取 u
种溶液各 us ˏo注入液相色谱仪 o每份样品测 v
次 o依次测定 v批样品 o结果见表 v∀
表 v 清胃黄连片的含量测定 k°ªr片 oν € vl
批号 栀子苷 • ≥⁄rh 黄芩苷
• ≥⁄
rh
盐酸
小檗碱
• ≥⁄
rh
甘草
酸铵
• ≥⁄
rh
sxstst v1vt s1{ tw1z t1u v1sz t1x tu1z t1v
sxsvsw v1|{ t1w tv1t t1s u1z| s1| tv1v t1u
sxszs| u1|s t1s tx1w t1t v1vw t1v tt1x t1v
3 讨论
为了保证各指标成分都具有适宜的灵敏度 o研究
了栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱 !甘草酸铵在紫外区吸
收特性 o栀子苷在 uvs ±°处有最大吸收 o黄芩苷在波
长 uzyovuw ±°处有最大吸收 o盐酸小檗碱的最大吸
收波长为 uuxouyxovwv ±°o甘草酸铵在 uxs ±°有最
大吸收 ∀各指标成分在 uvs ±°处均有较强吸收 ∀方
中栀子苷含量较少 o为了保证栀子苷有较高的灵敏
度 o文中选用 uvs ±°作为检测波长 o以峰高为基线噪
音 v倍计 o计算栀子苷 !黄芩苷 !盐酸小檗碱和甘草酸
的最低检测质量浓度分别为 s1vos1uou1x ≅ tspu os1t
Λª# °pt o满足分析方法的要求 ∀
作者建立了清胃黄连片中多种指标成分成含量
的含量测定方法 o以表征清胃黄连片的质量 o在一定
程度上能反映所用药材的质量 o同时多组分分离测
定还可以反映传统中药的配伍状况 o方法简单 o结果
准确可靠 o适于清胃黄连片的含量测定及质量控制 ∀
≈参考文献  
≈t  李 峥 o罗 兰 o王建春 q• °2‹°≤法测定清胃黄连丸中小檗
碱 !掌叶防己碱的含量 ≈ q海南医学 ot||{kwl}u|vq
Φαστ ανδ σιµ υλτανεουσ δετερµ ινατιον οφ φουρ ινδεξ χοµ πονεντσ ιν Θινγωει
Ηυανγλιαν ταβλετσ βψ Ρ Π2 ΗΠΛΧ
Œ≠¤±2µ²±ªo Œ„‘Š ≠ o¨ ‹ „’ ƒ∏o ⁄Œ‘Š ÷¬¤±ª2¼∏
(Σχηοολοφ Πηαρµ αχψ, Ηεβει ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Σηιϕιαζηυανγ sxsstz, Χηινα)
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤µ¨ Š ±¨³¬²¶¬§¨ o …¤¬¦¤¯¬±o … µ¨¥¨ µ¬±¨‹¼§µ²¦«¯²µ¬§¨ ¤±§„°°²±¬∏° Š ¼¯¨ ¼µµ«¬½¬±¤·¨o ¬± ±¬±ªº ¬¨‹∏¤±ª¯¬¤± ·¤¥¯ ·¨¶q Μετηοδ : „ ¶¨³2
¤µ¤·¬²± º¤¶º¨¯¯¤¦«¬¨√ §¨¥¼ ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²± ²± ¤‹¼³¨ µ¶¬¯≤t{ kwqy °° ≅ uxs °°o x Λ°l ¦²¯∏°± º¬·«·«¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨¶²©¤¦¨·²±2
·µ¬¯¨ 2sqx h ·µ¬¨·«¼¯ ¤°¬±¨º¤·¨µ2¶²¯∏·¬²± k³‹ vqsl ¤·¤©¯²º µ¤·¨ ²©tqs °# °¬±pt o §¨ ·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«²©uvs ±°o ¤±§µ²²° ·¨°2
³¨ µ¤·∏µ¨q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± ¦∏µ√¨º µ¨¨ ¬¯± ¤¨µ¬± ·«¨ µ¤±ª¨ ¶²©wq{u2zzquo xq{s2|uq{o tqyv2uyqt ¤±§yqws2tsu Λª# °pt kρ€
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¬¨¶²©©²∏µ¬±§¨ ¬¦²°³²± ±¨·¶º µ¨¨ ±²·¯ ¶¨¶·«¤± |{qs h q Χονχλυσιον: ׫¨ ° ·¨«²§¬¶¦²±√ ±¨¬¨±·o µ¤³¬§¤±§¤¦¦∏µ¤·¨q Œ·¬¶¶∏¬·¤¥¯¨©²µ
·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©±¬±ªº ¬¨‹∏¤±ª¯¬¤± ·¤¥¯ ·¨¶q
[ Κεψ ωορδσ] • °2‹ °≤~ ±¬±ªº ¬¨‹∏¤±ª¯¬¤± ·¤¥¯ ·¨¶~ ª¨ ±³¬²¶¬§¨ ~ ¥¤¬¦¤¯¬±~ ¥¨ µ¥¨ µ¬±¨«¼§µ²¦«¯²µ¬§¨ ~ ¤°°²±¬∏° ª¯¼¨ ¼µµ«¬½¬±¤·¨
≈责任编辑 鲍 雷  
≈收稿日期   ussz2st2ty
≈基金项目   国家自然科学基金项目 kvswystxwl
≈通讯作者   3 梁光义 oר¯}ks{xtlxyxuts|o∞2°¤¬¯}ª∏¤±ª¼¬¢ ¬¯2
¤±ªƒ ut¦±q¦²°
麻杏石甘汤麻黄碱含量影响因素的研究
梁光义 t3 o贺祝英 u o武孔云 v o靳凤云 u o李 星 u o冯 华 u
ktq贵州省中国科学院 天然产物化学重点实验室 o贵州 贵阳 xxsssu~
uq贵阳中医学院 o贵州 贵阳 xxsssu~ vq贵阳医学院 o贵州 贵阳 xxsssvl
≈摘要   目的 }考察麻杏石甘汤中不同组方配伍对麻黄碱含量的影响 ∀方法 }采用混料均匀设计对麻杏石甘
汤进行拆方研究 o对实验数据进行逐步回归分析处理 o对回归方程的各项系数进行偏相关检验 ~并进行了验证实
验 ∀结果 }回归方程 Ψ € w1vyz t|v wz n z1zxu zsz wvzΞu n t1uxx zt| zsw tΞv有意义 kρ€ s1{xy ywoΠ € s1st{ |lo通
过回归方程和偏相关检验 o麻杏石甘汤传统汤剂中麻黄碱含量的主要影响因素为苦杏仁和石膏 o其中苦杏仁的影
响为极显著 !石膏的影响为显著 ∀结论 }麻杏石甘汤传统汤剂中的苦杏仁以及石膏共同作用 o影响麻杏石甘汤传统
汤剂中麻黄碱的含量 o其量效关系为正相关 ∀
≈关键词   麻杏石甘汤 ~混料均匀设计 ~盐酸麻黄碱
≈中图分类号   • u{wqt ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszluw2uyss2sw
由于传统中药复方汤剂 k传统汤剂 l在使用上
的不便等原因 o近年来颗粒汤剂开始用于临床 ∀传
统汤剂是按处方配药 o加水共煎而得 ~颗粒汤剂是将
批量的单味中药饮片分别加水煎煮 !浓缩 !干燥 !分
装 o使用时按处方混合 o开水冲服即得 ∀传统汤剂与
颗粒汤剂的药效学 !临床疗效方面的比较已经有了
一些报道 ≈t  o但有关其化学组成方面的报道较少 ∀
麻杏石甘汤一方出自东汉名医张仲景 5伤寒论 6一
书 o由麻黄 y ªo苦杏仁 | ªo甘草 y ªo石膏 uw ª组成 o
该方具有辛凉宣肺 o清热平喘之功效 o主治表邪未
解 o肺热咳喘证 ∀现代临床经验证明 o石膏的用量的
大小在麻杏石甘汤治疗咳喘症的疗效上起到了关键
的作用 o重用石膏能够使该方的疗效大大提高 o使咳
喘诸症更快得到缓解 ≈u  ∀在研究麻杏石甘汤传统
汤剂与颗粒汤剂中麻黄碱含量时 o作者发现其麻黄
碱的含量有着极显著性的差异 o麻杏石甘汤传统汤
剂中麻黄碱质量分数为 v1z| °ª# ªpt o麻杏石甘汤
颗粒汤剂中麻黄碱为 v1u| °ª# ªpt ∀这一结果说
明传统汤剂的混煎与颗粒汤剂的单煎的一些有效成
分含量有着较大区别 ∀为了研究麻杏石甘汤中每味
药材对麻黄碱溶出的影响因素 o作者采用了混料均
匀设计法 o对麻杏石甘汤进行了拆方研究 o对各提取
液的麻黄碱用 ‹°≤进行了含量测定 o并对测定结
果进行了分析 ∀
1 仪器与试药
#ssyu#
第 vu卷第 uw期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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