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Determination of main flavone glycosides in Flos Chrysanthemi and observation of factors influenced contents

杭白菊中主要黄酮苷的测定及影响因素考察



全 文 :Ρ ιβοσοµ αλ∆ΝΑ ΙΤΣ σεθυενχε αναλψσεσ οφΠινελλια τερνατα φροµ διφφερεντ
γεογραπηιχαλοριγιν ιν Χηινα
‹„‘Š ∏±2¼¬t o Š˜’ ±¬¤²2¶«¨ ±ªt o • ˜ ¬2º ¬¨t o ‹ „‘Š ≠ ∏¨ 2¼∏u
(t1 Ινστιτυτε οφ Χηινεσε ΜεδιχιναλΜατεριαλσ, Νανϕινγ Αγριχυλτυρε Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utss|x, Χηινα;
u1ϑιανγσυ Προϖινχε ανδ Χηινεσε Αχαδεµ ψ οφ Σχιενχε, Νανϕινγ utsstw, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ Œ×≥ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ √¤µ¬¤·¬²± ²©Πινελλια τερνατα ©µ²° §¬©©¨µ¨±·³²³∏¯¤·¬²± ¬± ≤«¬±¤o¤±§¬·¦²µµ¨ ¤¯2
·¬²± ·² ª¨ ²ªµ¤³«¬¦¤¯ §¬¶·µ¬¥∏·¬²± ¤±§°²µ³«¤²©·«¨ ³¯¤±·1 Μετηοδ : ׫¨ µ⁄‘„ Œ×≥ µ¨ª¬²±¶²©√¤µ¬²∏¶Π1 τερνατα º µ¨¨ ¤°³¯¬©¬¨§¤±§¶¨2
∏´¨ ±¦¨§1 „±§·«¨ ¼ º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼ ° ¤¨±¶²©·«¨ ¶²©·º¤µ¨ ²©≤˜≥ו „¤±§ ∞Š„1 Ρ εσυλτ: ≤²°³¯ ·¨¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ²©Œ×≥ ¤±§x1{≥
µ⁄‘„ ²©ty §¬©©¨µ¨±·Π1 τερνατα ³²³∏¯¤·¬²± º µ¨¨ ²¥·¤¬± §¨1 ׫¨ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶²©Œ×≥tox1{≥ ¤±§Œ×≥u ¤µ¨ uzyotyu ¤±§uwy ¥³oµ¨¶³¨ ¦·¬√ 2¨
¼¯1 Œ×≥t º¤¶°²µ¨ ¦²±¶¨µ√¤·¬√¨·«¤± Œ×≥u1 °«¼¯ ²ª¨ ± ·¨¬¦·µ¨¨¥¤¶¨§²± Œ×≥t ¤±§Œ×≥u ¶¨ ∏´¨ ±¦¨¶§¤·¤º¤¶¦²±§∏¦·¨§¥¼ ‘¨ ¬ª«¥²µ2­²¬±2
¬±ª° ·¨«²§1 Χονχλυσιον: • ¬¥²¶²°¤¯ ⁄‘„ Œ×≥ ¶¨ ∏´¨ ±¦¨ ¤±¤¯¼¶¨¶¦¤± ¥¨ ¤³³¯¬¨§·²·«¨ µ¨¶²∏µ¦¨ µ¨¶¨¤µ¦«²©Π1 τερνατα1
[ Κεψ ωορδσ] Πινελλια τερνατα~ µ¬¥²¶²°¤¯ ⁄‘„~ Œ×≥~ ¤∏·«¨ ±·¬¦¤·¬²±
≈责任编辑 张宁宁  
≈收稿日期   ussw2s{2sx
≈基金项目   浙江省教育厅资助项目 kussvswywl~浙江省科技
厅重点资助项目 kŠussusxz{l
≈通讯作者   蒋惠娣 o ר¯} ksxztl{{us{ws{o ∞2°¤¬¯} «§­¬¤±ª
ƒ ½­∏q §¨∏q¦±
杭白菊中主要黄酮苷的测定及影响因素考察
胡碧波 t o吴祖帅 t o蔡 君 u o蒋惠娣 t3
kt1浙江大学 药学院 药物分析与代谢研究室 o浙江 杭州 vtssx{~
u1浙江现代中药与天然药物研究院 o浙江 杭州 vtssu|l
≈摘要   目的 }测定杭白菊中木犀草素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷和芹菜素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷含量 o并考察影响其含
量的因素 ∀方法 }采用反相高效液相色谱法 o以 ²µ¥¤¬≥… ≤t{为分离柱 o乙腈 2ts °°²¯# pt磷酸盐缓冲液 k³‹ ul为
流动相进行梯度洗脱 o检测波长 vv{ ±°∀结果 }不同种植基地 !不同采摘时间 !不同炮制工艺及不同等级的杭白菊
中木犀草素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷和芹菜素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷的含量有一定的变化 ~不同年度的杭白菊中 u成分含量
差别不大 ~不同产地及不同品种菊花 u成分含量差异较大 ∀结论 }杭白菊 u成分的含量与种植基地 !炮制工艺等有
一定的关系 o产地 !品种对其含量的影响更大 ∀
≈关键词   杭白菊 ~高效液相色谱法 ~木犀草素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷 ~芹菜素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷 ~含量
≈中图分类号   • u{w1t ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylut2tzzu2sw
杭白菊产于浙江桐乡 o与贡菊 !亳菊 !滁菊被
5中国药典 6ussx年版收载于菊花 ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬
品种项下 ≈t  ∀杭白菊黄酮类成分中主要含有木犀
草素及芹菜素的葡萄糖苷 ≈uov  o笔者曾对杭白菊中
木犀草素及木犀草素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷 k以下简称
木犀草素 2z2葡萄糖苷 l进行了测定 o发现木犀草素
含量远低于其苷的含量 ≈w  ∀研究表明 o木犀草素 2z2
葡萄糖苷 o芹菜素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷 k以下简称芹
菜素 2z2葡萄糖苷 l口服后在肠道菌群作用下可水解
#uzzt#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto Œ¶¶∏¨ ut
‘²√ °¨¥¨ µo ussy
为苷元被吸收而发挥生物效应 ≈x  o因此对杭白菊中
两者含量进行测定 o并考察不同种植基地 !不同采摘
时间 !不同炮制工艺及不同等级的杭白菊中两者含
量变化 o有助于杭白菊的质量控制和合理开发利用 ∀
1 仪器和试剂
„ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪 o⁄„⁄检测器 o
≤«¨ °¶·¤·¬²± ¶¼¶·¨°工作站 ∀
杭白菊采摘于浙江省桐乡市各种植基地 o其他
菊花均购于当地药材公司 ∀本研究用杭白菊除特别
注明外 o均为传统蒸制的小白菊 ∀试验药材经本院
徐娟华副教授鉴定 ∀木犀草素 2z2葡萄糖苷为本院
徐娟华提供 o芹菜素 2z2葡萄糖苷为自制 o纯度均大
于 |{h k‹°≤归一化 lo乙腈 !甲醇为色谱纯 o超纯
水 o其余试剂均为国产分析纯 ∀
2 方法
211 色谱条件 „ª¯¬¨±·²µ¥¤¬ ≥… ≤t{色谱柱 kw1y
°° ≅ uxs °°o x Λ°l~流速 t1s °# °¬±pt ~检测波
长 vv{ ±°~柱温 ux ε ~进样量 us ˏ~流动相 „}
|sh乙腈 o…}s1st °²¯ # pt磷酸缓冲液 k³‹ u1slo
梯度洗脱程序见表 to理论塔板数按木犀草素 2z2葡
萄糖苷计 o不低于 us ssso按芹菜素 2z2葡萄糖苷不
低于 tx ssso结果见图 t∀
表 t 流动相梯度条件
τr°¬± „ rh …rh
s tv {z
tx t| {t
vs us {s
ws uu z{
图 t 混合对照品 k„l及杭白菊样品 k…l色谱图
t1木犀草素 2z 2葡萄糖苷 ~u1芹菜素 2z 2葡萄糖苷
212 样品溶液的制备 精密称取菊花粗粉 t ªo加
zxh乙醇 xs °o回流提取 w1x «o过滤 o残渣用 zxh
乙醇洗涤 o合并滤液 o以 zxh乙醇定容至 tss °o摇
匀 o经 s1wx Λ°滤膜过滤 o取续滤液即为供试品溶
液 ∀
213 线性范围考察 精密称取一定量经减压干燥
的木犀草素 2z2葡萄糖苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷对照
品适量 o用甲醇制成含木犀草素 2z2葡萄糖苷 {y1s
Λª# °pt o芹菜素 2z2葡萄糖苷 twz Λª# °pt的贮
备液 o将此溶液用初始流动相稀释成 y个不同质量
浓度的对照品溶液 o进样 o以峰面积为纵坐标 o对照
品质量浓度 kΛª# °pt l为横坐标 o进行线性回归 o
得木犀草素 2z2葡萄糖苷的回归方程 Ψ € w{1s|wΞ p
t1wu{ y, ρ€ s1||| |o线性范围 u1y| ∗ {y1s Λª#
°pt ~芹菜素 2z2葡萄糖苷的回归方程 Ψ €uz1sz{Ξ n
xw1{w{, ρ € s1||| {o线性范围 w1x| ∗ twz Λª#
°pt ∀
214 精密度试验 取同一质量浓度对照品溶液 o重
复进样 x次 o测得峰面积 o计算得木犀草素 2z2葡萄
糖苷峰面积的 • ≥⁄ t1sh o芹菜素 2z2葡萄糖苷峰面
积 • ≥⁄ s1wvh ∀
215 稳定性试验 取同一样品溶液 o分别于 soto
uovoxozouw «进样 o测得峰面积 o计算木犀草素 2z2
葡萄糖苷峰面积的 • ≥⁄ s1xuh o芹菜素 2z2葡萄糖苷
峰面积的 • ≥⁄ t1yh o表明样品溶液在 uw «内基本
稳定 ∀
216 重复性试验 称取同一批杭白菊样品 k传统
蒸制 su2ts2uzl粉末 x份 o按上述方法制备样品并进
行含量测定 o测得木犀草素 2z2葡萄糖苷含量的 • ≥⁄
t1uh o芹菜素 2z2葡萄糖苷含量的 • ≥⁄ t1xh ∀
217 加样回收率试验 精密称取已测知含量的杭
白菊样品 k传统蒸制 su2ts2uzl|份 o每 v份 t组 o按
高 !中 !低 v个水平分别精密加入木犀草素 2z2葡萄
糖苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷对照品溶液 o吹干 o然后
按样品溶液制备方法制备 o测定 o结果见表 u∀
218 样品测定 将不同采摘时间 !不同产地 !不同
炮制工艺 !不同等级的杭白菊及不同种类的菊花样
品 o按 212项制备样品溶液 o按 211色谱条件进样 o
测得峰面积 o按外标二点法计算含量 ∀
3 结果
311 采摘时间及炮制工艺对杭白菊中 u个成分含
量的影响 表 v是同一种植基地 k浙江桐乡同福 l
不同采摘时间及不同炮制工艺杭白菊中木犀草素
#vzzt#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto Œ¶¶∏¨ ut
‘²√ °¨¥¨ µo ussy
表 u 杭白菊中木犀草素 2z2葡萄糖苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷
的加样回收率 kν € vl
化合物
样品中
含量 rΛª
加入量
r˪
测得量
r˪
回收率
rh
平均值
rh
• ≥⁄
rh
„ v szs u x{s x xu| |xqv |zqv uqt
v szs v sts y sx| ||qv
v szs v z|{ y zy{ |zqw
… z uxw x z{t tu {tx |yqu |yqx sqyv
z uxw z usy tw ux{ |zqu
z uxw { yzu tx x|u |yqt
注 }„q木犀草素 2z2葡萄糖苷 ~…q芹菜素 2z2葡萄糖苷
2z2葡萄糖苷及芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量 ∀从表 v
可知 o传统蒸制的杭白菊采摘后期两者含量有所降
低 o而微波炮制的杭白菊在整个采摘期内两者含量
无明显变化 ∀
表 v 不同采摘日期及不同炮制工艺杭白菊中
木犀草素 2z2葡萄糖苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量 kν € vl
炮制工艺 采摘日期
木犀草素 2z2
葡萄糖苷 rh
芹菜素 2z2
葡萄糖苷 rh
传统蒸制 su2ts2uz sqxuz tquw
su2ts2vs sqxvy tqt|
su2tt2st sqxt{ tqts
su2tt2sz sqwyv sqzvs
su2tt2tv sqxty sq{tz
微波加工 su2ts2uz sqxyy tqsv
su2ts2vs sqx{| tqsy
su2tt2st sqxxy tqsv
su2tt2sz sqxys tqst
su2tt2tv sqxx| tqss
312 不同年度杭白菊中 u个成分含量 表 w是同
一种植基地 k浙江桐乡同福 l不同年度采摘的杭白
菊中木犀草素 2z2葡萄糖苷及芹菜素 2z2葡萄糖苷的
含量 ∀其结果表明 o不同年份的杭白菊样品中两者
的含量差别不大 ∀
表 w 不同年度杭白菊中木犀草素 2z 2葡萄糖
苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量
年度 级别
木犀草素 2z2
葡萄糖苷 rh
芹菜素 2z2
葡萄糖苷 rh
usss 甲 sqxt{ sq{|t
usst 甲 sqxsy tqut
ussu 甲 sqxyy tqsv
ussv 甲 sqw|{ tqsy
313 不同种植基地及不同等级杭白菊中两成分的
含量 表 x结果表明 o相同等级 o不同种植基地的杭
白菊中两者含量有较大的差异 ∀炉头和梧桐种植基
地的杭白菊 o不同等级中也有一定的差异 o而石门基
地的杭白菊中 o两者含量变化不大 ∀
表 x 不同种植基地 !不同等级蒸制杭白菊中
木犀草素 2z2葡萄糖苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量
产地 等级
木犀草素 2z2
葡萄糖苷 rh
芹菜素 2z2
葡萄糖苷 rh
同福 甲 sqxyy tqsv
灵安 甲 sqwz{ sq{xx
炉头 甲 sqw|w tqss
乙 sqwzt sqz|u
石门 甲 sqws| sqzyy
乙 sqwsz sqzyy
丙 sqwsu sqzv|
梧桐 甲 sqyxv tqvw
乙 sqxyt tqtw
丙 sqxtw tqsw
注 }表中样品 ussu年采集
314 不同产地及不同品种菊花中 u个成分的含量
表 y结果表明 o不同产地菊花中二者的含量有较
大的差别 o以浙江桐乡产杭白菊中两者含量最高 ∀
河南的怀菊 !四川的川菊及江苏的苏白菊二者的含
量较低 o野菊花和金菊花中 u个成分的含量也很低 ∀
此外 o即便是来自同一杭白菊种植基地的小白菊和
大白菊 o其含量也有较大的差别 o小白菊中两者含量
明显高于大白菊 ∀
表 y 不同品种菊花中木犀草素 2z2葡萄糖苷
和芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量
产地 品种
木犀草素 2z2
葡萄糖苷 rh
芹菜素 2z2
葡萄糖苷 rh
浙江桐乡同福 杭白菊小白菊 sqxyy tqsv
浙江桐乡同福 杭白菊大白菊 sqwu| sq{u|
河南 怀菊 sqtxz squzz
安徽 贡菊 sqw|u squyy
四川 川菊 sqv{y squwv
江苏 苏白菊 squs| sqs{z t
河南 野菊花 squyv sqttt
河南 金菊花 sqtvu sqsu{ t
注 }表中样品均为 ussu年产
杭白菊中主要为小白菊 o虽然不同种植基地的
小白菊上述成分含量也有所差别 o但总体而言 o明显
小于不同产地 !不同品种间的差别 ∀
4 讨论
411 因为木犀草素 2z2葡萄糖苷 !芹菜素 2z2葡萄糖
苷均为黄酮苷类 o因此选择了不同体积分数乙醇 !甲
醇为提取溶剂 o提取方法考察了热回流 !冷浸 !超声
提取 o发现冷浸法提取效率最低 ozxh乙醇回流提取
较完全 o因此本实验采用了 zxh乙醇回流提取 ∀
#wzzt#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto Œ¶¶∏¨ ut
‘²√ °¨¥¨ µo ussy
412 采用 ⁄„⁄检测器 o对色谱峰进行分析 o结果显
示芹菜素 2z2葡萄糖苷在 vv{ ±°处有最大吸收波
长 o同时木犀草素 2z2葡萄糖苷有较大吸收 o因此选
择 vv{ ±°为测定波长 ∀
413 研究结果表明 o各地菊花中木犀草素 2z2葡萄
糖苷和芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量差别很大 o其中杭
白菊中二者的含量要明显高于其他产地的菊花 o尤
其是芹菜素 2z2葡萄糖苷的含量 o可以作为杭白菊区
别与其他产地菊花的一个重要依据 ∀
414 蒸制杭白菊中木犀草素 2z2葡萄糖苷和芹菜素 2
z2葡萄糖苷的含量在不同采摘时间 !不同等级中有
一定程度的变动 o总体趋势是 o采摘后期或等级较次
的杭白菊中两者含量较低 o但在微波加工的杭白菊
中两者的含量变化甚微 o这可能是因为采摘后期 o阴
雨天较多 o影响了杭白菊蒸制后的干燥 o而微波炮制
工艺不受天气的影响 ∀传统的等级分类也是根据杭
白菊的外观 o而其外观受炮制条件的影响很大 ∀由
此推测 o炮制条件可能是影响杭白菊 u个成分差别
的主要因素 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ q一部 q ussx}ut{q
≈u  胡立宏 o陈仲良 q杭白菊的化学成分研究 }正戊基果糖甙的结
构测定 ≈ q植物学报 ot||zo v|kul}t{tq
≈v  刘金旗 o吴德林 o王 兰 q菊花中木犀草素 2z2Ο2Β2∆2葡萄糖苷
的含量测定 ≈ q中成药 ousstouvktl}xuq
≈w  胡碧波 o蒋惠娣 o杨 俊 q ‹°≤法测定不同采收期杭白菊中
木犀草素及其苷的含量 ≈ q浙江大学学报 ousswou|ktl}u|q
≈x  李丽萍 o蒋惠娣 q肠道菌群对菊花提取物的代谢作用 ≈ q中
草药 oussyovzkzl}{ztq
∆ ετερµ ινατιον οφ µ αιν φλαϖονε γλψχοσιδεσ ιν ΦλοσΧηρψσαντηεµ ι ανδ
οβσερϖατιον οφ φαχτορσ ινφλυενχεδ χοντεντσ
‹˜ …¬2¥²t o • ˜ ∏2¶«∏¤¬t o ≤„Œ∏±u o Œ„‘Š ‹∏¬2§¬t
(t1∆επαρτµ εντ οφ Πηαρµ αχευτιχαλΑναλψσισανδ ∆ρυγ Μεταβολισµ , Χολλεγε οφ Πηαρµ αχευτιχαλΣχιενχεσ,
Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssx{, Χηινα;
u1 Ινστιτυτε οφ Χηινεσε ΤραδιτιοναλΜεδιχινε ανδ Νατυρε ∆ρυγ , Ηανγζηου vtssu|, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ ·¨µ°¬±¨¤±§¦²°³¤µ¨ ·«¨ ¦²±·¨±·²© ∏¯·¨²¯¬±2z2Ο2Β2∆2ª¯∏¦²¶¬§¨ ¤±§¤³¬ª¨ ±¬±2z2Ο2Β2∆2ª¯∏¦²¶¬§¨ ¬±
ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬©µ²° §¬©©¨µ¨±·¦²¯¯¨ ¦·¬²± ·¬° o¨ ¶²∏µ¦¨¶o ªµ¤§¨ ¶¤±§ ³µ²¦¨¶¶¨¶1 Μετηοδ : ׫¨ ¦²±·¨±·¶º µ¨¨ §¨ ·¨µ°¬± §¨ ¥¼ • °2
‹ °≤1 ²µ¥¤¬≥… ≤t{ ¦²¯∏°± kw1y °° ≅ uxs °°o x Λ°l º¤¶∏¶¨§¤¶¤±¤¯¼¶¬¶¦²¯∏°±o ·«¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ º¤¶¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2³‹ u1s
³«²¶³«¤·¨ ¥∏©©¨µ¶²¯∏·¬²± º¬·«ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²±o ·«¨ §¨ ·¨¦·²µº¤¶¶¨·¤·vv{ ±°1 Ρ εσυλτ: ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©·º² ¦²°³²± ±¨·¶¦«¤±ª¨ § ¤·
¶²°¨§¨ ªµ¨¨¬± ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬©µ²° §¬©©¨µ¨±·¦²¯¯¨ ¦·¬²± ·¬° o¨ §¬©©¨µ¨±·³¯¤±·¶¬·¨¶²µº¬·«§¬©©¨µ¨±·ªµ¤§¨ ¶o º«¬¯¨ ·«¨ ¦²±·¨±·¶√¤µ¬¨§
²¥√¬²∏¶¯¼ ¤°²±ªƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬©µ²° §¬©©¨µ¨±·¶²∏µ¦¨ ¤±§§¬©©¨µ¨±·¶²µ·¶1 ‘²²¥√¬²∏¶§¬©©¨µ¨±¦¨ º¤¶©²∏±§¬± ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬©µ²°
§¬©©¨µ¨±·¼¨ ¤µ1 Χονχλυσιον: ׫¨ ¦²±·¨±·¶²©·º² ¦²°³²± ±¨·¶º µ¨¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨§¥¼ ³µ²¦¨¶¶o ³¯¤±¨¶¬·¨o ¶²∏µ¦¨ ¤±§¶²µ·¶o ¶¨³¨ ¦¬¤¯ ¼¯ ¥¼
¶²∏µ¦¨ ¤±§¶²µ·¶1
[ Κεψ ωορδσ] ƒ ²¯¶≤«µ¼¶¤±·«¨ °¬~ • °2‹ °≤~ ∏¯·¨²¯¬± 2z2Ο2Β2∆2ª¯∏¦²¶¬§¨ ~ ¤³¬ª¨ ±¬± 2z2Ο2Β2∆2ª¯∏¦²¶¬§¨ ~ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²±
≈责任编辑 张宁宁  
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