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Study of the Methods of Determining the Isoflavones in Herbs of Trifolium pratense Extractive

红车轴草提取物中异黄酮定量方法的研究



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t{| ∀t ‹2‘ • k≤⁄≤ v¯l∆}s qz{ os q{v os q{w os q|w o
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甲基l ov qw|kt‹ o° o≤ ‹2’ ‹l ov qz{kt‹ o´ oϑ€ tu qs o
y qs ‹½o≤ ‹2’ ‹l ow qxt ow qytku‹ o¥µ¶o ≤ ‹ul o上述
数据与文献≈z 一致 o说明该化合物为算盘子二
醇 ∀tv2≤‘ • 数据见表 t ∀
≈参考文献 
≈t  中国科学院中国植物志编辑委员会 q中国植物志 qyx卷 q北京 }
科学出版社 ot|{u qtz{ q
≈u  云南植物研究所 q云南植物志 q第一卷 q北京 }科学出版社 o
t|zz qwy{ q
≈v  ׬¤±³¨¬ ƒ¤± o«¬§¤ ¬±o ∏±¨ ®¤½∏ ¬∏±°¤q× º² ‘²√¨¯ ⁄¬·¨µ2
³¨ ±²¬§¶©µ²° ≤¯¨ µ²§¨ ±§µ∏° …∏±ª¨¬q ≤«¨ ° °«¤µ° …∏¯¯ot||| owz
ktul }tz|z q
≈w  董晓萍 o乔蓉霞 o郭 力 o等 q臭牡丹全草化学成分的研究k一l q
天然产物研究与开发 ousss ottkxl }{ q
≈x  杨 辉 o王 佳 o梅双喜 o等 q臭牡丹中一个新的过氧化物 q云南
植物研究 ousss ouukul }uvw q
≈y  阮金兰 o傅长汉 q臭牡丹茎的化学成分研究 q中草药 ot|{z ou{
kzl }v|x q
≈z  • ¤¶«°¬o≥ o⁄¬±¨ ¶« ŽoŽ∏¯¶«µ¨¶«·«¤q×µ¬·¨µ³¨ ±²¬§¶©µ²° Γλοχηιδ2
ιον ηεψνεανυ µ q°«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼ ot|{{ ouzkttl }vxzx q
≈{  陈文侃 o王璧瑜 o卢得育 o等 q中药白头翁的皂素 q化学学报 o
t|{v owt }zv|
≈|  于德泉 o杨岐山 q核磁共振波谱分析k第七分册l q第二版 q北京 }
化学工业出版社 ot||| q{sx q
≈ts  ¬± ≠∏±  ‹ ’ ˜ o• ∏¬≤ ˜Œq „ ‘¨ º ∏³¤±¨ ©µ²° ·«¨ • ¶¨¬± ²©
Βοσωελλια χαρτεριι q ≤«¬± ≤«¨ ° ¨··oussu otvktl }yx
Στυδιεσ ον Χηεµιχαλ Χονστιτυεντσιν οφ Χλεροδενδρυµ βυνγει
Š„’ ¬2°¬±ªt o • ∞Œ ÷¬¤²2° ¬¨u o ‹∞ ≠¤±ª2 ¬´±ªt
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε:ײ¶·∏§¼·«¨ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶©µ²° Χλεροδενδρυ µ βυνγει q Μετηοδ : × «¨ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§¤±§³∏2
µ¬©¬¨§ º¬·«¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦° ·¨«²§¶o¤±§¬§¨ ±·¬©¬¨§¥¼ ‘ • o  ≥ ¤±§Œ• qΡεσυλτ : ƒ¬√¨¦²°³²∏±§¶ º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§oΒ2¶¬·²¶·¨µ²¯ktl o
·¤µ¤¬¨ µ²¯kul oª¯²¦«¬§²±¨ kvl oª¯²¦«¬§²±²¯kwl oª¯²¦«¬§¬²¯kxl q Χονχλυσιον : ≤²°³²∏±§¶kvl okwl ¤±§kxl º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©²µ·«¨ ©¬µ¶·
·¬°¨©µ²° Χ. βυνγει q
[ Κεψ ωορδσ] Χλεροδερδρυ µ βυνγει ~ª¯²¦«¬§²±¨ ~ª¯²¦«¬§²±²¯ ~ª¯²¦«¬§¬²¯
≈责任编辑 李 禾 
红车轴草提取物中异黄酮定量方法的研究
边清泉t o杨振萍u o马美仲v o李 松t
kt q绵阳师范学院 o四川 绵阳 yutsss ~u q西南科技大学 o四川 绵阳 yutsss ~
v q四川大学 o四川 成都 ytssssl
≈摘要  目的 }对红车轴草提取物中异黄酮含量测定方法进行研究 ∀方法 }反向高效液相色谱法进行含量测
定 o≤t{反相柱 o ’¨ ‹2≤ ‹v≤ ‘2s qt h ‹v°’w为流动相 o检测波长 uys ±° ∀结果 }红车轴草提取物水解后的 w种苷元
组分获良好分离 o进样量 s qsuw ∗ s qvvy Λª与峰面积均成线性关系 o异黄酮总含量测定结果重现性 • ≥⁄ € t qt h ∀
结论 }为红车轴草提取物及制品提供一种简便 !可靠 !有效的质控方法 ∀
≈收稿日期  ussv2su2us
≈基金项目  四川教育厅重点自然科学研究项目kussu„tt{l
≈通讯作者  边清泉 ר¯ }ks{tyluusssyw ƒ¤¬}ks{tyluut{ts{ ~∞2°¤¬¯}…¬¤°2xx ƒ ¶²«∏q¦²°
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第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨°¥¨µoussv
≈关键词  红车轴草 ~高效液相色谱法 ~异黄酮 ~含量测定
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltt2tsww2sw
红车轴草 Τριφολιυ µ πρατενσε q为豆科多年生
草本植物 o异名红三叶 !红菽草 !红荷兰翘摇 !金雀
菜 !三叶草等 ∀全草含有染料木素kª¨ ±¬¶·¨¬±l !大豆
黄素k§¤¬§½¨ ¬±l !鹰嘴豆芽素 „k¥¬²¦«¤±¬± „l和刺芒
柄花素k©²µ°²±²±¨ ·¬±l及相应的苷等 {种主要异黄
酮成分≈t ou  ∀文献≈t2w 报道这些成分具有抗肿瘤 !
胃溃疡 !胃癌 !乳腺癌 !肠癌和骨质疏松症等作用 ∀
随着对红车轴草研发的深入 o其主要成分所具有的
植物雌激素样作用和抗癌作用 o成为人们关注的重
点 ∀目前关于红车轴草提取物及其制品中各有效成
分测定方法的报道很少 o为促进红车轴草的开发和
有效成分的充分利用 o加强提取分离和产品开发的
质控 o笔者利用高效液相色谱法对其含量测定方法
进行了研究 ∀
1 仪器与试验材料
岛津 ≤2y„ 高效液相色谱仪系统 ∀包括 ≤2
y„输液泵 o≥°⁄2  ts„ 检测器 o≤„≥≥ 2∂ ° x qs色
谱工作站 o≤ × ’2y„ 色谱恒温箱 ~≥2|v型自动双重
纯水蒸馏器 ∀ Ž±2uxs⁄∞型医用数控超声波清洗
器 ∀溶剂过滤器及实验室常规仪器 ∀
大豆黄素 !染料木素 !刺芒柄花素 !鹰嘴豆芽素
„ 对照品 k≥¬ª°¤公司 o纯度 |{ h o|{ h o|z h o
|y h l o红车轴草提取物为本实验室分离制备 o药材
为红车轴草全株 Τριφολιυ µ πρατενσε qo经成都牧
甫天然产物研究所黄铭研究员鉴定 ∀甲醇 !乙腈为
色谱纯k上海陆都化学试剂厂l o其他试剂为 „ • 级 ∀
实验用水为 u次重蒸馏水 ∀
2 方法与结果
2 q1 色谱条件 ≥«¬°2³¤¦® ∂ °2’⁄≥ 色谱柱kw qy
°°≅ txs °° ox Λ°l ~柱温 vx ε ~流动相  ’¨ ‹2
≤ ‹v≤‘2s qt h ‹v°’w kt{ Βuu Βysl ~流速 t °#
°¬±p t ~检测波长 uys ±° ~灵敏度 s qsxs „ ˜ƒ≥ ∀
2 q2 样品的测定 精密称取红车轴草提取物样品
us quw °ªo置 tss °量瓶中 o用甲醇定容至刻度 o
超声振荡 us °¬±os qwx Λ°滤膜过滤 o取续滤液和对
照品溶液各 ts ˏo按 2 q1 项下分别进样 o得样品水
解前色谱图k见图 t „l ∀
另精密称取上述同批次样品 uu quy °ªo加 t qs
°²¯#pt盐酸甲醇溶液 {s °o于 {x ε 水浴中回流
水解 t qx «o冷却后用甲醇定容至 tss °o摇匀后用
s qwx Λ° 滤膜过滤 o取续滤液和对照品溶液各 ts
ˏo按上述相同条件分别进样 o得样品水解后谱图
k见图 t …l ∀
图 t 样品水解前后 ‹°≤ 色谱图
t q大豆黄苷 u q染料木苷 v q刺芒柄花苷
w q大豆黄素 x q黄檀苷 y q染料木素
z q刺芒柄花素 { q鹰嘴豆芽素
根据样品水解前 w种苷元的峰面积 o按外标法
计算样品中对应各苷元的含量 ∀同法可求得水解后
w种苷元的含量 o水解前后各苷元含量的差值即为
苷水解生成的苷元量 ∀通过换算因子k染料木素 !大
豆黄素 !刺芒柄花素 !鹰嘴豆芽素与其相应苷的换算
因子分别为 t qys ot qyw ot qys ot qxzl计算得到样品
中 w种苷的含量 ∀红车轴草提取物中异黄酮含量测
定结果见表 t ∀
表 t 异黄酮含量测定结果
组分名称 含量r h 组分名称 含量r h
大豆黄苷 s qzy 黄檀苷 t qu
染料木苷 s qzu 染料木素 u q{
刺芒柄花苷 x q| 刺芒柄花素 tw q|
大豆黄素 v qy 鹰嘴豆芽素 v qs
合 计 vv qs
3 方法学考察
3 q1 对照品溶液制备 精密称取适量染料木素 !大
豆黄素 !刺芒柄花素 !鹰嘴豆芽素对照品 o加甲醇溶
解 o制成每亳升 s qtu os qty os quw os qvy °ª的对照品
混标贮备液 ∀精密吸取 t °对照品混标溶液 o置
ts °量瓶中 o甲醇定容至刻度 o即为对照品溶液 ∀
3 q2 线性考察 将对照品溶液分别在 2 q1 项下进
样 2 ow oy o{ ots otu otw ˏo测定峰面积 o以峰面积为
#xwst#
第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
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纵坐标 o对照品进样量kΛªl为横坐标绘制标准曲线 o 结果见表 u ∀
表 u w种组分工作曲线
名称 线性范围rΛª 回归方程 ρ
大豆黄素 s qsvu ∗ s quuw Ψ € { qvz ≅ tsy Ξ n u |s{ s q||| v
染料木素 s qsuw ∗ s qty{ Ψ € w qtw ≅ tsy Ξ n u|x s q||| w
刺芒柄花素 s qsw{ ∗ s qvvy Ψ € x q|w ≅ tsy Ξ n tw sxu s q||| |
鹰嘴豆芽素 s qsvu ∗ s quuw Ψ € y qyy ≅ tsy Ξ n u tut s q||| {
3 q3 精密度试验 对照品溶液在 2 q1 项下重复进
样 x次 o染料木素 !大豆黄素 !鹰嘴豆芽素 !刺芒柄花
素峰面积的 • ≥⁄分别为s q{ h os qvy h os qtu h o
t q{ h ∀
3 q4 稳定性试验 将样品溶液在室温下贮存 o分别
于 s ou ow o{ oty ouw «测定 o结果样品溶液在 uw «内
基本稳定 ow组分的 • ≥⁄为t qw h os qz h os q| h o
t qy h ∀
3 q5 重复性试验 同一批样品分别称取 x份 o测定
含量为 vu q{ h ovu qu h ovv qt h ovv qs h ovv qt h o
• ≥⁄为 t qt h ∀
3 q6 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品 o
分别加入一定量的对照品 o按 2 q2 项下方法测定 o计
算回收率 ∀染料木素 !大豆黄素 !鹰嘴豆芽素 !刺芒
柄花素的平均回收率分别为tst qu h o|| qz h o
|{ qy h o|| qu h ∀ • ≥⁄分别为 t qw h os q{ h os qy h o
t q{ h k ν € xl ∀
4 讨论
4 q1 色谱条件的选择 本试验以红车轴草提取物
中主要组分水解产物 w种苷元相互分离为指标 o确
定色谱条件 ∀用  ’¨ ‹2≤ ‹v≤‘2s qt h ‹v°’wkt{Βuu
Βysl可将 w种苷元与其他峰较好地分离 o且流动相
配比简单 ∀试验中考察了改变流动相 v种成分比例
的情况 o结果表明增加  ’¨ ‹ 比例保留时间减少 o但
分离度变小 ~增加 ≤ ‹v≤‘比例 o分离度变大 o峰形变
差 ∀s qt h ‹v°’w的加入可有效改变色谱峰的分离 ∀
检测波长确定 o紫外扫描图谱与文献≈w ox 报道
相同 ∀染料木素与鹰嘴豆芽素的 Κ°¤¬为 uys ±° o大
豆黄素与刺芒柄花素的 Κ°¤¬为 uxs ±° ∀为充分地考
虑到各组分的灵敏度 o选择测定波长为 uys ±° ∀
4 q2 样品预处理条件的选择 本方法样品水解完
全是提高测定结果准确度的关键 ∀影响样品水解的
条件主要有酸度 !水解温度和水解时间三因素 o通过
对三因素水平正交试验可确定样品分析时的最佳处
理条件为 }盐酸浓度 t °²¯#pt o水解温度 {x ε o水
解时间 t qx «∀该条件下处理样品 ow种苷以 z2 Ο2糖
苷形式存在的峰位消失k见图 tl ∀样品水解完全 o回
收率均大于 || qu h k• ≥⁄ [ t q{ h l o符合分析方法要
求 ∀
4 q3 红车轴草提取物的质量控制 根据文献≈t2w 
报道 o红车轴草提取物因其独特疗效和药理功能 o越
来越广泛地应用于临床 o也是一种极有前途的天然
保健食品 ∀然而其质量控制和分析方法的报道不
多 ∀本文采用酸水解样品后以 ‹°≤ 法测定有效成
分苷元含量 o再经换算为异黄酮的含量 ∀本方法解
决了直接测定时需要对照品种类多 o分离困难 o分析
时间长等缺点 o为红车轴草提取物及其制品的质量
控制提供了分析方法 ∀
≈参考文献 
≈t  江苏新医学院 q中药大辞典 q上海 }科学技术出版社 ot|zz q
tstu q
≈u  曾虹燕 o周朴华 o侯团章 q红车轴草有效成分的研究进展 q中草
药 ousst ovukul }t{| q
≈v  辽宁林业土地研究所 q东北草木植物志 q第五卷 q北京 }科学出
版社 ot|zy q
≈w  徐艳春 o魏璐雪 o周玉新 o等 q红车轴草中异黄酮的指纹图谱研
究 q中国中药杂志 oussu ouzkvl }t|y q
≈x  张 立 q • °2‹°≤ 法测定大豆提取物中大豆苷元 !染料木素 !
大豆苷 !染料木苷的含量 q中草药 ousst ovukul }tt{ q
Στυδψ οφ τηε Μετηοδσ οφ ∆ετερµινινγ τηε Ισοφλαϖονεσ
ιν Ηερβσ οφ Τριφολιυµ πρατενσε Εξτραχτιϖε
…Œ„‘ ±¬±ª2 ∏´¤±t o ≠ „‘Š «¨ ±2³¬±ªu o  „  ¬¨2½«²±ªv oŒ ≥²±ªt
kt q ¬¤±¼¤±ª × ¤¨¦«¨µ. ¶≤²¯¯¨ ª¨ o ¬¤±¼¤±ª yutsss o≥¬¦«∏¤±o≤«¬±¤~
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第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
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u q≥²∏·«º ¶¨·˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ≥¦¬¨±¦¨ ¤±§ × ¦¨«±²¯²ª¼ o ¬¤±¼¤±ª yutsss o≥¬¦«¤±o≤«¬±¤~
v q≥¬¦«∏¤± ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o≤«¨ ±§∏ytssyx o≥¬¦«¤±o≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ° ·¨«²§¶²© §¨·¨µ°¬±¬±ª·«¨ ¤°²∏±·²©Œ¶²©¯¤√²±¨ ¶¬± µ¨§¦¯²√ µ¨ ¬¨·µ¤¦·¬√¨q Μετηοδ : • °2
‹°≤ ¬¶¨°³¯²¼¨ §·² §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ Œ¶²©¯¤√²±¨ ¶o º¬·«¤ ≤t{ • ° ≤²¯∏°± o¤ °²¥¯¨³«¤¶¨ ²©  ’¨ ‹2≤ ‹v≤ ‘2s qt h ‹v°’w ¤±§¤§¨·¨¦2
·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«²©uys ±° qΡεσυλτ : „©·¨µ¥¨¬±ª º¤·¨µ2¶²¯√ §¨o·«¨ ©²∏µªµ²∏³¶²©©¯¤√²¨ ¶¨¯¨° ±¨·¶¶¤·¬¶©¤¦·²µ¬¯¼ ¶¨³¤µ¤·¨§o·«¨ ¤°²∏±·
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[ Κεψ ωορδσ] Τριφολιυ µ πρατενσε ‹°≤ ~¬¶²©¯¤√²±¨ ¶~¦²±·¨±·¶§¨·¨µ°¬±¤·¬²±
≈责任编辑 李 禾 
穿破石挥发性成分的研究
刘建华 o高玉琼 o霍 昕
k贵州省生物技术研究开发基地 o贵州 贵阳 xxsssul
≈摘要  目的 }研究穿破石中的挥发性成分 ∀方法 }利用水蒸气蒸馏法提取穿破石挥发油 o用 Š≤2  ≥进行测
定 o结合计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定 o应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量 ∀
结果 }鉴定出 yw个化学成分 o其中相对百分率含量大于 t h的有 uv个成分 o含量较高的是 Λ2芳樟醇 k Λ2¯¬±¤¯²²¯l
| q{xu h ∀结论 }yw个挥发性成分均为首次从该植物中得到 ∀
≈关键词  穿破石 ~水蒸气蒸馏 ~挥发油 ~气相色谱2质谱联用
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvltt2tswz2sv
穿破石 • ¤§¬¬ ≤∏§µ¤°¬¤¨ 为桑科柘属植物构棘
Χυδρανια χοχηινχηινενσισ ²∏µq的干燥根 ∀生于常
绿阔叶林或沟谷丛林中 ∀分布广东 !广西 !福建等
地≈t  ∀本品性味淡微苦 o凉 ∀主要用于祛风利湿 o活
血通经 ∀治风湿关节痛 o黄疸 !淋闭经 !劳伤咳血 o跌
打损伤 o疔疮痈肿 ∀本品的非挥发性成分研究已有
报道≈t ou  o而挥发性成分未见报道 ∀本文采水蒸气
蒸馏法 o从穿破石植物根茎中提取了挥发油 o并用气
相色谱2质谱2计算机联用系统对穿破石根茎挥发油
化学组成进行了定性定量研究 ∀分析鉴定了 yw个
化学成分 ∀
1 仪器 !试剂与材料
美国惠普公司k ‹¦º ¦¯··°¤¦®¤µ§l ‹°2y{|sr‹°
x|zv Š≤2  ≥气质联用仪 ~挥发油提取仪 ∀
药材 }采购于广西中药材公司 o由贵阳医学院药
学系生药教研室龙庆德讲师鉴定为桑科柘属植物构
≈收稿日期  ussu2sz2us
≈通讯作者  刘建华 ר¯ }ks{xtlxz|uuwy
棘 Χ. χοχηινχηινενσισ∀
所用试剂均为国产分析纯试剂 ∀
2 实验方法
2 q1 取穿破石药材根茎 u qx ®ªo粉碎 o进行水蒸气
蒸馏 o用乙醚萃提 v次 o合并乙醚提取液 o除尽乙醚 o
无水硫酸钠干燥 o得油状物 s qt °o收率为
s qssw h ∀
2 q2 取穿破石水蒸气蒸馏提取物适量 o用乙醚稀释
后用 Š≤2  ≥进行测定 ∀
2 q2 q1 气相色谱条件 ‹°2x  ≥ x h °«¨ ±¼¯
 ·¨«¼¯ ≥¬¯²¬¤±¨ 色谱柱 ks qux °° ≅ vs ° os qux
Λ°l o弹性石英毛细管柱 ∀柱温 xs ε o以 w ε #
°¬±p t升温至 t{s ε o再以 us ε # °¬±p t升温至 u{s
ε ∀汽化室温度uxs ε ~载气为高纯氦 ~柱前压
xu qy ®°¤~载气流量 t qs °# °¬±p t ~进样量 t ˏ
k挥发油乙醚稀释液l ~分流比 wsΒt ∀
2 q2 q2 质谱条件 离子源 ∞Œ源 ~离子源温度 uvs
ε ~四极杆温度 txs ε ~电子能量 zs ∂¨ ~发射电流
vw qy Λ„ ~倍增器电压 t v{{ ∂ ~接口温度 u{s ε ~质
#zwst#
第 u{卷第 tt期
ussv年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ oŒ¶¶∏¨ tt
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