全 文 ：ΦαχτορσΙνφλυενχινγ τηε Αχτιϖιτψ οφ Φιβρινολψτιχ Ενζψµεσ Φροµ
Εαρτηωορµ , Εισενια φοετιδα
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≈责任编辑 王康正 
四倍体白芷药材中欧前胡素的含量测定
彭 菲 o张 胜 o刘塔斯 o肖冰梅
k湖南中医学院 药学院 o湖南 长沙 wtssswl
≈摘要  目的 }测定四倍体白芷药材中欧前胡素的含量 o并与原二倍体白芷相比较 ∀方法 }采用高效液相色谱
法 o色谱柱 ‘²√¤2³¤®w qy °° ≅ uss °° ox Λ° o流动相乙腈2水 o流速 t °#°¬±p t o检测波长 uw{ ±° o柱温 ux ε ∀结
果 }四倍体白芷药材中欧前胡素含量达 s qwy h o二倍体对照药材仅为 s quux h o含量增加了 tsw qw h ∀结论 }人工四
倍体白芷主要有效成分含量成倍提高 ∀
≈关键词  四倍体白芷 ~欧前胡素 ~高效液相色谱
≈中图分类号  ≥ xyz ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsv2swuy2su
白芷为大宗药材 o在湖南省茶陵县种植已有悠
久历史 o为了解决目前生产上的诸多问题 o提高药材
产量 o改善品质 o我们从 t||y年开始对杭白芷 Αν2
γελιχα δαηυριχα kƒ¬¶¦«q¨ ¬ ‹²©©° ql…¨ ±·«q ·¨‹²²®q
©q√¤µq φορµοσανα k…²¬¶¶ql ≥«¤± ·¨≠∏¤±进行了人
工诱导多倍体的实验研究≈t ou  o经对花序进行处
≈收稿日期  usst2tt2tu
≈基金项目  湖南省科技厅资助项目k|z≥≥≠tssxl
≈通讯作者  电话 }kszvtlxx{szvw
理 o获得变异种子 o经检查染色体 o其数目已由原
二倍体的 u± € uu条增至 ww条 o经二代选育 o栽培
对比试验 o产量明显增加k文章待发表l ∀为了明确
药材有效成分的变化情况 o我们采用高效液相色谱
法对其主要药用成分 ) ) ) 欧前胡素≈v 进行了含量测
定 o并与原二倍体药材进行含量比较 ∀
1 仪器 !试剂与样品
高效液相色谱仪 美国 • ¤·¨µ¶xts 双泵 ow{y
˜ ∂ r√¬¶紫外可见检测器 o• ⁄2|x色谱工作站 ∀欧
前胡素标准品由中国药品生物制品检定所提供 o所
#yuw#
第 uz卷第 y期
ussu年 y月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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∏±¨ qoussu
有试剂均为分析纯 ∀样品为本课题组人工培育的四
倍体白芷根及原二倍体白芷根干燥粉末 ∀
色谱条件 ‘²√¤2³¤®色谱柱kw qy °° ≅ uss
°° ox Λ°l o柱温 ux ε o流动相乙腈2水 o乙腈在 us
°¬±内从 vx h 增加到 yx h k梯度洗脱l o流速 t °#
°¬±p t o检测波长 uw{ ±° ∀
2 实验方法
2 q1 线性关系考察 精密称取欧前胡素 x .u °ªo
置 xs °定量瓶中 o加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度 ∀
精密吸取此对照品溶液k浓度 s qtsw °ª# °p tlt o
u qx ox oz qx ots otu qx ˏo依次注入液相色谱仪测定
峰面积 o以进样量为横坐标 o峰面积为纵坐标 o绘制
标准曲线 o得线性回归方程 }Ψ € vyvxusuv .s{ Ξ p
|tvuw .ws , ρ€ s q|||{ o欧前胡素在 s qstsw ∗ t qyux
Λª成线性关系 ∀
2 q2 样品溶液的制备 精密称取二倍体白芷根粉
k„l和四倍体白芷根粉k…l各 u ªo分别用滤纸包好 o
置于索氏提取器中 o用 uss °石油醚分两次提取 o
共 { «o水浴温度kws ? tl ε o提取完成后及时回收
乙醚 o剩余物用乙酸乙酯溶解并定容于 xs °定容
瓶中 ∀每一样品重复 v次k„t o„u o„v o…t o…u o…vl ∀
2 q3 加样回收率试验 精密称取 uss °ª四倍体白
芷根粉 w份 o分别精密加入标准品溶液ks qtsw °ª#
°p tlv ox oz o{ °o按样品溶液制备法制备 ∀用乙
酸乙酯定容于 ts °容量瓶中 o进样 ts ˏo测定回
收率 o结果见表 t ∀
表 t 白芷中欧前胡素的加样回收率测定结果
加入量
r˪
测得总量
r˪
回收率
r h
平均回收率
r h
• ≥⁄
r h
s qvtu s qwtv tsu q{{
s qxus
s qzu{
s qyu|
s q{uv
tsv quz
tss qwt tst qzs t qzv
s q{vu s q|uy tss quw
注 }样品含量均为 s qs|u Λª
2 q4 精密度试验 精密吸取标准品溶液 ts ˏo连
续进样 x次 o比较峰面积 o得 • ≥⁄€ u qxu h k ν € xl ∀
2 q5 样品含量测定 取样品溶液各 ts ˏo分别注
入高效液相色谱仪中测定 o…号样因浓度过高 o超出
线性范围 o所以取 x ˏ进样测定k相当于稀释 t
倍l o测定结果见表 u ∀
表 u 白芷样品中欧前胡素的含量测定结果 h
样品号 含量 平均含量 • ≥⁄
„t s quuu
„u s qut| s quux v qzz
„v s quvx
…t s qwvx
…u s qwyt s qwys u qws
…v s qw{v
2 q6 稳定性试验 将样品 …提取液每隔一定时间
测定 t次 o结果在 uw «内均稳定 o• ≥⁄€ u qyy h ∀
3 小结与讨论
从样品测定结果可以看出 o人工四倍体白芷根
中欧前胡素的含量很高 o达到了 s qwys h o比原二倍
体白芷根中欧前胡素的含量ks quux h l增加了
tsw qw h o此为染色体数目加倍的结果 o达到了我们
预期的诱变目标 ∀
样品用乙醚回流提取后 o应及时回收乙醚 o用乙
酸乙酯定容 o否则乙醚提取物放置过夜后 o颜色会明
显加深 o但稳定性试验证明欧前胡素的成分含量没
有明显变化 ∀是否其他成分有变化 o暂不能确定 ∀
所有关于白芷中欧前胡素含量测定的文献中均未提
及此点 ∀
≈参考文献 
≈t  彭 菲 o刘建存 o周日宝 q川白芷多倍体诱导试验 q中药材 o
t||| ouuktul }ytt q
≈u  彭 菲 o郭 昱 q川白芷离体培养与多倍体诱导过程中的形态
组织学观察 q中国中药杂志 ousss ouxktl }tz q
≈v  王立人 o李宏宇 o谢成科 q白芷中香豆精类成分的反相高效液
相色谱测定 q药学学报 ot||s ouxkul }tvt q
∆ετερµινατιον οφ Ιµ περατοριν ιν Τετραπλοιδψ Ραδιξ Ανγελιχαε δαηυριχαε
°∞‘Š ƒ ¬¨o ‹ „‘Š ≥«¨ ±ªoŒ˜ פ2¶¬o ÷Œ„’ …¬±ª2° ¬¨
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第 uz卷第 y期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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∏±¨ qoussu
组织培养的污染问题 o首先要解决内生真菌的逐渐
污染这一难题 ∀
3 q1 q2 采用 s .t h 的升汞溶液灭菌 灭菌时间不
同 o产生的灭菌效果也不相同 ∀u °¬±灭菌 o大部分
外植体在 v ∗ w §内 o陆续出现污染 o说明灭菌时间
过短 o无法将表皮污染源杀死 ~w °¬±以上灭菌 o大
部分外植体陆续发白死亡 o说明灭菌时间过长 ~而 v
°¬±灭菌时间产生的效果与浓度为 us h的次氯酸钠
溶液灭菌 tx °¬±效果基本相同 o在 u周内不出现污
染 ∀
总之 o经过多种灭菌方法的摸索和比较 o发现千
层塔茎尖外植体的灭菌十分困难 ∀第 t次灭菌后 o
能在 tw ∗ tx §内不污染的灭菌方法k如采用 us h的
次氯酸钠溶液灭菌 tx °¬±os qt h的升汞溶液灭菌 v
°¬±ox h新洁尔灭溶液与升汞溶液交替灭菌 !磁力
搅拌仪处理后再用 us h的次氯酸钠溶液灭菌等方
法l是最有效的 o说明表面灭菌已完全 o分析后得出
一个新推断 o千层塔组织内部含内源真菌 o经过 u周
培养后逐渐出现污染 o将 u周后出现污染的外植体
同样方法再次灭菌后培养 o一般千层塔的茎尖需经
过 v ∗ w次灭菌后才能完全除去真菌 o灭菌成功率相
对较高 o可达 wu h ∀多次灭菌一般采用 us h的次氯
酸钠溶液灭菌 tx °¬±或 s qt h 的升汞溶液灭菌 v
°¬±的效果最好 o其余方法 o因为过程系琐 o成功率
反而降低 ∀
3 q2 培养条件
实验结果表明 o ≥ 和 tru  ≥ 培养基 o对于千
层塔外植体培养的影响 o差异不大 ∀在恒温 ux ε 的
培养箱中培养 o发现 uw «的光照培养 ow ∗ x §后外
植体都发白死亡 o无法继续培养 o诱导愈伤组织 ∀只
有在暗培养的条件下 o茎外植体才保持嫩绿 o在含有
特殊前加物和加有 x °ª#ptu ow2⁄和 t °ªop tŽ×
的  ≥基本培养基上培养诱导成功 o两个月后长褐
色的愈伤组织 o以后停止生长 o约两个半月后长出淡
黄色的愈伤组织 o生长速度为每月加倍 ∀
此外 o在自然光下 o不采取任何处理方法 o仅保
持茎外植体在一定环境空间内的湿度 ous ∗ vs §
后 o在茎节处长出灰白的幼根 o说明千层塔外植在培
养时不需要外加光源 ∀
3 q3 内源真菌生长部位的推断
经实验 o刮去表皮的茎段 o培养后 x§o有
zv qv h污染率 oy §有 |v qv h污染率 ~而未刮去表皮
的茎段 tx §后才出现 vv h的污染率 o表明内源真菌
不在表面部位 o存在于茎的皮层 o至少在表皮内组
织 ∀刮去表皮后 o内源真菌直接与培养基接触便很
快污染 o且污染率极高 ∀
我们从千层塔组织培养的实验中清楚地认识
到 o千层塔这类较低等且伴有内源真菌的蕨类植物
离体培养十分困难 o用其外植体的组织培养进行工
业化大规模生产 o应从提高石杉碱甲素含量和增加
培养细胞的生长速度两方面着手 o目前还有大量的
基础工作需要进一步深入研究与探讨 ∀此外 o检测
千层塔内源真菌中是否含有石杉碱甲素 o并利用其
进行工业化发酵来生产石杉碱甲素 o是否可能成为
石杉碱甲的来源 o尚需进一步实验论证 ∀
≈参考文献 
≈t  郑珍贵 o黄永伯 o刘 涤 o等 q蛇足石杉的培养和石杉碱生成 q
中草药 ousss okvtl增刊 }tv| q
≈u  朱文廉 q植物组织培养中的外植体灭菌 q植物生理学通报 o
t||y ovukyl }www q
≈v  比可华 o赵建萍 o蒋小满 o等 q芋茎尖离体培养和快速繁殖 q广
西植物 ot||| ot|ktl }yt q
≈责任编辑 王康正 
k上接第 wuz页l
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≈责任编辑 王康正 
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