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≈v 侯海霞 o周莉玲 o李 锐 q青蒿琥酯紫外分析法的研究 q中药新
药与临床药理 ousss ottkul }ttv q
≈w 周莉玲 o侯海霞 o李 锐 q青蒿琥酯透皮吸收研究中接收液的筛
选 q中成药 ousss ouukvl }t{w q
≈x 郑俊民 q经皮给药新剂型 q北京 }人民卫生出版社 ot||z qtx q
≈y 罗明生 o高天惠 q药剂辅料大全 q成都 }四川科学技术出版社 o
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Α Στυδψ ον τηε Περχυτανεουσ Πενετρατιον οφ Αρτεσυνατε
φροµ ς αριουσ Ρεσερϖοιρ ς εηιχλεσ
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨·¨µ°¬±¨ ·«¨ °¤¬± ©¤¦·²µ¶º«¬¦«¤©©¨ ¦··«¨ ³¨µ¦∏·¤±¨ ²∏¶³¨ ±¨ ·µ¤·¬²± ²©¤µ·¨¶∏±¤·¨ ¤±§³µ²√¬§¨ ©¨©¬2
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©¨ ¦·¨§·«¨ ³¨µ¦∏·¤±¨ ²∏¶³¨ ±¨ ·µ¤·¬²± ²©¤µ·¨¶∏±¤·¨ qΧονχλυσιον : × «¨ ¶∏¬·¤¥¯¨µ¨¶¨µ√¬²µ√ «¨¬¦¯¨¦¤± ³µ²°³··«¨ ³¨µ¦∏·¤±¨ ²∏¶³¨ ±¨ ·µ¤·¬²±
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[ Κεψ ωορδσ] ¤µ·¨¶∏±¤·¨ ~³¨µ¦∏·¤±¨ ²∏¶³¨ ±¨ ·µ¤·¬²±~µ¨¶¨µ√¬²µ√ «¨¬¦¯¨~²µ·«²§²¬ §¨¶¬ª±
≈责任编辑 刘
高效毛细管电泳法测定
四维灵芝液中核苷类成分的含量
戴 敬t o鲁 静u o林瑞超u o刘文英v
kt q河北省药品检验所 o河北 石家庄 sxsstt ~
u q中国药品生物制品检定所 o北京 tsssxs ~v q中国药科大学 o江苏 南京 utsss|l
≈摘要 目的 }建立毛细管电泳测定液体制剂 ) ) ) 四维灵芝液中核苷类成分的方法 ∀方法 }熔融石英毛细管
柱 zx Λ° ¬§≅ xz ¦° k有效长度 xs ¦°l ~缓冲体系 us °°²¯#p t硼砂含 vs °°²¯#p t ≥⁄≥ o添加 x h乙醇k|x h l o³
ts qskt °²¯#p t¤ 调节l ~气动进样时间 tx ¶~分离电压 ts ®∂ k恒压方式l ~柱温 us ε ~检测波长 uxw ±° ∀结
果 }回归方程腺苷 }Ψ s .szsx n s .stzsz Ξ(ρ s .|||x) ;鸟苷 : Ψ s .suvu n s .st{yw Ξ(ρ s .||||) ∀平均回收率
( ν xl }腺苷为 || quu h o ≥⁄ v qyy h ~鸟苷为 tsw qv h o ≥⁄ t q|t h ∀根据建立的方法 o测定了 |批样品腺苷与
鸟苷的含量 ∀结论 }方法简便 !快速 !准确 !重现性好 o可用于样品核苷类成分测定 ∀
≈关键词 四维灵芝液 ~毛细管电泳 ~核苷 ~腺苷 ~鸟苷
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukussuls|2syyx2sw
≈收稿日期 ussu2sv2sz
≈通讯作者 电话 }ksvttlyswywzy2{tw
四维灵芝液是灵芝菌人工发酵培养产物制剂 o
目前是保健药 o具补气养血 o填精益髓 o健脑安神 o增
强免疫 o延缓衰老之功效 ∀对精气不足 o气血亏虚 o
#xyy#
第 uz卷第 |期
ussu年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o²q|
≥ ³¨·¨°¥¨µqoussu
神衰体倦 o头晕目眩 o腰膝酸软 o心悸怔忡 o健忘失眠
等症有良好的防治与保健作用 ∀灵芝菌人工发酵培
养产物主要含有多糖 !多肽 !核苷 !甾醇 !三萜等成
分 ∀其中核苷类是具有广泛生理活性的一类水溶性
成分≈t o虽有研究报道以高效毛细管电泳法测定原
生灵芝及灵芝制剂≈u !冬虫夏草及其制剂≈v 中的核
苷成分含量 o但对液体制剂中核苷类成分的分析尚
未见报道 ∀本研究建立了毛细管电泳测定液体制剂
) ) ) 四维灵芝液中核苷类成分的方法 ∀结果表明 o
方法简便 !快速 !准确 !重现性好 ∀
1 仪器 !试剂与试样
1 q1 仪器
°r≤∞ xxss 型毛细管电泳仪k包括自动进样
器 !高压电源 !二极管阵列检测器l !°r≤∞工作站
k美国
¨ ¦®°¤±l o弹性石英毛细管柱k河北永年光导
纤维厂l o
¨ ¦®°¤±Υws ³ 计 ∀
1 q2 试剂
腺苷对照品k腺嘌呤核苷 o水合物含量 ∴|{ h o
上海伯奥生物科技公司l o鸟苷对照品k ×
¤®¨ µl o
磺胺甲 唑k≥ o中国药品生物制品检定所l o十二
烷基硫酸钠k≥⁄≥ o北京欣经科生物技术公司l o硼砂
及氢氧化钠均为分析纯 o
2{大孔吸附树脂k天津
南开大学化工厂l o实验用水均为 ¬¯¯¬2± 去离子水 ∀
研究所用样品四维灵芝液 ts批k山东四维制药有限
公司l ∀
2 电泳条件
熔融石英毛细管柱 zx Λ° ¬§≅ xz ¦°k有效长度
xs ¦°l ~缓冲体系 us °°²¯ #pt硼砂含 vs °°²¯ #
pt ≥⁄≥ o添加 x h乙醇k|x h l o³ ts qskt °²¯#pt
¤ 调节l ~气动进样 us ³¶¬tx ¶~分离电压 ts ®∂
k恒压方式l ~柱温 us ε ~检测波长 uxw ±° ~每次运
行前毛细管依次用 s qt °²¯#pt ¤ !去离子水 !
运行缓冲溶液冲洗 u °¬±∀
3 溶液制备
3 q1 对照品溶液制备
精密称定腺苷及鸟苷对照品适量 o以水为溶剂 o
配制成各含 s qt °ª# °p t的混合对照品储备液 ∀
精密吸取对照品储备液 v °o置 x °量瓶中 o精密
加入内标溶液 t °k s qu °ª#°p t的 ≥ 溶液l o
加水定容 o即得供含量测定用对照品溶液 o含量为
ys Λª#°p t ∀
3 q2 供试品溶液制备
取四维灵芝液适量 o离心 o精密量取上清液 us
°o加于预先处理好的大孔吸附树脂柱kt qx ¦° ≅
tt ¦° ol上 o先以水 xs °洗脱k控制流速 o使低于
s qx °# °¬±p tl o弃去洗脱液 o继以 vs h 乙醇 tss
°洗脱 o收集洗脱液 o水浴蒸干 o残渣以水溶解 o定
量转移至 x °容量瓶 k已精密加入同上内标溶液 t
°l 中 o加水至刻度 o摇匀 o以 s qwx Λ°微孔滤膜滤
过 o取滤液作为供试品溶液 ∀
4 线性关系考察
因本含量测定采用内标法 o故考察了添加内标
时的线性关系 ∀分别吸取腺苷和鸟苷 u种对照品储
备液k含量均为s qx °ª# °p tl各s qt os qv os qx o
s qz ot qs ou qs °o置 x °量瓶中 o各加入内标溶液
ks qu °ª#°p t ≥ 溶液lt qs °o加水至刻度 o摇
匀 o制得系列对照品溶液 ∀进样测定 o记录峰面积积
分值 o以对照品含量kΛª#°p tl为横坐标 o以对照品
与内标物峰面积积分值比值为纵坐标 o进行线性
回归 o得线性回归方程 o腺苷 }Ψ s . szsx n
s .stzsz Ξ , ρ s .|||x ;鸟苷 : Ψ s .suvu n
s .st{yw Ξ , ρ s q|||| ∀
由此可知 o在内标含量为 wv qt Λª# °p t时 o腺
苷含量在 | q{ ∗ t|x Λª# °p t !鸟苷含量在 ts q{ ∗
utz Λª#°p t线性关系良好 ∀
5 进样精密度考察
取对照品溶液连续进样测定 x次 o记录峰面积
积分值 o计算腺苷与鸟苷相对k相对于内标l峰面积
积分值比值的平均值为 s q|txy和 t qsvvw o其 ≥⁄
分别为 s q{x h和 t qu h ∀取供试品溶液 o连续进样
测定 y次 o腺苷与鸟苷相对峰面积积分值比值的平
均值为 t qztvs和 t qvzzx o其 ≥⁄分别为 s qxz h和
t qs h ∀
6 稳定性试验
取样品 o按前述方法制备供试液 o每间隔一定时
间测定 t次 o结果表明 o供试品溶液至少在 uw «内
基本稳定 ∀
7 重复性试验
取同批k批号 usstsyuv quwl样品 x份 o按前述方
法制备供试液 o测定 o计算 o结果 x份样品中腺苷与
鸟苷含量测定平均值为 ut qy和 uy q{ Λª#°p t o其
≥⁄分别为 w qu h和 v qw h ∀
8 加样回收试验
精密吸取已知含量的样品k批号 usstsyuv quwl
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∂ ²¯ quz o²q|
≥ ³¨·¨°¥¨µqoussu
溶液 ts °o及一定浓度的对照品溶液 ts °o按前
述方法制备供试液 o测定 o计算回收率 o结果列于表
t ou ∀x份样品的平均回收率腺苷为 || qu h k ≥⁄
v qz h l o鸟苷为 tsw qv h k ≥⁄ t q{ h l ∀
表 t 腺苷回收率测定结果
测得腺苷量
r˪
回收率
r h
平均回收率
r h
≥⁄
r h
wss qs |y qz
v|y q| |x qs
wtw q{ tsw qw || qu v qz
wsz qv tss qx
wsx qt || qv
注 }样品中腺苷含量为 utx q{ Λªo加入量为 t|s qy Λª
表 u 鸟苷回收率测定结果
测得鸟苷量
r˪
回收率
r h
平均回收率
r h
≥⁄
r h
xvw qs tsu qu
xwx qs tsy qx
xvx qt tsu qy tsw qv t q{
xwv qz tsy qs
xv{ qz tsw qt
注 }样品中鸟苷含量为 uy{ qw Λªo加入量为 ux| q{ Λª
9 样品含量测定
用所建立的方法测定 |批四维灵芝液中腺苷与
鸟苷的含量 o结果列于表 v ∀
表 v 样品含量测定结果 Λª#°p t
样品批号 腺苷 鸟苷
stsxsw us qz tz qu
stsxtt uu qw t| qz
stsysx us qz tv qt
stsyuv us q{ tz qy
stsztw uv qy t| qx
stszt| us qw tz qx
stszu{ t| qz tz qx
sts|tw t| qv tu qx
sts|ut ut qs t| q{
10 讨论
10 q1 样品预处理
由于待分析样品是灵芝菌人工发酵培养产物 o
为液体制剂 o其中含有大量的多糖 !蛋白等干扰测定
的成分 o样液黏度大 o待测组分含量低 o无法直接进
样分析 o故需对样品进行除杂浓集处理 ∀曾有文献
报道 o以离子交换树脂 !大孔吸附树脂 o并结合硅胶
柱色谱及制备薄层色谱对灵芝菌丝体中的核苷类成
分进行了成功的分离≈w ∀故本实验选择大孔吸附树
脂除去大量的水溶性杂质 ∀依次考察上样大孔吸附
树脂柱水洗脱液 ovs h乙醇 s ∗ tss otss ∗ tvs °
洗脱液 o结果表明除前 tss °vs h乙醇洗脱液外 o
其余均不含有待测成分 ∀继以 xs h乙醇洗脱 o结果
洗脱液颜色急剧加深 o但并未检出核苷类成分 o由此
可见 o增加洗脱乙醇的浓度 o会增加测定溶液中的杂
质 o还是以较低浓度的乙醇洗脱为好 ∀
10 q2 缓冲体系的优化
根据文献≈u ∗ v 报道 o首先选定硼酸盐缓冲体
系 o缓冲试剂硼砂因电导率高 o故将其浓度控制在
us °°²¯#pt ∀
缓冲溶液的 ³ 既可改变溶质的结构 o使溶质
电离或呈电中性状态 o又可改变电渗流的大小 o所以
³的选择是决定分离成败的一大关键 ∀通过考察
缓冲液 ³kts qs ots qx ott qsl对迁移和分离选择性
的影响 o选出最佳 ³ts qs ∀
考察 ≥⁄≥浓度ks ots ovs oxs °°²¯#p tl对迁移
和分离的影响结果表明 o向缓冲溶液中添加一定量
的 ≥⁄≥能延长待测组分的迁移时间 o但对各组分的
分离选择性影响不是很大 o由此选定 ≥⁄≥ 浓度 vs
°°²¯#p t ∀
在 ≤∞中 o常常将有机溶剂作为一种改性剂添
加到缓冲溶液中 o以改变熔硅管内壁和缓冲溶液的
性能 ∀加入有机溶剂 o多重效应引起电渗流速度降
低 o离子迁移时间延长 o本实验选定挥发性较小 o毒
性较低的极性有机溶剂乙醇 o作为添加剂 ∀实验结
果表明 o添加乙醇能有效地改善溶质的分离选择性 o
同时 o溶质的迁移时间随着乙醇浓度 kv h ox h o
ts h l的增加而显著延长 o综合考虑 o选定添加乙醇
浓度为 x h ∀
总之 o在优化的缓冲体系下测定样品 o结果样品
中待测组分之间 o待测组分与内标之间以及待测组
分与其他杂质之间均达基线分离k见图 t oul ∀
10 q3 内标的选择
选择与核苷结构相近的化合物咖啡因和 ≥
进行试验 o结果咖啡因的迁移时间比腺苷与鸟苷都
短 o且只有 ≥⁄≥浓度在 vs °°²¯#pt以上时其才能
与样品中杂峰分离 ~而 ≥ 的迁移时间介于腺苷与
鸟苷之间 o且与样品中腺苷 !鸟苷及杂质均达基线分
离 o是较为理想的内标选择 ∀
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图 t 对照品电泳图
t q腺苷 u q内标 ≥ v q鸟苷
图 u 样品电泳图
t q腺苷 u q内标 ≥ v q鸟苷
10 q4 关于尿苷
尿苷在本试验样品中因含量较低而未予测定 ∀
尿苷与鸟苷迁移时间接近 o优化缓冲体系主要是为
改善它们的分离 o避免尿苷对鸟苷测定的干扰 ∀本
优化电泳条件可用于同时测定尿苷和鸟苷的含量 ∀
11 结论
通过对不同电泳条件的考察 !优化及系统方法
学研究 o建立了高效毛细管电泳测定液体制剂k四维
灵芝液l中核苷类成分腺苷与鸟苷含量的方法 o方法
简便 !快速 !准确 !重现性好 o可用于样品中核苷类成
分测定 ∀
≈参考文献
≈t ≥«¬°¬½∏ o≠¤±² × o≥¤¬·² ≠ o¨ ·¤¯ q¶²¯¤·¬²± ²© ¤± ±«¬¥¬·²µ²©
°¯ ¤·¨¯ ·¨ªªµ¨ª¤·¬²± ©µ²° ¤ ƒ∏±ª∏¶o¤±²§¨µ°¤ ∏¦¬§∏° q≤«¨ °
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≈v 李绍平 o李 萍 o季 晖 o等 q毛细管电泳法测定冬虫夏草中核
苷类的含量 q药物分析杂志 ousst outkul }zz q
≈w 余竞光 o翟云凤 q薄盖灵芝化学成分的研究k第 ´报l q药学学
报 ot|z| otwkyl }vzw q
∆ετερµινατιον οφ Νυχλεοσιδεσιν Σιωειλινγζηι Μιξτυρε βψ ΗΠΧΕ
⁄¬±ªt o ¬±ªu o ∏¬2¦«¤²u o • ±¨2¼¬±ªv
kt q ¥¨¨¬°µ²√¬±¦¬¤¯ ±¶·¬·∏·¨ ©²µ⁄µ∏ª ≤²±·µ²¯ o≥«¬¬¤½«∏¤±ª sxsstt o ¥¨¨¬o≤«¬±¤~
u q¤·¬²±¤¯ ±¶·¬·∏·¨ ©²µ·«¨ ≤²±·µ²¯ ²© °«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ¤±§
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°≤∞q Μετηοδ : §¨ ±²¶¬§¨ ¤±§ª∏¤±²¶¬§¨ º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§ º¬·«¬± ux °¬± ∏¶¬±ª¤± us °°²¯#p t ¥²µ¤·¨ ¥∏©©¨µº¬·« vs °°²¯#p t
≥⁄≥ ¤±§x h ∞·«¤±²¯ k¤§∏¶·¨§·²³ ts qs º¬·«¶²§¬∏° «¼§µ²¬¬§¨ ¶²¯∏·¬²±l o º¬·«¤± ²³¨µ¤·¬²± √²¯·¤ª¨ ²©ts ®∂ o·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ²©us
ε ¤±§¤«¼§µ²§¼±¤°¬¦¬±¨¦·¬²±·¬°¨²©tx ¶q≥ ³¨¨µ¤·¬²±¶ º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§²∏·¬± ¤©∏¶¨§2¶¬¯¬¦¤¦¤³¬¯¯¤µ¼ zx Λ° ¬§≅ xz ¦° k ©¨©¨ ¦·¬√¨
¯¨ ±ª·«xs ¦°l º¬·«³¨ ¤® §¨·¨¦·¬²± ¥¼ §¬µ¨¦· ∂ ¤·uxw ±° qΡεσυλτ : ª¨µ¨¶¶¬²± ¨´ ∏¤·¬²± ²©¤§¨ ±²¶¬§¨ ¤±§·«¤·²©ª∏¤±²¶¬§¨ º µ¨¨ Ψ
s .szsx n s .stzsz Ξ(ρ s .|||x) ανδ Ψ s .suvu n s .st{yw Ξ(ρ s q||||lµ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ q × «¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ µ¤·¨ º¤¶|| quu h
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[ Κεψ ωορδσ] ≥¬º ¬¨¯¬±ª½«¬ ¬¬·∏µ¨ ~°≤∞~±∏¦¯ ²¨¶¬§¨¶~¤§¨ ±²¶¬§¨ ~ª∏¤±²¶¬§¨
≈责任编辑 刘
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