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Preparation and Simultaneous Determination of Corynoline and Acetylcorynoline in the Herb of Corydalis bungeana

苦地丁中紫堇灵和乙酰紫堇灵的制备和HPLC测定



全 文 :‹l ot quvkv‹ o¶ovχ2≤ ‹vl ∀tv ≤2‘ • kzx  ‹½o⁄2
≥’2§yl ∆}tys qwk≤2ul ottt quk≤2vl otww qyk≤2wl o
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≤l ozv qwkŠ2u2≤l ozy q|kŠ2v2≤l ozs qskŠ2w2≤l ozy qx
kŠ2x2≤l oys q{kŠ2y2≤l ∀以上数据与文献报道基本
一致≈x  o故鉴定为 y2kvχ2甲基2uχ2 Ο2Β2 ∆2吡喃葡萄糖
基2vχ2羟基2丁基l2z2羟基2香豆素 ∀
≈参考文献 
≈t  江苏新医学院 q中药大辞典 q上册 q上海 }上海人民出版社 o
t|zz qws{ q
≈u  江忝益 o洪美芳 o潘竟先 o等 q崖椒根中两个新化合物的 ‘ •
研究 q波谱学杂志 ot||u o|kwl }wtv q
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‹…∂ ≤²±¶·¬·∏¨ ±·¶ ©µ²° Ζαντηοξψλυ µ σχηιονιφολιυ µ q °«¼·²2
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°«¨ ±¼¯ °µ²³¤±²¬§©µ²° Ζαντηοξψλυ µ αιλαντηοιδεσq °«¼·²¦«¨ °2
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„¦¨·²±ª¨ ±¬± ©µ²° „±±²±¤ • ·¨¬¦∏¯¤·¤q°«¼·²¦«¨ °¬¶·µ¼ ot||w ovx
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Στυδιεσ ον τηε Χουµ αρινσιν τηε Ροοτ οφ Ζαντηοξψλυµ διµορπηοπηψλλυµ
× „ ’ «¤²2≠¤±ªo≤ ‹∞‘ • ¤±2≥«¨ ±ªo«„‘Š • ¬¨2⁄²±ªo≥˜‘¬¤±2‘¤o ‹∞‘Š ≥«∏¬2±¬±ªo ≠ ’ ˜ ¬¤±ªo ±Œ„’ ≤«∏¤±2«∏²
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶²©·«¨ §µ¬¨§µ²²·¶²© Ζαντηοξψλυ µ δι µ ορπηοπηψλλυ µµq¶³¬±¬©²¯¬∏°
¤±§·²©¬±§²∏··«¨ ¤¦·¬√¨¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶²©·«¨ ³¯¤±·q Μετηοδ :  ²§¨µ± ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ º¤¶∏¶¨§·² ³∏µ¬©¼ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶o¤±§
·«¨¬µ¶·µ∏¦·∏µ¨¶º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¥¼ √¤µ¬²∏¶¶³¨¦·µ¤¯ ° ·¨«²§¶q Ρεσυλτ : ƒ²∏µ¦²°³²∏±§¶ º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§¤±§¬§¨ ±·¬©¬¨§¤¶¬¶²³¬°³¬±¨ ¯¯¬±
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[ Κεψ ωορδσ] Ζαντηοξψλυ µ δι µ ορπηοπηψλλυ µ ~¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶~¦²∏°¤µ¬±
≈责任编辑 李 禾 
苦地丁中紫堇灵和乙酰紫堇灵
的制备和 ‹°≤ 测定
黄 阁 o杨红娟 o李发美
k沈阳药科大学 药学院 o辽宁 沈阳 ttsstyl
≈摘要  目的 }从苦地丁中制备紫堇灵和乙酰紫堇灵 o并建立同时测定二者含量的反相高效液相色谱法 ∀方
法 }采用柱层析分离 !制备 o波谱方法及理化性质鉴定二化合物 ~用 ‹°≤ 法进行含量测定 o色谱柱为 „°∞÷2’⁄≥
柱 o流动相为甲醇2tx °°²¯ #p t磷酸二氢钾r磷酸氢二钾缓冲液k³‹ y qzs ozsΒvsl o流速 s q{ °#°¬±p t o检测波长
u{| ±° o采用外标两点法定量 ∀结果 }得到紫堇灵和乙酰紫堇灵的纯度在 || h 以上 ~紫堇灵在 y q| ∗ tts qw °ª#
p t o乙酰紫堇灵在 { qz ∗ tv| qx °ª#p t线性关系良好 ~• ≥⁄分别为 u qt h ou qz h o回收率 |z qv h o|z qu h ∀结论 }
建立了紫堇灵和乙酰紫堇灵的制备方法 ~‹°≤ 方法简单 o易操作 o适用于不同产地苦地丁中二者含量的测定 ∀
≈收稿日期  ussu2sw2tx
≈通讯作者  ר¯ }ksuwluv{wvztt2vvyt ∞2°¤¬¯}©¤° ¬¨¯¬ƒ tyv q¦²°
#ywv#
第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
≈关键词  反相高效液相色谱法 ~苦地丁 ~紫堇灵 ~乙酰紫堇灵
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svwz2sw
苦地丁系罂粟科 °¤³¤√ µ¨¤¦¨¤¨ 植物紫堇 Χορψ2
δαλισ βυνγεανα ×∏µ¦½的带根全草 o中医用于清热解
毒 o活血消肿 o治疗感冒 !咳嗽 !肝炎及多种炎症 o尤
其对风湿病 !心肌炎有较好疗效≈t  ∀紫堇灵k¦²µ¼±²2
¬¯±¨ l !乙酰紫堇灵k¤¦¨·¼¯¦²µ¼±²¯¬±¨ l是苦地丁的主要
成分 o据报道具有镇静 !抗钩端螺旋体及肝损伤保护
作用≈u ov  o尤其是后者作用较强 ∀本文利用柱层析
方法 o从苦地丁中分离得到紫堇灵和乙酰紫堇灵 o并
利用波谱k ˜ ∂ ot ‹2‘ • otv ≤2‘ • l方法及化合物
理化性质进行了结构确认 ∀建立了反相高效液相色
谱法 o同时测定药材中紫堇灵和乙酰紫堇灵的含量 ∀
样品经简单处理后直接进样 o能使二者得到较好的
分离 o测定方便准确 ∀
1 材料与仪器
不同产地苦地丁药材购自各地药材公司 o由沈
阳药科大学药用植物教研室孙启时教授鉴定为紫堇
Χ. βυνγεανα∀甲醇为色谱纯k山东禹王化学试剂
有限责任公司l ∀其余试剂均为分析纯k沈阳化学试
剂厂l ∀
¤¶¦² °˜2|{s 高效液相色谱仪 k日本分光公
司l o¤¶¦² ˜ ∂2|zx紫外可见分光光度检测器k日本
分光公司l o≤Ž≤«µ²°色谱工作站k≥¦¬¨±·¬©¬¦≥¼¶·¨°
Œ±¦l oƒ ±2{x„旋转蒸发仪k上海医械专机厂l o³‹≥2
ux型酸度计k上海分析仪器厂l o…µ∏®¨ µ„• ÷2vss型
核磁共振波谱仪k瑞士 …µ∏®¨ µ公司l o˜ ∂2uys紫外
可见分光光度计k日本岛津公司l ∀
2 方法和结果
2 q1 紫堇灵和乙酰紫堇灵的制备 !结构鉴定和纯度
分析
苦地丁药材用 |x h乙醇加热回流提取 o合并提
取液 o回收溶剂 ∀浸膏加 u h ‹≤¯研磨后将酸液用
等体积的石油醚萃取 v次后用氨水碱化 ∀碱水层过
滤后用氯仿萃取多遍 o直至氯仿层无色 o合并并回收
氯仿 o得氯仿层浸膏 ∀利用硅胶柱层析 o以环己烷2
丙酮系统为洗脱剂进行梯度洗脱 o收集并合并组分 o
在甲醇2氯仿中进行多次重结晶 o得紫堇灵和乙酰紫
堇灵单体 ∀根据化合物理化性质和波谱k ˜ ∂ ot ‹2
‘ • otv≤2‘ • l数据 o并与文献数据≈w ox 比较 o结果
分别与紫堇灵和乙酰紫堇灵的波谱数据一致 ∀用高
效液相色谱面积归一化法测定二化合物的纯度分别
为 || qx h和 || qt h ∀
2 q2 紫堇灵和乙酰紫堇灵的 ‹°≤ 测定
2 q2 q1 色谱条件 色谱柱 }„°∞÷2’⁄≥ks qwy ¦° ≅
ux ¦° ox Λ° o²±¨ ¶≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¼l o流动相甲醇2tx
°°²¯#pt磷酸二氢钾r磷酸氢二钾缓冲液 ³‹ y qzs
k体积比 zsΒvsl ~流速 s q{ °#°¬±p t o检测波长 u{|
±° o柱温 u{ ε ∀
2 q2 q2 样品溶液制备 将苦地丁药材粉碎并过 ws
目筛 o备用 ∀精密称取药材干燥粉末 s qx ªo加入 us
°甲醇 o浸泡 t «o超声 vs °¬±o滤过 o甲醇洗涤残
渣 o将滤液浓缩 o转移至 ux °量瓶中 o并稀释至刻
度 ∀微孔滤膜ks qwx Λ°l滤过 o得供试品溶液 ∀
2 q2 q3 线性关系考察 分别精密称取一定量紫堇
灵和乙酰紫堇灵对照品于 xs °量瓶中 o用甲醇溶
解并定容 o作为对照品储备液 ∀精密吸取对照品储
备液 s qx ot qs ou qs ow qs o{ qs °于 ts °量瓶中 o
加甲醇定容至刻度 o摇匀 o微孔滤膜滤过 ∀取续滤液
us ˏo按上述色谱条件进行分析k图 tl ∀
以对照品浓度为横坐标 o对照品峰面积为纵坐
标 o得紫堇灵回归方程为 Ψ € t .wx ≅ tsw Ξ p x .ty ≅
tsv , ρ€ s q||| | o线性范围 y q| ∗ tts qw °ª#pt ~乙
酰紫堇灵回归方程为 Ψ € t .tw ≅ tsw Ξ n y .ws ≅
tsv , ρ€ s q||| { o线性范围 { qz ∗ tv| qx °ª#p t ∀
2 q2 q4 重复性试验 按样品制备方法取同一样品
制备供试液 x份 o在上述色谱条件下取 us ˏ进样
分析 o测得紫堇灵和乙酰紫堇灵的平均含量为 t z||
Λª#ªp t和 |yt qw Λª#ªp t o• ≥⁄为 u qt h和 u qz h ∀
2 q2 q5 回收率试验 精密称取苦地丁干燥粉末
ks qx ªl o分别精密加入一定量的对照品储备溶液 o
挥干甲醇 o按样品制备方法制备供试品溶液 o在上述
色谱条件下取 us ˏ进样分析 o得样品的平均回收
率和相对标准偏差k ν € |l o紫堇灵为|z qv h 和
t qv h ~乙酰紫堇灵为 |z qu h和 u qt h o结果见表 t ∀
2 q2 q6 样品测定 取供试品溶液 o进样 us ˏo按所
述色谱条件测定k图 ul o利用外标两点法计算出紫
堇灵的含量 o取平均值 ∀各产地苦地丁中紫堇灵和
乙酰紫堇灵的含量见表 v ∀
#zwv#
第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
表 t 苦地丁中紫堇灵回收率试验结果k ν € |l
加入量
r˪
测得量
r˪
回收率
r h
ξ
r h
• ≥⁄
r h
tv{ qs tvz qv |z qy
tv{ qs tvw q{ |y qx
tv{ qs tvx qu |{ qs
uzy qs uzz q{ tst qw
uzy qs uyx qx |y qu |z qv t q|
uzy qs uzu q{ |{ q{
wtw qs v|t qx |w qy
wtw qs v|y q{ |x q|
wtw qs wss qx |y qz
表 u 苦地丁中乙酰紫堇灵回收率试验结果k ν € |l
加入量
r˪
测得量
r˪
回收率
r h
ξ
r h
• ≥⁄
r h
vw{ q{ vwv qt |{ qw
vw{ q{ vuy qz |v qz
vw{ q{ vvz q{ |y q{
tzw qw ty| q{ |z qw
tzw qw ty{ qx |y qy |z qu u qt
tzw qw tyz q| |y qv
{z qu {y qy || qv
{z qu {z q| tss q{
{z qu {v qy |x q|
表 v 各产地苦地丁中紫堇灵和乙酰紫堇灵含量含量
k ν € vl
产地
紫堇灵
含量rΛª#ªp t • ≥⁄r h
乙酰紫堇灵
含量rΛª#ªp t • ≥⁄r h
天津 t t|| u qz xuv qv u qy
河北 t x|v u q{ zxx qs t qt
山东 t u|v u qs t tuy v qs
沈阳 t wwx u qt yww qz t qz
北京 t z|| u qt |yt qw u qz
青海 t t{u t q{ p p
图 t 紫堇灵和乙酰紫堇灵对照品的色谱图
t q紫堇灵 u q乙酰紫堇灵k图 u同l
图 u 苦地丁样品的色谱图
3 讨论
紫堇灵和乙酰紫堇灵均为异喹啉类生物碱 o易
溶于氯仿 !丙酮等有机溶剂 ∀在样品溶液制备过程
中 o同时考察了分别以甲醇 !丙酮 !氯仿为溶剂的提
取效率 o其中甲醇提取最为完全 ~提取方法考察了热
回流 !冷浸 !超声提取 o发现冷浸法提取量较低 o而热
回流提取的杂质较多 o干扰组分的测定 o因此采用甲
醇超声法进行提取 ∀
紫堇灵和乙酰紫堇灵在 u{| ±°左右均有较大
吸收 o因此将检测波长确定为 u{| ±° ∀在各产地的
苦地丁中二者的含量均有较大的差异 o尤以乙酰紫
堇灵含量变化较大 o反映出有必要以紫堇灵和乙酰
紫堇灵的含量对苦地丁药材进行质量控制 ∀
文献报道同时对二者的含量进行测定的方法有
薄层光密度扫描法≈y 及高效液相色谱法≈z o{  o所采
用的方法或样品前处理繁琐 o步骤较多 o或在流动相
中加入一定的离子对试剂 o对色谱柱伤害较大 ∀我
们曾对苦地丁及其复方制剂中紫堇灵的含量进行
‹°≤测定≈|  o本文在此基础上对紫堇灵和乙酰紫
堇灵进行同时测定 ∀本法将样品超声提取后直接进
样 o简单易操做 o且紫堇灵和乙酰紫堇灵能得到较好
的分离 o具有很好的可操作性 o可适用于不同产地的
药材的测定 ∀
≈参考文献 
≈t  江苏新医学院 q中药大辞典 q上海 }上海科学技术出版社 ot|{x q
tu|s q
≈u  周继铭 o余朝菁 o曹 元 o等 q蛇含七的有效成分的研究 q中草
药 ot|{t ov }v q
≈v  魏怀玲 o刘耕陶 q紫堇灵 !乙酰紫堇灵及原阿片碱对小鼠实验性
肝损伤的保护作用 q药学学报 ot||z ovukxl }vvt q
≈w  פ®¤²o ‘oŒº¤¶¤oŽoŽ¤°¬ª¤∏¦«¬o  o ·¨¤¯ q≥·∏¼§¬¨¶²±·«¨ „ 2¯
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²¯¬§¶²© Χορψδαλισ ινχισα ° µ¨¶qŒq ’± ·«¨ ‘²±³«¨ ±²¯¬¦ × µ¨·¬¤µ¼
…¤¶¨¶q ≠¤®∏ª¤®∏¤¶¶«¬ot|zv o|vktl }{z q
≈y  何丽一 o张亚斌 q苦地丁中六种异喹啉生物碱的薄层分离和光
密度测定 q药学学报 ot|{x ouskxl }vzz q
≈z  徐晓莹 o李宝明 o何丽一 o等 q苦地丁中异喹啉生物碱的反相离
子对高效液相色谱分析法 q药学学报 ot||w ou|ktsl }z{x q
≈{  • ¬¨ª∏¤±ª  ±¨ªo • ±¨½¤² ¬¤±ªo Š∏²¶«¬ ×∏q „¶¶¤¼ ²© ©¬√¨
≤²µ¼±²¯¬±¨ 2·¼³¨ „ ®¯¤¯²¬§¶¬± Χορψδαλισ βυνγεανα ¥¼ • √¨ µ¨¶¨§2
³«¤¶¨ ‹¬ª«2³¨ µ©²µ°¤±¦¨ ¬´∏¬§ ≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ q  ≤«µ²2
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第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≈|  黄 阁 o赵怀清 o李发美 q• °2‹°≤ 法测定苦地丁及其复方制 剂中紫堇灵的含量 q沈阳药科大学学报 ousst ot{kyl }wt| q
Πρεπαρατιον ανδ Σιµ υλτανεουσ ∆ετερµινατιον
οφ Χορψνολινε ανδ Αχετψλχορψνολινειν τηε Ηερβ οφ Χορψδαλισ βυνγεανα
‹ ˜„‘Š Š¨o ≠ „‘Š ‹²±ª2­∏¤± oŒ ƒ¤2° ¬¨
k≥¦«²²¯ ²© °«¤µ°¤¦¼ o≥«¨ ±¼¤±ª °«¤µ°¤¦¨∏·¬¦¤¯ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ o≥«¨ ±¼¤±ª ttssty o¬¤²±¬±ªo≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¬¶²¯¤·¨ ¤±§³∏µ¬©¼ ¦²µ¼±²¯¬±¨ ¤±§¤¦¨·¼¯¦²µ¼±²¯¬±¨ ©µ²° Χορψδαλισ βυνγεανα ¤±§§¨ √¨¯²³¤µ¨√ µ¨¶¨§2
³«¤¶¨ ‹°≤ ° ·¨«²§²© §¨·¨µ°¬±¬±ª·«¨ ·º²¦²°³²±¨ ±·¶¬± Χ. βυνγεανα q Μετηοδ : „ ®¯¤¯²¬§¶ º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²° ·«¨ ·¨«¤±²¯¬¦ ¬¨2
·µ¤¦·º¬·«¦²¯∏°± ª¨¯¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ o¤±§¬§¨ ±·¬©¬¨§²±·«¨ ¥¤¶¬¶²©¶³¨¦·µ¤¯ ¤±¤¯¼¶¬¶k˜ ∂ ot ‹2‘ • otv≤2‘ • l ¤±§³«¼¶¬¦²¦«¨ °¬2
¦¤¯ ³µ²³¨µ·¬¨¶qƒ²µ ∏´¤±·¬·¤·¬√¨¤±¤¯¼¶¬¶²©·«¨ ·º² ¦²°³²±¨ ±·¶o¶¤°³¯ ¶¨ º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§²± ¤± ’⁄≥ ¦²¯∏°± º¬·« °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ ²©
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#°¬±p t o¤±§·«¨ §¨·¨¦·¬²± º¤¶¶¨·¤·u{| ±° q Ρεσυλτ : × «¨ ³∏µ¬·¼ º¤¶|| qx h ¤±§|| qt h ©²µ¦²µ¼±²¯¬±¨ ¤±§¤¦¨·¼¯¦²µ¼±²¯¬±¨ µ¨2
¶³¨¦·¬√¨¯¼q × «¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²± ¦∏µ√ ¶¨º µ¨¨ ¬¯±¨ ¤µ¬± ·«¨ µ¤±ª¨ ²© y q| ∗ tts qw °ª#p t ¦²µ¼±²¯¬±¨ ¤±§{ qz ∗ tv| qx °ª#p t ¤¦¨·¼¯¦²2
µ¼±²¯¬±¨ q × «¨ • ≥⁄ º¤¶u qt h ¤±§u qz h o¤±§·«¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ º¤¶|z qv h ¤±§|z qu h µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q Χονχλυσιον : × «¨ ° ·¨«²§
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±¤·¬²± ²©¦²µ¼±²¯¬±¨ ¤±§¤¦¨·¼¯¦²µ¼±²¯¬±¨ ¬± Χ. βυνγεανα ²©√¤µ¬²∏¶²µ¬ª¬±¶q
[ Κεψ ωορδσ] • °2‹°≤ ~ Χορψδαλισ βυνγεανα ~¦²µ¼±²¯¬±¨ ~¤¦¨·¼¯¦²µ¼±²¯¬±¨
≈责任编辑 李 禾 
高效液相色谱法测定进口芦荟药材中
芦荟苷的含量
曹 红 o刘 云
k解放军总后勤部 卫生部 药品仪器检验所 o北京 tsssztl
≈摘要  目的 }建立了测定进口药材芦荟中芦荟苷含量的高效液相色谱法 ∀方法 }采用高效液相色谱法 o以
 ’ • …„÷ ≥…2≤t{kw qy °° ≅ uxs °° ox Λ°l为色谱柱 o流动相乙腈2水kuxΒzxl o检测波长 vxx ±° o流速 t qs °#
°¬±p t ∀结果 }芦荟苷在 s qtz ∗ x q| Λª线性关系良好 oρ € s q||| | o芦荟苷平均加样回收率为 |{ qy h o• ≥⁄ t qvu h
k ν € yl ∀结论 }试验结果表明 o该方法准确 !灵敏度高 o重现性好 ∀
≈关键词  芦荟 ~芦荟苷 ~高效液相色谱法
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svw|2sv
中药芦荟具有抗肿瘤 !通便 !抗菌等作用≈t  o而
芦荟苷为芦荟药材的主要有效成分之一 ∀ 5中国药
典6usss年版一部芦荟项下 o对其有效成分芦荟苷
≈收稿日期  usst2tu2sx
≈通讯作者  ר¯ }kstslyy|w|s{t ƒ¤¬}kstslyv{yy{uy
的含量测定 o采用紫外分光光度法≈u  ∀由于芦荟药
材中含有许多蒽醌类及其苷类 o如 }异芦荟大黄素
苷 !大黄酚葡萄糖苷 !芦荟皂草苷 ´和 µ等等≈v  ∀
这些物质在采用紫外分光光度法测定含量时 o都会
参与反应 o所以紫外分光光度法测定的结果是一混
合物 o而不是单一组分的芦荟苷 ∀
#|wv#
第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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