全 文 ：表 t 荜茇中胡椒碱含量测定结果 h
方法 含量
正文方法k外标法l v qy v qt w qs
药典方法k内标法l v qx v qu v q|
足要求 ∀因此本研究采用外标外更为实际 !可行 ∀
4 讨论
4 q1 处方中同时含有藁本和川芎两味药 o两者均含
有藁本内酯和阿魏酸 o故在制订标准时 ~选用川芎中
生物碱类成分为鉴别指标 o更具有专属性 o经空白实
验 o藁本对其无干扰 ∀此方法的建立 o未见文献报
道 o属首创 ∀该方法亦可用于其他含川芎制剂中川
芎的检识 ∀
4 q2 由于样品中所含成分复杂 o给含量测定带来一
定的困难 ∀样品前处理采用无水乙醇稀释 o冰箱中
静置 o除去杂质的方法 o使样品得到净化 o可满足含
量测定的要求 o且重现性好 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 q一部 ot||x qus| q
≈u 王 琰 o邵逊生 o高春生 q反相高效液相色谱法测定六味木香丸
中胡椒碱的含量 q中成药 ot||x otzk{l }ts q
≈v 王 琰 o董文玉 o梁玉琴 q反相高效液相色谱法测定五味哺浊散
中胡椒碱的含量 q中国中药杂志 ot||x ouskvl }tyt q
≈w 戴 涌 o孙文基 q中药泻宝中胡椒碱的 °≤ 测定 q中成药 o
t||x otzkvl }tu q
≈责任编辑 李 禾
反相高效液相色谱法测定
银翘散抗流感病毒有效部位群中醉鱼草苷的含量
石 钺 o石任兵 o陆蕴如 o朱 静
k北京中医药大学 中药学院 o北京 tsssu|l
≈摘要 目的 }建立反相高效液相色谱法测定银翘散抗流感病毒有效部位群中醉鱼草苷含量的方法 ∀方法 }
选用 ≠ • 2≤t{色谱柱kw qy °° ¬§≅ uxs °° ots Λ°l o乙腈2v h醋酸水溶液kuxΒzxl为流动相 o紫外检测波长为 vuy
±° o室温下对醉鱼草苷进行含量测定 ∀结果 }醉鱼草苷进样量在 s qux ∗ s q{w Λª与其峰面积积分值呈良好的线性
关系 oρ s .|||z( ν xl o平均加样回收率为 || qv h oΡΣ∆ 为 t q{u h ∀结论 }本法简便 !准确 !快速 ~可作为银翘散
抗流感病毒有效部位群的质量控制方法 ∀
≈关键词 醉鱼草苷 ~反相高效液相色谱法 ~含量测定 ~银翘散 ~抗流感病毒
≈中图分类号 u{vw qt ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusstlsz2swy|2sv
银翘散是由金银花 !连翘 !桔梗 !薄荷 !淡竹叶 !
甘草 !荆芥 !淡豆豉 !牛蒡子等 |味药组成的中药复
方制剂 o现代用于治疗流行性感冒 !急性扁桃体炎 !
咽峡疱疹 !麻疹 !腮腺炎 !乙脑 !流脑 !大叶性肺炎等
疾病的初期阶段≈t ∀近代不少学者对银翘散的药
效及毒理进行了大量研究 o结果表明银翘散具有解
热 !抗菌 !抗病毒 !抗炎 !抗过敏 !镇痛 !增强免疫等作
用 o且无明显的毒副作用≈u ∀我们曾对银翘散抗流
感病毒活性进行研究 o结果显示良好的抗流感病毒
作用 o并筛选出了银翘散抗流感病毒有效部位群 ∀
≈收稿日期 usst2su2sy
≈基金项目 国家中医药管理局重点课题k|zuszutl
为阐明银翘散抗流感病毒作用的物质基础 o我们运
用现代分离技术 o对银翘散抗流感病毒有效部位群
进行了系统 !深入的研究≈v o发现其含有大量的黄
酮类物质 o醉鱼草苷为该有效部位群中的活性成分
之一 ∀
银翘散全方的化学成分目前还无人研究 o而从
已有的银翘散组方中各单味药的化学成分研究文献
来看 o也未见到有关醉鱼草苷的报道 ∀因此醉鱼草
苷为首次从银翘散群药中分离得到 o经 °≤ 及
≤r ≥r ≥检测 o其来源于薄荷 ∀关于醉鱼草苷的
测定 o曾有库仑滴定法≈w 和高效液相色谱法≈x oy 的
报道 ∀我们采用 °2°≤ 法测定了银翘散抗流感
病毒有效部位群中醉鱼草苷的含量 o获得了满意的
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第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qz
∏¯ qousst
分析结果 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶xtx高效液相色谱泵 o• ¤·¨µ¶uw{z 双波
长检测器 o¬¯¯ ±¨±¬∏°vu 色谱管理工作站 ~× tust
型紫外可见分光光度仪 ~yysux型超声清洗机 ∀
醉鱼草苷对照品k作者提取 !分离并经四谱鉴
定l o纯度 |{ h以上 ∀银翘散抗流感病毒有效部位
群k∞ƒ ≠l由作者筛选得到 ∀乙腈为色谱纯 o甲醇为
分析纯重蒸 o水为重蒸馏水 ∀
2 对照品溶液及样品溶液的制备
2 q1 对照品溶液的配制 精密称取醉鱼草苷对照
品 t qw °ª置于 ts °¯ 量瓶 o用甲醇完全溶解后稀释
至刻度 ∀精密吸取上述溶液 s qy °¯ 置于 u °¯ 量
瓶 o以甲醇定容 o配制成含醉鱼草苷 s qswu °ª# °¯ p t
对照品溶液 ∀
2 q2 银翘散抗流感病毒有效部位群的筛选 取银
翘散原方k金银花Β连翘Β牛蒡子Β甘草Β薄荷Β荆芥Β
桔梗Β淡豆豉Β淡竹叶为 |Β|Β|ΒxΒyΒyΒyΒyΒwlx {ss
®ªo按传统用药方式 o以水煎煮 o得到水煎液 ∀以抗
甲型 !乙型流感病毒为活性评价指标 o通过正交实验
筛选 o得到银翘散抗流感病毒有效部位群k∞ƒ ≠l o得
率 x qy h ∀
2 q3 样品溶液的配制 精密称取约 us °ª ∞ƒ ≠ 置
于锥形瓶 o加适量 xs h乙腈溶液 o超声使其完全溶
解 o转移至 ts °¯ 量瓶 o并以 xs h乙腈溶液定容 ∀经
s qwx Λ°微孔滤膜过滤 o即得样品溶液 ∀
3 色谱条件
≠ • ≤t{柱kw qy °° ¬§≅ uxs °° ots Λ°l ~流
动相乙腈2v h 醋酸水溶液kuxΒzxl ~流速 t qs °¯ #
°¬±p t ~柱温室温 ~紫外检测器 s qs{ ƒ≥ o检测波长
vuy ±° ∀
4 方法与结果
4 q1 检测波长的选择 吸取醉鱼草苷对照品溶液
适量 o经甲醇稀释 o以甲醇为空白 o在 uss ∗ wss ±°
扫描 o证明醉鱼草苷除末端吸收外 o在 vuy ±°处有
较强的吸收 ∀因此 o选定 vuy ±° 为测定的紫外检
测波长 o与5中国药典6一致≈x ∀
4 q2 流动相的选择 选用 ≤t{柱 o用不同比例的乙
腈2水系统为流动相 o发现乙腈2水系统在kuxΒzxl时
分离效果较好 o但此中性溶剂系统中色谱峰有拖尾
现象 o主要是由于醉鱼草苷中的酚羟基产生电离 o因
而在固定相表面存在双保留机制 ∀为此 o在流动相
中加入少量冰醋酸k³ u qxl o使酚羟基的电离被抑
制 o改善峰形 ∀故选定乙腈2v h醋酸水溶液kuxΒzxl
为流动相 ∀样品 ∞ƒ ≠ 与对照品醉鱼草苷的分析图
谱见图 t ∀
图 t 对照品醉鱼草苷与样品的
反相高效液相色谱分析图谱
q醉鱼草苷对照品
q样品k∞ƒ ≠l ≤ q阴性样品 t q醉鱼草苷
4 q3 系统适应性试验
4 q3 q1 理论塔板数与拖尾因子 根据色谱图 t计
算 o可得醉鱼草苷的理论塔板数kl为 vxvu ∀拖尾
因子k×l为 t qs≈z ∀
4 q3 q2 线性考察 精密吸取醉鱼草苷对照品溶液
y o{ ots otu ous Λ¯ 按上述色谱条件进样 o测定峰面积
值 ∀将所测峰面积k Α)与进样量( ΧoΛªl进行线性
回归 o得回归方程 Χ { .yz ≅ tsp z Α n y q|z ≅ tsp v o
ρ s q|||z ∀结果表明 o醉鱼草苷在s qux ∗ s q{w
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第 uy卷第 z期
usst年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quy o²qz
∏¯ qousst
Λª与其色谱峰面积积分值呈良好的线性关系 ∀
4 q3 q3 精密度试验 取同一对照品溶液 o精密吸取
us Λ¯ o连续进样 x 次 o测得 x 次峰面积的结果为
{t|y|v o{tzxts o{xvvuw o{v|yyv o{wvwvu o ΡΣ∆ 为
t .|%( ν xl ∀
4 q4 样品的测定
4 q4 q1 空白试验 按处方比例及工艺制得不含醉
鱼草苷的阴性样品k缺少薄荷l按/样品溶液的制备0
项下配制阴性样品溶液 o进样 us Λ¯ o记录色谱图 o结
果见图 t ∀表明处方中的其他成分不干扰醉鱼草苷
的测定 ∀
4 q4 q2 稳定性试验 精密吸取样品溶液 us Λ¯ o在
s ow o{ otu ouw «测定 o测定的峰面积值结果为
xw||ts oxxyz{s oxuytss oxxxstx oxwsss| o ΡΣ∆ 为
u .v%( ν xl ∀表明样品溶液在 t §内基本稳定 ∀
4 q4 q3 重现性试验 精密称取同一批样品 x份 o按
样品溶液制备方法处理 o进样 us Λ¯ o依法测定 o样品
中醉鱼草苷含量分别为t qst h ot qsu h ot qsv h o
s q|| h ot qsx h oΡΣ∆为 u .u%( ν xl ∀
4 q4 q4 回收率试验 准确称取已测知含量的样品
x份 o分别定量加入醉鱼草苷对照品 s qtw °ªo按样
品溶液制备方法处理 o进样 us Λ¯ o依法测定 o结果 x
次的平均回收率为 || qv h oΡΣ∆为 t .{y%( ν xl ∀
见表 t ∀
4 q4 q5 样品测定 精密称取 v批 ∞ƒ ≠ 样品 o按/样
品溶液的配制0项下制备样品溶液 ∀分别吸取样品
溶液 us Λ¯ o注入液相色谱仪 o依法测定 o结果醉鱼草
苷在 ∞ƒ ≠ 中的含量为 ts qtz °ª#ªp t o ΡΣ∆为
u .uy%( ν vl ∀见表 u ∀
5 讨论
5 q1 实验发现甲醇对样品的溶解性较差 o而 xs h
乙腈可完全溶解样品 o故选择xs h乙腈为样品溶
表 t 样品中醉鱼草苷回收率试验结果
样品量
r°ª
样品含量
r°ª
加入量
r°ª
测定总量
r°ª
回收率
r h
tu qy s qtu{x s qtwss s quztv tsu qs
tw qy s qtw{| s qtwss s qu{{w || qy
tv qw s qtvyz s qtwss s quzv{ |z q|
tw qz s qtw|| s qtwss s qu|tz || q{
tw qz s qtw|| s qtwss s qu{yu |z qv
表 u 样品中醉鱼草苷的含量测定结果
样品号
称样量
r°ª
含量
r°ª#ªp t
平均含量
r°ª#ªp t
ΡΣ∆
r h
t uv qu ts qss ts qs{ t q{u
uv qz ts qu|
uu qx | q|x
u t{ qy | q|y ts qst t qwu
us qt ts qtz
t| q{ | q|s
v ut q{ ts qvv ts qwv v qxt
us qy ts q{w
uu qz ts qtv
剂 ∀实验显示 o超声 t ou ox °¬±溶解情况一致 o溶液
完全澄清 ∀
5 q2 采用高效液相色谱法首次对银翘散抗流感病
毒有效部位群k∞ƒ ≠l中的醉鱼草苷进行定量研究 o
方法简便 !快速 !可靠 o可为其质量控制提供参考 ∀
5 q3 据文献≈{ 报道 o黄酮类物质是抗流感病毒的
活性成分之一 o其具有抑制流感病毒唾液酸酶的活
性和抑制膜融合作用 ∀我们曾对银翘散抗流感病毒
有效部位群中总黄酮进行了定量研究≈| o发现黄酮
类成分是银翘散抗流感病毒作用的主要物质基础之
一 ∀实验中发现醉鱼草苷得率较高 o且具有良好的
生物活性 ∀因此醉鱼草苷的定量测定对于银翘散抗
流感病毒有效部位群k∞ƒ ≠l的质量控制应具有重要
意义 ∀
≈参考文献
≈t 白 刚 o肖洪彬 q中药方剂研究与应用大全 q北京 }中国科学
技术出版社 ot||x q|zu q
≈u 杜力军 o凌一揆 q银翘散实验研究综述 q中成药 ot||u otwkvl }
wt q
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≈x 中国药典 q一部 qusss quy| q
≈y 李延生 o陈建民 q高效液相色谱法测定醉鱼草甙 q中国中药杂
志 ot||| ouwkyl }vxx q
≈z 朱彭龄 o云自厚 o谢光华 q现代液相色谱 q兰州 }兰州大学出版
社 ot||w qxz q
≈{ 彭 勇 o梁少伟 o李文魁 o等 q国外抗流感病毒研究现状 q国外
医药 q植物药分册 ot||| otwktl }z q
≈| 石 钺 o石任兵 o刘 斌 o等 q银翘散抗流感病毒有效部位群
中总黄酮含量的测定 q北京中医药大学学报 ousst ouwkvl }
ww q
≈责任编辑 李 禾
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中 国 中 药 杂 志
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