全 文 ：·1560· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs39卷第10期2008年10月
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小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱研究
刘部湖1’2，蔡光明¨，朱海升1，黄鹤慧1，周伟1’2，熊晗辉1’2
(1．解放军302医院全军中药研究所，北京100039I2．湖南中医药大学药学院．湖南长沙410004)
擒要：目的建立小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱。方法以KromasilC。s为色谱柱，流动相为乙腈一水梯度洗
脱，体积流量1．0mL／min，检测波长260nnl。结果建立了小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱，确定了14个共有
峰，共有峰相对保留时间的RSD为0．02％～1．49％，相对峰面积的RSD为6．12％～58．75％，10批样品的相似度均
大于0．9。结论本方法简单可靠，可用于小叶黑柴胡药材的质量控制。
关键词：小叶黑柴胡I高效液相色谱法l指纹图谱；相似度评价
中圈分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)10—1560—03
HPLCFingerprintofBupleurumsmithiivar．parvifolia
LIUE—hul”，CAIGuang—min91，ZHUHai—shen91，HUANGHe—huil，ZHOUWeil”，XIONGHan—huil’2
(1．302HospitalofPLA＆PLAInstituteofChineseMateriaMedica，Beijing100039，ChinaI2．SchoolfPharmacy，
HunanUniversityofTradilionalChineseMedicine，Changsha410004，China)
Abstract：ObjectiveToestablishtheHPLCfingerprintofBupleurumsmithiivar．parvifolia．
MethodsKromasilC18columnwasused，withacetonitrileandwaterasthemobilephaseingradient
mode，theflowratewas1．0mL／min。andthedetectionwavelengthwas260nm．ResultsTheHPLC
fingerprintofB．smithiivar．parvifoliawasest blishedl T rew re14commonpeaksinthefingerprint
oftensamples．TheRSDoftherelativerelentionmeofthecommonpeakswas0．02％一1．49％andthe
RSDoftherelativepeakareawas6．12％一58．75％．Thesimilarityoftenbatchesofsampleswasover
0．9．ConclusionThemethodissimple，reliable，andcanbeuseforthequalitycontrolofB．smithii
var．parvifolia．
Keywords：BupleurumsmithiiWolffvar．parvifoliaShanetY．Li；HPLC；fingerprintl similarity
evaluation
小叶黑柴胡BupleurumsmithiiWolffvar．
parvifoliaShanetY．Li主要分布于我国的青海、
宁夏、西藏等地，并作柴胡药用，在青海为商品柴胡
的主流品种，具有解热、抗炎、镇痛、保肝和增强免疫
的作用[1]，入药部位主要为干燥地上部分，其化学成
分主要包括黄酮及其苷类(如槲皮素、芦丁等)、木脂
素类、香豆素类、少量皂苷类等。由于受气候、生态环
境的影响，不同生长地区的小叶黑柴胡药材中所含
，的成分差别较大，如果只针对其中某个特定有效成
分或指标成分进行定性、定量分析，不能够有效的控
。
制药材质量。为进一步开发利用小叶黑柴胡这一丰
富资源，笔者采用高效液相色谱法建立了小叶黑柴
胡药材的指纹图谱，并对10批小叶黑柴胡药材进行
了相似度评价，为药材的质量控制提供了更为科学
有效的方法。
1仪器与试剂
HPll00高效液相色谱仪、四元泵、二极管阵列
检测器、HP色谱工作站(美国安捷伦公司)，KQ一
收稿日期：2008·01·02
作者简介：刘鄄湖(1981一)．男。湖南娄底人．硬士研究生，主要从事中药新药研究与开发工作．Tel，(010)66933324
E—mail：shenqian01@163．corn
·通讯作者蔡光明Tel；(010)66933323E—maillcgml004@rip．sina．corn

万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月· 561·
500B型超声波清洗器(江苏昆山)。甲醇、乙腈为色
谱纯，醋酸为分析纯，水为超纯水，小叶黑柴胡药材
10批，来源及采收时间见表1，经解放军302医院全
军中药研究所肖小河教授鉴定为小叶黑柴胡B．
smithiivar．parvifolia。芦丁、槲皮素对照品购于中
国药品生物制品检定所，批号分别为080—9303、081—
9003。
袭l 小叶熏柴胡药材来豫
Table1 Originalresourcesof ruderug
耋鲁 产地 霉篙 薹鲁 产地 詈篙
1 青海省海宴县2005—076 青海省祁连县2005-07
2 青海省海宴县2005—087 青海省祁连县2005—08
3 青海省海宴县2005—098 青海省门源县2005—07
4 青海省刚察县2005-089 青海省门源县2005—08
5 青海省刚察县2005—0910 青海省门源县2005—09
2实验方法
2．1色谱条件：色谱柱为KromasilClB(250mmX
4．6mm，5弘m)；流动相为乙腈(A)一纯化水(B)，梯
度洗脱：0～40min，95％～40％B；40～60rain，
40％～10％B；体积流量：1．0mL／min；检测波长：
260nm；柱温：室温。
2．2对照品溶液的制备：精密称取芦丁、槲皮素对
照品适量，用甲醇溶解并稀释成质量浓度分别为
0．100与0．196mg／mL的溶液，即得。
2．3供试品溶液的制备：精密称取药材粗粉1g，置
具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液25mL，称定质
量，超声处理30rain，放冷，再称定质量，用甲醇补足
减失的质量，摇匀，微孔滤膜(O．45肿)滤过，取续
滤液即得。
2．4测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
10pL，注入液相色谱仪，考察120rain药材的色谱
分离情况，记录60rain色谱图。色谱图见图1。
3方法学考察
3．1 精密度试验：取同一份药材供试品溶液在相同
色谱条件下连续进样5次，考察色谱峰保留时间和
峰面积的一致性，结果其共有峰的相对保留时间和
相对峰面积RSD均小于2．oH，说明仪器精密度
良好。
3．2稳定性试验：取同一份药材供试品溶液，在相
同色谱条件下分别在0、2、4、8、16、24h进样，HPLC
检测，其共有峰的相对保留时间和相对峰面积RSD
均小于2．3％，表明样品24h内稳定性较好。
3．3重现性试验：精密称取同一批药材粗粉5份，
按照供试品溶液的处理方法平行制得5份供试品溶
O 10 20 30 40 50
t／rain
6一芦丁9·槲皮泵
6-rutin9-quercetin
圈1对照品(A)和样品(B)HPLC色图谱
Fig．1HPLCChromatogramofreference
substance(A)andsample(B)
液。HPLC检测，其共有峰的相对保留时间RSD小
于I．9％，相对峰面积RSD小于2．8％，表明方法重
现性良好。
4 HPLC指纹图谱的建立与相似度分析
4．1共有峰确认：采用中药色谱指纹图谱相信度评
价系统软件(2004A)对上述10批药材样品图谱进行
指纹峰辨认和相似度分析，以样品1图谱作为参照
谱，多点校正后进行自动匹配[2]。自动匹配结果显
示，10批药材样品色谱图共有峰为14个，其中第6
号峰即15rain左右的色谱峰为芦丁对照品峰，第9
号峰即24rain左右的色谱峰为槲皮素对照品峰。根
据10批黑柴胡样品色谱分析结果，选定色谱图中芦
丁色谱峰为参照峰(s)，设其保留时间和峰面积分别
为1，其他各共有峰的保留时间和峰面积分别与参照
峰的保留时间和峰面积相比，计算各样品指纹图谱
中共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果分别
见表2、3。
分析结果显示，14个共有峰相对保留时间重现
性较好，RSD为0．02％～1．49％；相对峰面积差异
较大，其RSD为6．12％～58．75％。
4．2相似度评价：将10批药材图谱数据导人中药
色谱指纹图谱相似度评价系统软件，自动匹配后生
成对照图谱，以此作为小叶黑柴胡药材的对照指纹
图谱，进行谱峰差异性评价和整体相似性评价。结果
10批样品图谱相对于对照指纹图谱的相似度分别
为0．926、0．948、0．947、0．927、0．943、0．935、0．959、
0．903、0．934、0．957。10批样品的相似度计算结果
均大于0．9，说明此产地的药材有较好的一致性。生
成的共有模式对照指纹图谱见图2(其中Sl--S10为
10批药材图谱，R为生成的对照指纹图谱)。

万方数据
·1562· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第10期2008年10月
衰2 10批黑柴胡药材指纹图谱共有■的相对保留时间
Table2 Relativeretentionmeofcommonpeaksinfingerprintoftebatchesofsamples
批 相对保留时间
一—-_●^—●__●—__—--—__●_--_-__—●_—--●__--—_-—-_——-_——__●_-__—————————_，—————————————————●-—，_—————————-__●——_●●_-●——_——__————_-_—-__—--——_———●——I_-—-_-一
次 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 峰9 峰lO 峰11 峰12 峰13 峰14
2 0．0860．1490．2650．4880．8641．0001．1021．2971．6092．4882．5302．6503．1413·192
3 0．0870．1500．2660．4840．8661．0001．1021．2931．6102．4892．5312．6503．1453·199
4 0．0880．1520．2690．4880．8671．000I．1021．2931．6102．4882．5302．6503．1443·193
5 0．0860．1490．2650．4790．8671．0001．1031．2901．6122．4982．5402．661 3·i583·210
6 0．0860．1490．2640．4760．8711．0001．1041．2901．6122．5022．5442．6653．1643·215
7 0．0860．1470．2630．4710．8671．0001．1051．2891．6142．5022．5452．6653．1673．218
8 0．0860．1490．2630．4700．8671．0001．1041．2871．6122．5022．5442．6663．1693．219
9 0．0860．1480．2630．4680．8671．0001．1041．2871．6142．5062．5492．6703．1763．225
10 0．0860．1480．2620．4700．8671．0001．1041．2881．6142．5032．5452．6663．1703．219
裹3 10批小叶黑柴胡药材指纹图谱共有峰的相对峰面积
Table3 Relativepeakareasofcommonpeaksinfingerprintoftebatchesofsamples
批 相对峰面积
次 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 峰9 峰10 峰11 峰12 峰13 峰14
1 0．3480．2160．0790．1940．3981．0000．0920．0950．1080．2630．5890．1270．1000．210
2 0．3560．2450．0780．2040．3921．0000．0860．0910．1080．2720．6120．1310．1180．231
3 0．3690．2290．0780．1990．3931．0000．0930．0890．1080．2690．6070．1280．1070．184
4 0．3310．2400．1150．2080．3991．0000．0860．0960．1210．2730．6160．1300．1150．211
5 0．3520．2340．0820．2170．3971．0000．0820．0900．1230．2720．6170．1300．5100．232
6 0．3800．2380．091 0．2840．4051．0000．0800．0880．1050．2790．6340．1350．5500．255
7 0．3360．2200．0730．28l 0．3981．0000．0850．0830．0940．2720．6240．1300．5990．261
8 0．3110．2840．0930．2790．2801．0000．0870．1110．1490．1800．4310．0690．3300．146
9 0．3270．2550．1010．2780．2801．0000．0890．1130．1500．1780．4280．0680．3490·149
10 0．3220．3100．0960．2840．2821．0000．0880．1220．1820．1800．4310．0690．3380·144
L^一LJ山JJ
扯乩，I卜． ．月 卜一L上一L‘J^一¨ JlJ．，^．_LJL、一～一』H．一』l^一一^^■o-，●
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忆山
L^一 嶂^．^一^～k～．埔，4～．1
t’，·。hp¨ ¨J．～．j』～～⋯，埔，’～。叫¨ ～‘J¨ hUJoJ八一—．————J1．_L，．^．—．。^J
R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
Sl
O．00 8．69 17．38 26．07 34．78 43．45 52．14 60．83
t／rain
圈2 10批小叶黑柴胡药材生成的对照指纹图谱模式
Fig．2HPLCReferencefingerprintmodeproduced
bycruderugoftenbatchesofsamples
5讨论
5．1流动相的选择：流动相条件优化时试验了3种
流动相系统：甲醇一水、甲醇一0．1％醋酸、乙腈一水，并
尝试了这3种流动相系统的多种梯度洗脱程序，结
果表明以乙腈一水线性梯度洗脱时各色谱峰分离度
和峰形都较好。因而选用乙腈一水线性梯度作为小叶
黑柴胡药材的HPLC指纹图谱的流动相。
5．2检测波长的选择：由于选用了二极管阵列检测
器，比较了230、260、280、320、360niil5个不同波长
下的色谱图，结果280、320、360nm下色谱图灵敏度
均较低，峰数目少，而230nlTl色谱图的基线不平，故
这些波长不宜作为指纹图谱检测波长，而260nm下
色谱图分离效果较好，峰形较理想，因而选择260
nm为指纹图谱检测波长。
5．3参照物的选定：小叶黑柴胡药材中主要含黄酮
类成分。亦是其有效成分，其中芦丁的量最高，且性
质稳定，对照品易得，故选择芦丁作为参照物。
5．4方法学研究与样品测定结果表明，小叶黑柴胡
药材指纹图谱性检测方法合理可行，10批小叶黑柴
胡药材指纹图谱特征峰的相对保留时间具有较好的
重现性，可检测到小叶黑柴胡药材的特征成分的存
在；由于受气候和生态环境等因素的影响，各指纹峰
相对峰面积差异较大，反映了小叶黑柴胡药材的特
征成分有差异，可据此评价小叶黑柴胡药材的质量。
5．5指纹图谱具有整体性和模糊性的特点，当其用
于中药鉴别时，提供的信息较用任何单一化学对照
品作为鉴定的依据要丰富得多[3]。本实验基于整体
色谱的面貌辨认样品的真实性出发，通过匹配确定
了14个特征峰，它们的峰位和大致的比例关系，作
为一个整体，清楚地表达了指纹图谱鉴别的专属性。
样品之间的差异没有影响到对小叶黑柴胡指纹图谱
整体面貌的“共性特性”，不影响真实性的判断。
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万方数据
小叶黑柴胡药材的HPLC指纹图谱研究
作者： 刘鄂湖， 蔡光明， 朱海升， 黄鹤慧， 周伟， 熊晗辉， LIU E-hu， CAI Guang-ming，
ZHU Hai-sheng， HUANG He-hui， ZHOU Wei， XIONG Han-hui
作者单位： 刘鄂湖,周伟,熊晗辉,LIU E-hu,ZHOU Wei,XIONG Han-hui(解放军302医院全军中药研究所
,北京,100039;湖南中医药大学药学院,湖南,长沙,410004)， 蔡光明,朱海升,黄鹤慧,CAI
Guang-ming,ZHU Hai-sheng,HUANG He-hui(解放军302医院全军中药研究所,北京,100039)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(10)
被引用次数： 3次

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