全 文 ：间的延长呈增长的趋势, 说明 10% PEG 6000 处理
1～ 16 h 可能不适宜用于模拟黄芩的干旱胁迫。
20% PEG 6000 处理 4 h 后, 主根长度、子叶短柄和
茎的长度随着处理时间的增长均呈下降趋势, 而根
冠比却呈现上升的趋势。根冠比是衡量植物抗旱性
的重要生理指标之一[8 ] , 研究结果表明黄芩幼苗在
模拟干旱的条件下对逆境进行了自我调节, 可以选
择 20% PEG 6000 处理黄芩种子 8 h 作为模拟干旱
条件, 用于幼苗黄芩抗旱材料的选育工作。
参考文献:
[ 1 ]　徐国钧, 何宏贤, 徐珞珊, 等 1 中国药材学 [M ]1 北京: 中国 医药科技出版社, 19961[ 2 ]　龚子端, 李高阳 1 PEG 干旱胁迫对植物的影响 [J ]1 河南林业科技, 2006, 26 (3) : 212231[ 3 ]　种子工作手册编写组1 种子 [M ]1 上海: 上海科学技术出版社, 19791[ 4 ]　 In ternational Seed T esting A ssociation1 In ternational ru lesfo r seed testing [J ]1 S eed S ci T echnol, 1999, 27 (Supp l) :272321[ 5 ]　宋松泉, 程红焱, 龙春林, 等 1 种子生物学研究指南 [M ]1北京: 科学出版社, 20051[ 6 ]　张百俊, 杨和连, 李贞霞, 等 1 PEG 渗调西葫芦种子效应研究 [J ]1 种子, 2006, 25 (9) : 762781[ 7 ]　Gergely I1 Po lyethylene glyco l induced w ater stress effectson app le seedlings [J ]1 A m S oc H ortis S ci, 1980, 105: 85428571[ 8 ]　张国萍, 倪日群, 赵新亮, 等 1 水引发对干旱胁迫下水稻种子发芽与幼苗生长的影响 [J ]1 种子, 2002, 21 (2) : 202221
夏枯草 HPLC 指纹图谱的研究①
刘　伟, 丁海杰, 孙曙光
(河南中医学院 分析测试中心, 河南 郑州　450008)
摘　要: 目的　建立夏枯草 H PL C 指纹图谱分析方法。方法　采用高效液相色谱法, 色谱柱为 Betasil C18
(250 mm ×416 mm , 5 Λm ) 柱, 以乙腈2011% 磷酸梯度洗脱, 0～ 50 m in 时乙腈 10% →25% , 50～ 60 m in 时乙腈
25% →32% ; 体积流量为 017 mL öm in; 检测波长为 210 nm , 柱温 25 ℃。结果　建立了夏枯草的指纹图谱, 确定了
16 个共有峰, 各夏枯草样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在 0195 以上, 可以用于夏枯草药材的定性鉴别。结
论　此方法简单、准确、重现性好, 为夏枯草的质量控制标准提供了有效的方法。
关键词: 夏枯草; 高效液相色谱法; 指纹图谱
中图分类号: R 28217　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 02- 0272- 03
F ingerpr in t ana lysis of Sp ica P runellae by HPLC
L IU W ei, D IN G H ai2jie, SUN Shu2guang
(Cen ter of A nalysis and M easurem ent, H enan Co llege of T radit ional Ch inese M edicine, Zhengzhou 450008, Ch ina)
Abstract: Objective　To estab lish a m ethod of fingerp rin t analysis on S p ica P runellae by H PL C1
M ethods　T he H PL C m ethod w as u sed, ch rom atograph ic condit ion s w ere Betasil C18 co lum n (250 mm ×
416 mm , 5 Λm ) , aceton it rile2011% pho sph ric acid system as mob ile phase, 0- 50 m in aceton it rile 10% →
25% , 50- 60 m in aceton it rile 25% →32% ; flow rate 017 mL öm in; detect ive w avelength at 210 nm , co l2
um n temperatu re 25 ℃1 Results　E stab lish ing the fingerp rin t of S p ica P runellae, 16 common peak s w ere
found in the H PL C fingerp rin t of S p ica P runellae and good sim ilarit ies w ith co rrela t ion coeff icien ts over
0195 w ere found in the fingerp rin ts betw een the herb s from differen t sou rces and standard fingerp rin t,
w h ich cou ld be u t ilized fo r the iden t if ica t ion of S p ica P runellae1 Conclusion　T he m ethod is accuate, sim 2
p le, and cou ld be u sed fo r the quality con tro l of S p ica P runellae1
Key words: S p ica P runellae; H PL C; fingerp rin t
　　夏枯草是唇形科夏枯草属植物夏枯草 P runella
vu lg a ris L 1 干燥果穗, 有时也以全草入药, 因“此草
夏至后即枯”故名, 为中医临床常用的一味中药。夏
枯草始载于《神农本草经》, 列为下品, 其味“苦辛寒,
治寒热瘰疬, 鼠瘘头痛, 破症, 散瘿结气, 脚肿湿痹,
轻身, 一名乃东, 生川谷”。其味苦、性寒、辛, 具有清
肝、明目、散结、消肿、止痛之功效。用于目赤肿痛、目
珠夜痛、羞明流泪、头痛眩晕、瘰疬、瘿瘤、乳痈肿
·272· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
① 收稿日期: 2007204210
作者简介: 刘　伟　T el: (0371) 65575838　E2m ail: hn liuw ei2088@ sina1com
痛[1 ]。临床多用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺
增生、高血压、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎等疾
病[2 ]。夏枯草中主要含有熊果酸、齐墩果酸、迷迭香
酸、黄酮类及糖类等多种成分。本实验采用高效液相
色谱法建立夏枯草的指纹图谱分析方法, 为科学控
制夏枯草质量提供参考。
1　仪器与试药
D ION EX Summ it 系统高效液相色谱仪 (美国)
(P680 H PL C pump ) ; D ION EX A S I- 100 自动进样
器; D ION EX PDA - 100 检 测 器; D ION EX
Ch rom eleon 色谱工作站; KQ - 500 型数控超声波
清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;M et t ler A E240
十万分之一天平 (瑞士) ; FA 2004A 万分之一天平。
迷迭香酸对照品 (批号: 12312050419, 中药固体
制剂制造技术国家工程研究中心) ; 夏枯草药材, 经
河南中医学院药学院陈随清教授鉴定为夏枯草, 样
品来源见表 1。乙腈为色谱纯, 水为双蒸水, 其他试
剂均为分析纯。
表 1　样品来源
Table 1　Sources of samples
样品编号 来　源
1 河南省栾川县
2 河南省桐柏县
3 河南省桐柏县
4 河南省泌阳县
5 河南省西峡县
6 河南省卢氏县
7 安徽省黄山市
8 安徽省亳州市
样品编号 来　源
9 江苏省苏州市
10 四川省南充市
11 贵州省贵阳市
12 湖南省益阳市
13 湖北省宜昌市
14 河北省安国市
15 山东省临沂市
16 广东省广州市
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱Betasil C 18 (200 mm ×416
mm , 5 Λm ) ; 流动相: 乙腈2011% 磷酸梯度洗脱, 0～
50 m in 时乙腈 10% →25% , 50～ 60 m in 时乙腈
25% →32% ; 记录时间为 60 m in; 体积流量: 017
mL öm in; 柱温: 25 ℃; 检测波长: 210 nm ; 进样体积:
10 ΛL。
212　供试品溶液制备: 1～ 16 号夏枯草样品粉末
(过 2 号筛) 各 1 g, 精密称定, 置于 100 mL 锥形瓶
中, 用移液管精密加入甲醇 50 mL , 称定质量, 超声
提取 1 h, 冷却, 再称定质量, 用甲醇补足减失的质
量, 摇匀, 滤过。精密量取续滤液 25 mL , 浓缩定容至
5 mL 量瓶中。用微孔滤膜 (0145 Λm ) 滤过, 滤液作
为供试品溶液。
213　对照品溶液制备: 精密称取迷迭香酸对照品
4140 m g, 置于 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 作为
对照品溶液。
214　稳定性试验: 取同一批供试品溶液, 在相同的
条件下分别于 0、2、4、8、12 h 进样分析, 采用国家药
典委员会指纹图谱评价软件计算出相似度均在
0199 以上, 主要峰相对面积的 R SD 值均小于
310%。
215　精密度试验: 取同一供试品溶液, 在相同条件
下分别进样 5 次, 计算出相似度均在 0199 以上, 主
要峰相对面积的R SD 值均小于 110%。
216　重现性试验: 取同一批样品, 在相同条件下分
别称取 5 份, 制备供试品溶液, 进样, 记录结果, 计算
出相似度均在 0199 以上, 主要峰的相对峰面积的
R SD 值均小于 210%。
217　指纹图谱的建立: 精密吸取供试品溶液 10ΛL , 进样, 其中 16 号峰为迷迭香酸的峰, 以 7 号峰
为参照标示出夏枯草的H PL C 指纹图谱中 16 个共
有峰作为可以构成指纹图谱稳定的特征峰, 样品色
谱图见图 1。将所得的色谱图数据导入国家药典委
员会指纹图谱评价系统, 3、7、12、16 号峰作为
M arker 峰, 进行色谱峰匹配, 结果见图 2。16 批夏枯
草药材 H PL C 指纹图谱共有峰的相对保留时间
R SD 值最大为 1151% , 最小为 01152% , 均小于
2% , 其共有峰的相对峰面积差别较大。16 批夏枯草
药材H PL C 指纹图谱与对照指纹图谱 (16 批夏枯草
药材指纹图谱形成的)相似度评价结果见表 2。
töm in
图 1　夏枯草 (5 号样品) HPLC 指纹图谱
F ig11　HPLC F ingerpr in t of Sp ica P runellae (No15)
3　讨论
311　样品处理方法的选择: 曾采用 80% 甲醇、水、
95% 乙醇、甲醇、乙醚作为提取溶剂。结果发现水为
提取溶剂所得的供试品溶液峰数甚多, 很难完全分
离, 而且特征性不明显; 乙醚为提取溶剂的样品溶液
所得的供试品峰数甚少, 80% 甲醇和95% 乙醇为
·372·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月
töm in
图 2　16 批样品匹配色谱图
F ig12　M atched chromatogram s of 16 batches of sample
表 2　相似度评价结果
Table 2　Results of sim ilar ity eva luation
样品号 相似度
1 01995
2 01999
3 01997
4 01997 样品号 相似度5 019976 019977 019998 01998 样品号 相似度9 0199010 0199711 0199812 01998 样品号 相似度13 0198714 0196915 0198816 01973
溶剂所得供试品溶液色谱峰与甲醇为溶剂所得供试
品溶液色谱峰差别不大, 为利于操作, 采用甲醇作为
提取溶剂。采用甲醇作为提取溶剂用超声波振荡提
取法和水浴加热回流提取法进行试验, 结果显示两
种提取方法所得图谱中峰数与各峰面积未见明显差
别。考虑到采用超声波振荡提取法简便易行, 所以采
用超声波振荡提取法进行供试品溶液的制备。
312　色谱条件的选择: 本实验所用高效液相色谱条
件是在参考有关文献的基础上[3～ 7 ]经过多次优化、
筛选而确定的。实验采用二极管阵列紫外检测器作
为检测工具, 首先在上述色谱条件下采用全波长进
行测定, 并采集其三维色谱图, 通过察看该三维色谱
图在所有波长下的出峰的多少, 和各成分的分离情
况以及各色谱峰的丰度等综合考虑, 最后选定检测
波长为 210 nm。曾采用甲醇2水、乙腈2水、乙腈2磷酸
水作为流动相进行洗脱, 以乙腈2011% 磷酸水为流
动相得到的图谱中色谱峰较多, 峰形和分离度都较
好, 故选定乙腈2011% 磷酸水作为流动相。考察体积
流量时发现流动相体积流量为 110 mL öm in 时, 有
些峰始终分不开, 流动相为 017 mL öm in 时, 各峰均
有较好分离, 故采用流动相为 017 mL öm in。
313　夏枯草指纹图谱与地域的关系: 本实验所用夏
枯草药材主要采自于河南、安徽、江苏、湖南等 10 个
省。结果表明, 不同产地的夏枯草药材色谱图中各共
有峰相对保留时间对应得非常好, 但共有峰相对峰
面积差别较大, 这可能与药材的产地土壤条件、种植
方法以及采集时间等因素有关。这表明, 夏枯草中各
成分的量与产地和种植方法有密切关系。
314　夏枯草指纹图谱的专属性: 从 16 批药材的整
体看来, 各样品中共有峰的相对保留时间严格一致,
各个共有峰的相对峰面积变化趋势也一致。因此, 可
以说明该夏枯草指纹图谱具有专属性, 可以为夏枯
草药材的品质评价、质量标准制定提供依据。
参考文献:
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2008 海峡两岸CSNR 全国第八届天然药物资源学术研讨会通知 (第一轮)
　　2008 海峡两岸CSN R 全国第八届天然药物资源学术研讨会拟定于 2008 年 7 月中旬在贵州省贵阳市召开, 会期 3 天。本届学术研讨会由
CSN R 天然药物资源专业委员会、中国药材GA P 研究促进会 (香港)主办, 贵州信邦制药股份有限公司承办, 贵州中医学院等协办。现在开始进
行学术研讨会报名和学术论文征集工作。
1　主题: 加强产学研结合, 促进中药资源产业化发展。
2　交流研讨内容: 中药资源调查的新技术、新方法研究进展; 中药资源生态及适宜区划研究; 中药材GA P 研究与实践; 中药材生产基地的
规范化建设; 中药资源产业区域经济发展与产学研结合的有效模式和机制研究; 中药及天然药物资源化学与资源高效利用研究; 民族药物资源
的研究现状与进展; 中药及天然药物资源学科基础研究及学科建设。
3　会议论文征集: 会议论文可围绕主题和研讨内容, 其内容包括前瞻性综述、学科现状、前沿及展望, 系统性研究成果, 原创性研究工作等。
4　征文要求: 请向会议提供W o rd 软件录入的论文电子版。并同时提供论文打印稿一份, 请打印在A 4 纸上, 上下各空 3 cm , 左右空 212
cm , 用激光打印机输出。
5　会议时间和地点: 具体时间和地点请见第二轮通过。也可登陆CSN R 天然药物资源专业委员会网站 (h ttp: öö202119512101136)或致电
查询会议通知。
联系地址: 江苏省南京仙林大学城仙林大道 138 号　邮政编码: 210046　南京中医药大学药学院CSN R 天然药物资源专业委员会办公室
电　话: 025285811133, 025285811132, 025285811511　　传　真: 025285811524
联系人: 陈丽红　乐　巍　　电子信箱: tryw 2008@ 1261com
·472· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 2 期 2008 年 2 月