全 文 ：31 3 芦头目前已作为低档远志被普通使用。聚类
分析结果提示, 芦头与传统远志商品药材有一定差
异,这种差异主要是由于成分量低引起的,而主要成
分分析(另文发表)和相似度计算结果则提示芦头可
以作为远志使用,但质量较差。
314 色谱指纹图谱是目前能够为国内外广泛接受的
一种中药质量评价模式。色谱图中所显示的峰数及
峰高或峰面积,代表了中药所含主要化学成分的种类
及量。通过指纹图谱的特征性,能有效鉴别真伪或产
地,通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例, 能有效
控制质量[ 9]。在远志有效成分及作用机制尚不明确
时,制定指纹图谱用于控制质量,具有重要意义。
参考文献:
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五柱绞股蓝总皂苷和总黄酮的季节性变化
刘世彪, 严四华,鲁 云,郭家平*
(吉首大学 植物保护与利用湖南省高校重点实验室, 湖南 吉首 416000)
摘 要:目的 测定五柱绞股蓝茎和叶中的总皂苷和总黄酮的量, 并揭示其在不同季节内的动态变化规律。方法
以绞股蓝皂苷和芦丁为对照品,采用紫外可见光分光光度计在 550 nm 处测定皂苷吸光度, 在 510 nm 处测定黄酮
吸光度。结果 五柱绞股蓝茎、叶中的总皂苷和总黄酮的量在 5月至 11 月的生长发育季节内, 均表现为先上升后
下降的变化规律,以 9 月的量最高, 且叶中的量高于茎中的量。结论 五柱绞股蓝采收可安排在 8~ 9 月的花果期
进行。
关键词:五柱绞股蓝; 总皂苷; 总黄酮; 季节变化
中图分类号: R2821 6 文献标识码: A 文章编号: 025322670( 2009)0420648204
五柱绞股蓝 Gynostemma p entagynum Z. P.
Wang 是葫芦科绞股蓝属的多年生草质藤本植物,
主要分布在我国的湖南、贵州、湖北和重庆交界的武
陵山区。五柱绞股蓝在该区表现为常绿习性, 与绞
股蓝一样,含有绞股蓝总皂苷成分[ 1]。绞股蓝总皂
苷对人体具有多种生理活性及广泛的临床应用[ 2]。
黄酮类化合物是绞股蓝含有的又一类药用活性成
分,绞股蓝总黄酮对动物心血管系统具有保护作
用[ 3]。虽然目前有关绞股蓝总黄酮的定量测定已涉
及9种植物[ 4, 5] ,但尚未见关于五柱绞股蓝总黄酮的
报道。因此,本实验对五柱绞股蓝茎和叶中的总皂
苷和总黄酮的量及其在不同生长发育季节中的动态
变化进行了检测,以期为该种植物的基础研究和综
合开发利用提供科学依据。
1 材料与仪器
11 1 材料:五柱绞股蓝采自吉首大学生物园,由吉
首大学植物教研室陈功锡教授鉴定为五柱绞股蓝
G. pentagynum Z. P . Wang。分别于 2007年 5月
至 11月的每月中旬采集生长良好的植株地上部分,
将茎和叶分开, 置于 60 e 烘箱内烘干 24 h 至恒
重,粉碎过 10目筛,保存在封口袋中。
11 2 仪器与试剂: FA ) 2004 电子分析天平 (上海
天平仪器厂) , KQ ) 250E 型超声波清洗器 (昆山市
超声仪器有限公司) , LD25 ) Z 低速自动平衡离心
机 (北京医用离心机厂) , 752C型紫外可见光分光
光度计, NJL07 ) S 微波提取仪 (上海亚荣生化仪器
#648# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
* 收稿日期: 2008206219 基金项目:湖南省教育厅自然科学基金资助项目 ( 08C709) ; 吉首大学博士基金资助项目作者简介:刘世彪( 1965 ) ) ,男,土家族,湖南保靖县人,副教授,博士,主要从事结构植物学和植物资源学研究。
T el : 13707430753 E2mail : l iushibiao 1@163. com
厂) , FW100型高速万能粉碎机 (天津泰斯特仪器
有限公司) , RE252 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪器
厂)。绞股蓝皂苷对照品购于中国药品生物制品检
定所,绞股蓝总黄酮以芦丁为对照品 (质量分数>
99% ) ,购于成都思科华生物技术有限公司。试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
21 1 对照品溶液的制备
21 11 1 总皂苷对照品溶液制备:准确称取 105 e
干燥至恒重的绞股蓝皂苷对照品 10 mg, 加甲醇溶
解并定容于 10 mL 量瓶中, 摇匀, 配成质量浓度为
1 mg/ mL 的绞股蓝皂苷对照品溶液。
21 11 2 总黄酮对照品溶液制备:准确称取 105 e
干燥至恒重的芦丁对照品 71 5 mg, 用乙醇溶解并定
容至 50 mL 量瓶中, 配成质量浓度为 150 Lg/ mL
的芦丁对照品溶液。
21 2 供试品溶液的制备
21 21 1 总皂苷溶液的制备:精密称取五柱绞股蓝茎
或叶粉末 11 0 g,放入具塞锥形瓶中。用 75% 乙醇
10 mL 浸泡 14 h, 于 60 e 水浴中超声提取 40
min。收集提取液, 残渣 2 次换加 75% 乙醇 10
mL,每次超声提取 20 min。合并 3次提取液, 5 000
r/ min 离心 5 min。上清液减压回收乙醇,至溶液仍
含有 15% ~ 20% 的乙醇, 于 4 e 冰箱中静置 36 h。
5 000 r/ min 离心 5 min,取上清液减压回收乙醇至
溶液无醇味。样品液用水饱和的正丁醇萃取 4次至
正丁醇无色。弃去水层, 合并萃取液,减压回收正丁
醇。加入 5 mL 甲醇溶解提取物, 5 000 r/ min 离心
5 min。上清液加入 5倍量的乙醚,静置 24 h, 5 000
r/ min 离心 5 min。弃去上层含有叶绿素的乙醚液,
下层沉淀于 60 e 烘干, 即得五柱绞股蓝的粗总皂
苷。以甲醇溶解并定容至 50 mL, 作供试样品溶液。
21 21 2 总黄酮溶液的制备:精密称取五柱绞股蓝粉
末 01 5 g 于圆底烧瓶中,加入 75% 乙醇 60 mL, 将
烧瓶放入微波提取仪腔内, 在圆底烧瓶口连接蛇形
冷凝管,通入冷凝水, 调整微波提取仪功率为 560、
500、400、350 W, 反应时间各 15 min。将提取液冷
却后减压抽滤, 并用少量 25% 乙醇溶液洗涤滤渣,
合并滤液,减压浓缩至无醇味,倒出烧瓶内溶液, 并
用 30 mL 热水分 3次洗涤烧瓶。抽滤后将滤液倒
入分液漏斗,用 75 mL 氯仿分 3次萃取脱脂 (除去
叶绿素、胡萝卜素等脂溶性大分子) ,待完全分层后,
弃去氯仿, 收集水层, 蒸干水液, 残渣用 95% 乙醇
溶解,滤过,定容至 100 mL 作供试样品溶液。
21 3 标准曲线绘制
21 31 1 绞股蓝皂苷的标准曲线:精密吸取绞股蓝皂
苷对照品溶液 0、20、40、60、80、100、120 LL, 分别加
入 10 mL 具塞试管中, 热风吹干, 各自加入 5% 的
香草醛2冰醋酸液 01 2 mL 和高氯酸 01 8 mL, 混合
均匀,密塞, 置于 60 e 恒温水浴锅中加热 15 min,
冷却至室温后加入冰醋酸 5 mL。以 0 LL 管为空
白对照,摇匀后用紫外可见光分光光度计在 550 nm
处测其吸光度 ( A)。以 A 为纵坐标, 质量浓度 (C)
为横坐标,绘制标准曲线,回归方程 A= 01 168 C-
01 225 9, r= 01 994,皂苷在 20~ 120 Lg 存在良好的
线性关系。
21 31 2 绞股蓝黄酮的标准曲线:精密吸取芦丁对照
品溶液 0、1、2、3、4、5 mL, 分别移入 10 mL 量瓶中,
各加乙醇稀释至 5 mL, 再加入 5% 亚硝酸钠溶液
01 3 mL, 震荡后放置 5 min, 加 10% 硝酸铝溶液
01 3 mL,摇匀后放置 6 min,再加 11 0 mol/ mL 氢氧
化钠 2 mL, 用 30% 乙醇定容至刻度。以 0 mL 管
为空白对照, 摇匀后在 510 nm 处测定 A 值,以 A
为纵坐标,质量浓度 ( C) 为横坐标,绘制标准曲线,
回归方程 A= 0. 135 9 C- 01 128 5, r= 01 993,芦丁
在 150~ 750 Lg存在良好的线性关系。
21 4 精密度试验:精密吸取总皂苷对照品溶液 100
Lg, 按 21 31 1项下自/热风吹干0起操作,测定 A 值,
连续测定 6 次, 结果表明总皂苷 A 值的 RSD 为
11 18%。精密吸取总黄酮对照品溶液 21 0 mL, 按
21 31 2项下自/各加乙醇稀释至 5 mL0起操作, 测定
A 值,连续测定 6次,结果表明总黄酮 A 值的 RSD
为 01 86%。
21 5 重现性试验:称取 7 月的绞股蓝叶粉末 11 0
g,依法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液 100
LL,按 21 31 1项下自/热风吹干0起操作,测定 A 值,
总皂苷质量分数的 RSD为 11 08% ( n= 6 )。称取7
月的绞股蓝叶粉末 01 5 g, 依法制备供试品溶液。
精密吸取供试品溶液 21 0 mL,按 21 31 2项下自/各
加乙醇稀释至 5 mL0起操作,测定 A 值, 总黄酮质
量分数的 RSD为 11 76% ( n= 6 )。
21 6 稳定性试验:精密吸取 7月的绞股蓝叶总皂苷
供试品溶液 100 LL,按 21 31 1项下自/热风吹干0起
操作,每隔 30 min 测定其 A 值, 结果表明在 3 h 内
总皂苷 A 值的 RSD 为 11 52%。精密吸取 7月的
绞股蓝叶总黄酮供试品溶液 21 0 mL,按 21 31 2项下
自/各加乙醇稀释至 5 mL0起操作,每隔 30 min 测
定其 A 值, 结果表明在 3 h 内总黄酮 A 值的 RSD
#649#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
为 11 28%。
21 7 加样回收率试验:精密吸取 7月的绞股蓝叶总
皂苷供试品溶液 50 LL, 准确加入等量的皂苷对照
品溶液,得供试品溶液 100 LL, 按 21 31 1项下自/热
风吹干0起操作, 测定 A 值, 计算得总皂苷质量分
数, 结果平均回收率为 1021 33% , RSD 平均为
11 85% (n= 6)。精密吸取 7月的绞股蓝叶总黄酮
供试品溶液 1 mL, 准确加入等量的芦丁对照品溶
液,得供试品溶液 2 mL,按 21 31 2项下自/各加乙醇
稀释至 5 mL0起操作, 测定 A 值,计算得总黄酮质
量分数,结果平均回收率为 1001 68%, RSD 为 11 78
(n= 6 )。
21 8 样品测定:精密吸取各样品总皂苷供试品溶液
100 LL,按 21 31 1项下自/热风吹干0起操作,测定 A
值。按照线性回归方程, 计算样品中的总皂苷质量
分数见图 1。精密吸取各样品总黄酮供试品溶液
21 0 mL,按 21 31 2项下自/ 各加乙醇稀释至 5 mL0
起操作,测定 A 值, 按照线性回归方程,计算样品中
的总黄酮质量分数见图 2。
图 1 不同季节五柱绞股蓝茎和叶中的总皂苷
Fig. 1 Tota l gypenosides in stems and leaves
of G. pentagynum in diff er ent seasons
图 1显示, 在 5~ 11月的生长发育过程中,五柱
绞股蓝茎、叶中的总皂苷质量分数变化呈先升高后
降低的单峰曲线,以 9月份最高, 茎为 11 36%, 叶为
11 39%。在 5~ 7月的营养生长期,茎中的总皂苷质
量分数从 11 15% 上升到 11 34%, 叶中从 11 20% 上
升到 11 39%。在 8~ 9月的花果期, 茎的皂苷继续
从 11 35% 上升到 11 36% ,叶的皂苷从 11 42% 上升
到 11 44%。而在 10~ 11 月的果后期,总皂苷量逐
渐下降, 茎从 11 21% 下降至 11 11%, 叶从 11 28%
下降至 11 16%。整个生长过程中, 叶中的总皂苷量
都要比茎中的总皂苷量高,平均高出 41 42%。
图 2显示, 不同季节的五柱绞股蓝茎、叶中的总
黄酮质量分数也呈单峰型变化曲线,以 9月份最高,
茎为 01 111% ,叶为 01 141%。在 5~ 7月的营养生
图 2 不同季节五柱绞股蓝茎和叶中的总黄酮
Fig. 2 Tota l flavoniods in stems and leaves
of G. pentagynum in diff er ent seasons
长期,茎中的总黄酮从 01 093% 上升到 01 096% ,叶
中从 01 083% 上升到 01 126%。在 8~ 9月的花果
期,茎的黄酮继续从 01 099% 上升到 01 111%, 叶的
黄酮从 01 137% 上升到 01 141%。而在 10~ 11月
的果后期, 总黄酮量逐渐下降, 茎从 01 101% 下降
至 01 099% , 叶从 01 114% 下降至 01 108%。整个
生长发育过程中, 叶中的总黄酮量也比茎中的总黄
酮量要高,平均高出 181 47%。
3 讨论
本实验表明, 五柱绞股蓝的总皂苷量具有季节
性变化规律。在 4~ 7 月的营养生长期其量逐渐增
加, 8~ 9月的花果期量较高, 随着冬季来临, 皂苷量
降低。这种季节性变化与绞股蓝营养器官中的总皂
苷量季节性变化相似, 但绞股蓝以 10月的果熟期量
最高[ 6] , 这种差异可能与五柱绞股蓝的开花结果时
间较早有关。五柱绞股蓝叶中的总皂苷量高于茎中
的总皂苷量,这与绞股蓝的总皂苷积累现象是相似
的。与已报道的其他种类绞股蓝的皂苷量相比[ 7] ,
本实验测得的五柱绞股蓝的总皂苷量较低,可能与
武陵山地区日照少、湿度高的特殊生境有关,也可能
与物种的遗传性有关。
五柱绞股蓝叶中的总黄酮量高于茎, 茎、叶均以
4月份最低, 4~ 9月上升到最高峰, 9月以后有所下
降。但各地报道的绞股蓝总黄酮季节性积累规律并
不一致,河北引种的绞股蓝总黄酮量在茎以 8月最
高,在叶则以 10月最高[ 8] , 杭州产的绞股蓝和喙果
绞股蓝的总黄酮量则在 7月最低, 11月最高[ 9] , 而
浙江所产 4种绞股蓝的总黄酮量在 5~ 6月最高[ 5] ,
造成这种季节性差异的原因还有待于进一步调查和
检测。五柱绞股蓝的总黄酮量平均为 01 108%, 低
于广西产 6种绞股蓝[ 4]和浙江产 4种绞股蓝[ 5] , 但
稍高于杭州产的两种绞股蓝[ 9]。生产上从收获总皂
苷和总黄酮的角度出发, 可将五柱绞股蓝采收的最
适时间安排在 8~ 9月,这样既可以保证获得最大生
#650# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
物产量,又能获得最高的总皂苷和总黄酮产量。
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HPLC法测定不同生长年限杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷
王丽楠,杨美华*
(中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京 100193)
摘 要:目的 采用 H PLC法测定不同生长年限杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷的量。方法 色谱柱为 Agilent Zorb2
ax Eclipse XDB2C18( 250 mm@4. 6 mm, 5 Lm) , 流动相为甲醇2水 ( 25B 75) ,检测波长为 277 nm, 体积流量 1 mL/
min,柱温 25 e 。结果 13、22 年生杜仲内皮松脂醇二葡萄糖苷量相对较高; 13 年生杜仲栓皮松脂醇二葡萄糖苷
量出现最低点。从杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷总量考虑, 22 年为最佳采收期。结论 本实验建立的杜仲皮松脂醇
二葡萄糖苷量测定方法,重现性好, 结果准确可靠,为杜仲皮质量控制提供了参考。通过对不同生长年限杜仲皮松
脂醇二葡萄糖苷量的研究,为杜仲的合理采收提供了科学依据。
关键词:杜仲; 生长年限; 松脂醇二葡萄糖苷; 高效液相色谱法
中图分类号: R2821 6 文献标识码: A 文章编号: 025322670( 2009)0420651203
杜仲为杜仲科植物杜仲 Eucommiae ulmoides
Oliver 的干燥树皮,别名思仲, 丝连木。杜仲是第四
纪冰川侵袭后残留下来的孑遗古老树种, 其近缘种
类都已绝灭[ 1]。我国是现存杜仲资源的唯一保存
地,至今在世界各地尚未发现其近缘植物,故有/活
化石植物0的美称, 被列为国家二类重点保护树
种[ 2]。我国第一部药物学专著5神农本草经6就记载
了杜仲皮的神奇药效, 称/杜仲味辛平0,主治/腰膝
痛、补中、益精气、坚筋骨、强志。除阴下痒湿, 小便
馀沥,久服轻身耐老0,并把杜仲列为中药上品。
杜仲的生长期较长, 一般 10年以上才能开始剥
皮。杜仲传统采剥方法采收期为 15~ 20 年, 嫩树
剥皮易死,且皮不易再生[ 3]。5中国药典62005年版
(一部)规定杜仲的初加工方法为刮去粗皮,堆置/发
汗0至内皮呈紫褐色,晒干即可[ 4]。由于杜仲独特的
药用价值和潜在的经济价值, 国内外学者对其进行
大量的研究。现已明确松脂醇二葡萄糖苷 ( pi2
noresinol diglucoside, PDG) 有明确的降压作用,是
杜仲主要活性成分[ 5]。5中国药典6 2005 年版一部
杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷的定量测定采用高效液
相色谱法[ 4]。本实验以5中国药典6方法为基础,并
做出改进,首次考察了不同生长年限杜仲皮中松脂
醇二葡萄糖苷,为杜仲的合理采收提供科学依据。
1 仪器与试剂
Waters 2695 ) 2996高效液相自动进样色谱仪。
松脂醇二葡萄糖苷对照品 (批号: 1115372
200502) 购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色
谱纯 ( Fisher 公司生产) ;蒸馏水为娃哈哈纯净水;
其他试剂均为分析纯。
样品于 2007 年 5月采自中国药材集团都江堰
华泰川芎药业有限责任公司三大药材基地2杜仲种
植区。采收方法:在离地 1 m 处环割,以此为起点
向上取一定高度, 割第二道切口,在两切口间纵割一
切口,用竹片沿切口将整张树皮剥下。共采集杜仲
#651#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
* 收稿日期: 2008207202 基金项目:国家科技支撑计划项目 ( 2006BAI09B05)作者简介:王丽楠,女,在读博士,研究方向为中药质量分析及新药研究开发。E2mail: wln 246@hotmail . com
* 通讯作者 杨美华 E2mai l: yangmeihua15@hotmail. com T el: ( 010) 62899730 13041071999