全 文 ：HPLC 法测定竹叶兰根茎中竹叶兰烷
刘美凤1, 2Ξ , 丁　怡3, 杜力军3
(11 华南理工大学化工与能源学院, 广东 广州　510640; 21 广州奇星药业有限公司, 广东 广州　510310;
31 清华大学 生物科学与技术系, 北京　100084)
摘　要: 目的　利用反相高效液相对竹叶兰干燥根茎中　类化学成分竹叶兰烷建立了快速、高效、稳定的分析方
法。方法　色谱柱: H ypersil OD S (150 mm ×416 mm , 5Λm )不锈钢柱, 流动相: 乙腈2水(35∶65) , 体积流量: 110mL öm in,
柱温: 30 ℃, 检测波长: 279 nm , 进样量: 10 ΛL。结果　被测定峰与其他色谱峰可达到基线分离, 线性范围0180～
2 500 Λg, r = 1, 回收率及 R SD 分别为 98120% (R SD = 0166% ) , 102117% (R SD = 0145% ) , 102123% (R SD =
1122% ) (n= 5)。结论　建立了竹叶兰烷的反相高效液相测定方法, 本法简便, 准确, 灵敏度高, 可用于定量测定和
质量控制。
关键词: 反相高效液相色谱; 竹叶兰; 竹叶兰烷
中图分类号: R 28216　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 03- 0448- 02
　　竹叶兰 A rund ina g ram in if olia ( D 1Don )
Hoch r1 为兰科 (O rch idaceae) 竹叶兰属 (A rund ina
B l1) 植物, 别名长杆兰、草姜、山荸荠、竹兰、禾叶竹
叶兰、文哈海 (傣名) , 广泛分布于热带和亚热带地
区, 植物资源丰富, 为西双版纳地区傣族人民常用的
植物药。其药用部位主要为根茎, 用于治疗黄疸, 热
淋, 脚气水肿, 疝气腹痛, 风湿痹痛, 胃痛, 尿路感染,
毒蛇咬伤, 疮痈肿毒, 跌打损伤等[1 ]。初步的活性筛
选结果显示, 竹叶兰干燥根茎乙醇提取物具有较好
抑制肿瘤细胞 (Bel27402 和BGC2823) 的活性, 该提
取物中主要为二苯乙烯类化合物, 笔者首次对云南
产竹叶兰的干燥根茎进行了系统的化学成分研究,
从其乙醇提取物中的醋酸乙酯部位分离得到1 个新
化合物竹叶兰烷 (arundinan) [ 22(对2羟基苄基) 232
羟基252甲氧基联苄 ] [2 ] , 该化合物为　类化合物, 也
是竹叶兰中主要的化学成分。本实验建立了H PL C
法测定竹叶兰干燥根茎中竹叶兰烷的量, 为竹叶兰
中　类成分的H PL C 定量分析工作奠定基础。
1　仪器与材料
W aters 高效液相色谱仪 (美国W aters 公司, 包
括 515 泵, PAD 996 检测器, 7725i 进样器) , KQ 2
250B 型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司)。
竹叶兰根茎样品采自云南省西双版纳地区 (样
品编号: 001205、010210、02041) , 经中国科学院昆明
植物研究所杨崇仁教授鉴定为 A 1g ram in if olia
(D 1Don) Hoch r1。甲醇、乙腈 (色谱纯, 天津康科德
科技有限公司) , 二次蒸馏水自制, 竹叶兰烷对照品
自制, H PL C 检测质量分数98% 以上, 其他试剂均为
分析纯。
2　方法与结果
211　色谱条件: 色谱柱为H ypersil OD S (150 mm ×
416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 乙腈2水 (35∶65) ; 体积流
量: 110 mL öm in; 柱温: 30 ℃; 进样量: 10 ΛL ; 检测
波长: 279 nm。上述色谱条件下竹叶兰烷的保留时
间为7 m in 左右。在该色谱条件下待测组分可达到
基线分离, 见图1。
töm in
12竹叶兰烷
12arundinan
图 1　竹叶兰烷对照品 (A)和竹叶兰干燥根茎 (B)的
HPLC 图
F ig11　HPLC Chromatogram of arundinan
reference substance (A) and dr ied
tuber of A 1 g ram in if olia (B)
212　对照品溶液的制备: 精密称取竹叶兰烷对照品
适量, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 配制成 110
m gömL 的对照品储备溶液。
213　供试品溶液的制备: 竹叶兰干燥根茎粉末 (40～
60 目) 200 m g, 精密称定, 置 20 mL 样品瓶中, 加甲
醇 10 mL , 称定质量, 超声提取 20 m in, 用甲醇补足
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Ξ 收稿日期: 2007205210
损失质量, 静置, 倾出上清液, 0145 Λm 微孔滤膜滤
过, 即得。
214　线性关系考察: 精密吸取竹叶兰烷对照品储备
溶液适量, 加甲醇溶液定量稀释, 分别配制成 0108、
0140、2100、10100、50100、250100 ΛgömL 的对照品
溶液, 上述溶液按色谱条件测定峰面积, 以对照品的
质量浓度为横坐标 (X ) , 峰面积积分值为纵坐标
( Y ) , 进行线性回归, 回归方程 Y = 4 55614 X -
9 517, r= 1, 线性范围0180～ 2 500 Λg。
215　精密度试验: 同一供试品溶液10 ΛL , 重复进样
5 次, 测定峰面积, 竹叶兰烷峰面积的R SD 分别为
0151%。
216　重现性试验: 精密称取同一批竹叶兰干燥根茎
粉末样品5 份, 约012 g, 按213 项供试品溶液的制备
方法制得供试品溶液, 进样 10 ΛL , 测定, 测得峰面
积, 计算竹叶兰烷质量分数为 0118% , R SD 为
0187% , 表明该方法的重现性良好。
217　稳定性试验: 同一供试品溶液10 ΛL , 每隔24 h
测定一次, 连续测定5 次, 竹叶兰烷峰面积的R SD 分
别为1131%。
218　回收率试验: 取竹叶兰干燥根茎粉末 50、100、
150 m g 各 5 份, 精密称定, 精密加入竹叶兰烷对照
品溶液适量, 按 213 项供试品溶液的制备操作, 按
211 项下色谱条件分别测定竹叶兰烷, 计算得回收
率 分 别 为 98120% ( R SD = 0166% )、102117%
(R SD = 0145% )、102123% (R SD = 1122% ) (n= 5) ,
实验结果说明本法回收率好, 方法可行。
219　样品的测定: 分别称取3 批竹叶兰干燥根茎 (批
号: 001205, 010210, 02041)粉末012 g, 按213 项供
试品溶液的制备方法操作, 按211 项下色谱条件分别
测定竹叶兰烷 (n= 5) , 测得3 批竹叶兰干燥根茎竹叶
兰烷质量分数分别为1172、1165、1181 m gög。
3　讨论
311　色谱条件优化: 竹叶兰烷有两个共同紫外最大
吸收波长, 分别为 211、279 m n, 在对竹叶兰药材进
行分析发现在211 nm 进行测定时, 由于药材中的成
分较多, 显现的干扰成分也多, 结果表明, 在 279 nm
波长下进行测定具有最佳的信噪比且兼顾被测定成
分受最小干扰, 因此选用了279 nm 作为该类化合物
的检测波长; 为了使竹叶兰烷与竹叶兰根茎中的其
他成分有良好的分离度和相对适中的检测时间, 实
验中比较了甲醇2水、乙腈2水、乙腈2水2磷酸等洗脱
系统对被测定成分的分离效果, 结果乙腈2水 (35∶
65) 为流动相, 被测定样品的色谱峰分离度较好, 基
线也较平稳。
312　提取方法的优化: 分别取竹叶兰干燥根茎粉末
(40～ 60 目) 约 100 m g, 精密称定, 分别置20 mL 样
品瓶中, 各加甲醇10 mL , 分别按下列方法操作: 浸泡
2 h、浸泡过液、超声提取20、30、40 m in, 静置后, 倾出
上清液, 用0145 Λm 滤膜滤过, 各进样 10 ΛL , 按 211
项下色谱条件分别测定竹叶兰烷, 记录峰面积分别为
1 542 248、1 606 837、1 590 044、1 589 489、
1 629 548, 几种提取方法中被测定成分的结果差别
不大, 因此, 采用超声提取 20 m in 作为样品制备中
的提取方法, 该方法快速、简便、有效。
参考文献:
[ 1 ]　中药大辞典 [M ]1 上海: 上海科学与技术出版社, 19861
[ 2 ]　刘美凤, 韩　芸, 邢东明, 等 1 竹叶兰中一个新的　类化合物
[J ]1 亚洲天然产物研究, 2004, 6 (3) : 22922321
《中草药》杂志被评为第六届“百种中国杰出学术期刊”
2007 年 11 月 15 日中国科学技术信息研究所公布了第六届“百种中国杰出学术期刊”名单,《中草药》杂
志又获此殊荣——第六届“百种中国杰出学术期刊”。这个名单是按照期刊指标评价体系对重要指标 (影响因
子、总被引频次、他引总引比、基金论文比和即年指标)进行打分的结果。
摘引自中国科学技术信息研究所《2006 年度中国科技论文统计与分析年度研究报告》
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