全 文 ：高速逆流色谱分离纯化白芍中芍药苷的研究
黄天辉1 ,2 , 周 　俊2
①
　
(1. 复旦大学博士后化学流动站 ,上海 　201203 ; 2. 广西中烟工业公司技术中心 ,广西 柳州 　545005)
摘 　要 :目的 　建立了微波提取与高速逆流色谱纯化白芍中芍药苷的方法。方法 　实验采用 90 %乙醇、微波功率
850 W 的条件下对白芍提取 25 min ,提取物在正丁醇2醋酸乙酯2水 (2 ∶3 ∶5) 的溶剂体系下进行高速逆流色谱纯
化 ,纯化物在高效液相色谱流动相甲醇2水 (70 ∶30) ;色谱柱 Shim2pack V P2ODS(150 mm ×416 mm , 315μm) ;体积
流量 11 0 mL/ min ;检测波长 230 nm。结果 　200 mg 的白芍提取物 ,芍药苷质量分数 10162 % ,经逆流色谱分离制
备得到 20152 mg 质量分数为 9818 %的芍药苷 ,芍药苷的回收率为 9616 %。结论 　高速逆流色谱是分离与纯化白
芍中芍药苷的有效方法
关键词 :白芍 ;芍药苷 ;高速逆流色谱 ;高效液相色谱
中图分类号 :R28412 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0120067202
　　白芍为毛莨科植物芍药 Paeoni a l acti f lora
Pall . 的干燥根 ,主要有效成分为芍药苷。芍药苷具
有抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、保肝护肝、心血
管调节等作用[1 ] 。白芍中芍药苷的传统提取工艺为
水或者乙醇渗漉、回流提取 ,而微波辅助提取法将微
波辐射与溶剂萃取结合起来 ,具有提取时间短、溶剂
用量少、提取成本低等优点[2 ] 。白芍中芍药苷的分
离与纯化通常采用柱色谱法 ,样品在固定相的吸附
导致回收率很低 ,而高速逆流色谱 ( HSCCC) 属于液
液分配色谱 ,清除了样品在固定相的不可逆的吸附 ,
因此广泛应用于分离纯化天然产物中的有效成
分[3 ,4 ] 。本实验将微波提取方法与高效逆流色谱纯
化方法相结合 ,为白芍中芍药苷的分离与纯化提供
了一种有效方法。
1 　仪器与材料
V IP272 微波萃取器 (上海惠而浦家用电器有限
公司) ; Waters 510 型高效液相色谱仪 (美国 Wa2
ters 公司) ; TB —300 高速逆流色谱仪 (上海同田生
化有限公司) 。
白芍饮片购自上海康桥中药饮片有限公司 ,产
地浙江 , 经笔者鉴定 ,符合《中国药典》2005 年版一
部规定。芍药苷对照品 (批号 1107362200320) 购自
中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯 ,其他试
剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　样品的制备[ 2 ] :取粉碎后白芍饮片 50 g ,用
90 %乙醇 600 mL ,微波功率 850 W 提取 25 min ,提
取液滤过 ,滤液经减压浓缩后转入真空干燥器中 ,真
空干燥得到 81425 g 干浸膏 ,得率为 16185 %。分别
取适量的干浸膏用甲醇溶解 ,即得。
212 　溶剂体系的选择 :高速逆流色谱分离的困难性
在于溶剂体系的选择。通常要求所选溶剂体系为互
不相溶的两相液体且上下相体积比约为 1 ,分层时
间小于 30 s ,待分离组分的分配系数为 016～115。
目前 ,可供选择的几个经典体系如正己烷2醋酸乙
酯2甲醇2水体系主要适合分离低或中等极性的物
质 ,醋酸乙酯2正丁醇2水体系主要用一些极性比较
大的化合物的分离。实验分别配制上述两个体系不
同比例 ,取上、下相各 10 mL 于 50 mL 具塞量瓶中 ,
加入干浸膏 20 mg ,超声波震荡 ,转移至分液漏斗
中 ,静置分层 ,分别吸取上、下两层溶液各 10μL ,另
取芍药苷对照品溶液 10μL ,分别点于同一硅胶 G
薄层板上 ,以氯仿2醋酸乙酯2甲醇2甲酸 (40 ∶5 ∶
10 ∶012) 为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干。喷上 5 %香
草醛硫酸试液 ,加热至斑点显色清晰。薄层色谱的
分析结果表明 :溶剂体系为正己烷2醋酸乙酯2甲醇2
水 (7 ∶3 ∶5 ∶5、6 ∶4 ∶5 ∶5、5 ∶5 ∶4 ∶6、5 ∶5 ∶
5 ∶5、5 ∶5 ∶6 ∶4、4 ∶5 ∶4 ∶5)时 ,芍药苷基本集中
在下相甲醇与水的体系中 ,不符合溶剂体系选择的
一般要求 ;溶剂体系为正丁醇2醋酸乙酯2水 (2 ∶3 ∶
5、1 ∶2 ∶3、3 ∶2 ∶5、2 ∶1 ∶3、3 ∶1 ∶5、4 ∶1 ∶5)
时 ,芍药苷在上、下相溶剂体系都有不同程度出现 ,
·76·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008204216　　　
基金项目 :广西科学研究与技术开发基金资助项目 (桂科攻 07129002)
作者简介 :黄天辉 (1969 —) ,男 ,副教授 ,复旦大学在读博士后 ,主要从事中草药的研究与开发。
Tel : (0772) 3160111 　Fax : (0772) 3160111 　E2mail : ht h169 @yahoo. com. cn
其中以正丁醇2醋酸乙酯2水 (2 ∶3 ∶5) 分配系数最
接近 1 ,体系的分层时间为 12 s ,上下相体积比为
1109。通过薄层色谱对溶剂体系的试验 ,确定正丁
醇2醋酸乙酯2水 (2 ∶3 ∶5) 为高速逆流色谱分离白
芍中芍药苷的溶剂体系。
213 　高速逆流色谱分离条件 :溶剂系统为正丁醇2
醋酸乙酯2水 (2 ∶3 ∶5) ,在分液漏斗中平衡 24 h
后 ,使用前分离成上相 (固定相)和下相 (流动相) ,分
别脱气后备用。仪器的转速 950 r/ min ,流动相的流
量 110 mL/ min ,紫外检测器波长 254 nm。
称取干浸膏 200 mg ,用溶剂体系正丁醇2醋酸
乙酯2水 (2 ∶3 ∶5)的上下相各 10 mL 配制成样品溶
液 ,选择 HSCCC 的转速 950 r/ min ,流量 110 mL/
min , 检测波长为 254 nm。按 HSCCC 的操作程序
进样 ,样品经过 HSCCC 分离后 ,按色谱峰收集流
份 ,分别进行浓缩、干燥。其中得到 5 号峰的流份质
量为 2015 mg。结果见图 1。
t/ min
图 1 　白芍提取物的高速逆流色谱
Fig. 1 　Chromatogram of P. lacti f lora
extracts by HSCCC separation
214 　高效液相色谱分析
21411 　色谱条件 :色谱柱 Shim2pack V P2ODS (150
mm ×416 mm , 315μm) ;流动相为甲醇2水 (70 ∶
30) ;体积流量为 110 mL/ min ,检测波长为 230 nm。
21412 　对照品溶液的制备 :取干浸膏适量加甲醇溶
解 ,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品 ,加甲醇制
成 1 mg/ mL 溶液 ,作为对照品溶液。
21413 　供试品溶液的制备 :按照高速逆流色谱图 ,
分别收集各个流份 ,蒸干 ,加入甲醇定容 ,滤过即得
纯化后的供试品溶液。
21414 　干浸膏中芍药苷的测定 :按 HPL C 色谱分
析条件进样 ,根据保留时间定性 ,峰面积外标法定
量 ,计算干浸膏中芍药苷的质量分数为 10162 %。
215 　薄层色谱的初步判断 :取供试品溶液和芍药苷
对照品溶液 ,分别点于同一硅胶 G 薄层板上 ,以氯
仿2醋酸乙酯2甲醇2甲酸 (40 ∶5 ∶10 ∶012) 为展开
剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷上 5 %香草醛硫酸试液 ,加
热至斑点显色清晰。薄层色谱分析表明 5 号峰的流
份为单一斑点 ,其 Rf 值等同芍药苷对照品 ,初步判
断 5 号峰的流份为芍药苷。
216 　分离样品的测定结果 :取上述 5 号峰的供试品
溶液和芍药苷对照品溶液。按照 H PL C 的色谱条
件 ,分别进一定体积芍药苷对照品溶液和供试品溶
液 ,根据保留时间定性 ,峰面积外标法定量 ,分别计
算芍药苷质量分数 ,见图 2。结果表明 5 号分离峰
为单一峰 ,其保留时间等同芍药苷对照品 ,因此判断
5 号峰的流份为芍药苷 , 芍药苷的质量分数
为 9818 %。
t/ min
图 2 　芍药苷对照品( A)和高速逆流色谱
5 号峰( B)的高效液相色谱图
Fig. 2 　HPLC Chromatograms of paeoniflorin
reference substance ( A) and HSCCC
peak No. 5 fraction ( B)
3 　结论
实验表明 :提取白芍中芍药苷所采用的微波提
取法具有提取时间短与溶剂用量少的特点。对芍药
苷的纯化所采用的高速逆流色谱法是一种有效
的方法。
参考文献 :
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·86· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月