全 文 ：表3　微波辅助萃取与传统提取方法比较
Table 3　Comparison between microwave extraction and traditional method
萃取方法 溶剂体积分数/ % 萃取时间/ min 溶剂用量/ mL 浸泡时间/ min 产品得率/ % 绿原酸质量分数/ %
微波辅助萃取 60 20 900 30 18. 3 1. 212
传统加热回流 60 20 900 30 16. 8 0. 889
对比传统提取方式, 微波辅助萃取所得的干膏中绿
原酸的质量分数高,干膏得率大,具有显著优势。
3　讨论
　　实验发现萃取剂体积分数对微波辅助萃取野菊
花中绿原酸的影响最大。其原因可能是乙醇体积分
数决定了溶剂的极性大小,与微波的吸收效果关系
密切, 直接影响微波萃取的效果。乙醇体积分数不
同,对绿原酸的溶解能力不一样, 从而影响其溶出
度。乙醇体积分数、微波萃取时间、微波辐射功率和
固液比都会影响药材和萃取溶剂对微波辐射能量的
吸收,所以各参数之间具有一定的交互作用。
　　微波辅助萃取不同于传统加热回流方式, 其微
波直接作用于溶剂和药材, 热量和有效成分均由内
向外传出,从而使得萃取时间短、提取效率高。结果
表明, 相同提取条件下, 微波辅助萃取具有显著优
势。由此可见,其产业化应用将为中药制药领域中的
提取技术注入新的活力。
参考文献:
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结合心脑血管病杂志, 2005, 3( 5) : 434-436.
[ 2]　姜丽霞,徐世芳 . HPLC法测定野菊花中绿原酸的含量[ J ] .
中国药品标准, 2003, 4( 6) : 54-56.
胶原纤维吸附剂对银杏叶中鞣质的选择性去除作用
李　娟, 廖学品,唐　睿,石　碧X
(四川大学 皮革化学与工程教育部重点实验室,四川 成都　610065)
摘　要: 目的　研究胶原纤维吸附材料对银杏叶中鞣质的选择性去除作用。方法　以皮胶原纤维为原料,通过戊二
醛交联反应制备吸附材料。将此吸附材料用于选择性地去除银杏叶提取物中的鞣质, 并用HPLC 和明胶法对吸附
实验结果进行检测。结果　HPLC 图谱和明胶法检测结果说明, 所制备的胶原纤维吸附材料具有较好的吸附选择
性, 可以完全除去银杏叶提取物中的鞣质,而有效成分基本不损失。结论　胶原纤维吸附材料可用于中药提取物或
制剂中鞣质的高选择性脱除。
关键词: 银杏叶;胶原纤维; 鞣质;吸附选择性
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253-2670( 2008) 01-0062-04
　　银杏叶提取物 ( Ginkgo biloba L. ext ract ,
GbE)的主要成分是银杏黄酮和银杏苦内酯 [ 1] , 这些
成分具有清除自由基、抗病毒、抗肿瘤、抗辐射、保肾
等作用[ 2]。但银杏叶提取物中含有鞣质、蛋白质等杂
质,其中含鞣质为12. 59%～13. 92% [ 3]。鞣质的存在
不仅影响最终产品的稳定性和澄清度,而且可能产
生副作用[ 3] , 因此必须除去。常用的去除鞣质的方法
主要有氨水沉淀法、明胶沉淀法、铅盐沉淀法、大孔
树脂吸附法等 [ 4]。由于银杏黄酮分子与鞣质分子结
构相似,因此常用方法的选择性较差,有效成分损失
较多,而且可能引入其他更加难以去除的杂质。胶原
纤维中含有羧基、氨基和羟基[ 5] , 能与鞣质分子的酚
羟基发生多点氢键-疏水键结合[ 6]。本课题组的前期
研究发现, 胶原纤维对鞣质具有选择性吸附能力[ 7]。
因此本实验以戊二醛为交联剂制备胶原纤维吸附材
料,用于选择性地去除银杏叶提取物中的鞣质。
1　仪器与材料
　　Agilent 1100型高效液相色谱仪、DAD检测器
(美国 Agilent 公司) , U V—2501PC 型紫外-可见分
光光度计(日本岛津公司)。
　　落叶松鞣质(自制,由落叶松树皮提取[ 7] )。胶原
纤维(实验室自制,制备方法参阅文献方法[ 8] )。1%
·62· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 1期 2008 年1 月
X 收稿日期: 2007-03-22基金项目:“973”重大基础前期研究专项( 2004CCA06100) ;杰出青年基金资助项目( 20325619)作者简介:李娟( 1982—) , 女, 四川省西昌人, 硕士研究生, 研究方向为天然产物的分离。E-mail: black gound@ 163. com
* 通讯作者　石　碧　Tel: ( 028) 85400356　Fax: ( 028) 85400365　E-m ail : sibitannin@ vip. 163. com
明胶-氯化钠溶液为含明胶 1%、氯化钠 10%的水溶
液,临用新配,按《中国药典》2005年版配制[ 9]。色谱
纯甲醇,其他试剂均为分析纯。
　　干银杏叶采摘自江苏邳州银杏叶种植基地,经
内江师范学院唐正义教授鉴定为银杏科银杏属植物
银杏G . biloba. L 的干燥叶片。
2　方法与结果
2. 1　胶原纤维吸附剂的制备:取胶原纤维15 g ,用
300 mL 蒸馏水浸泡12 h。加入10 mL 50%戊二醛,
先在25℃下反应1 h,然后在30℃下反应4 h。滤过
后用1 000 mL 蒸馏水洗涤3次,然后再用300 mL 无
水乙醇洗涤, 滤过,并在45℃下干燥12 h [ 7]。
2. 2　鞣质溶液的配制: 精确称取落叶松鞣质0. 100
g ,用30%乙醇溶液溶解, 置于100 mL 量瓶中, 并加
至刻度,得到质量浓度为1. 000 mg / mL 鞣质溶液。
2. 3　银杏叶提取物的制备: 称取干银杏叶(粉碎至
直径3 mm 左右) 50. 0 g, 用60%甲醇水溶液回流提
取 2次,每次 2 h, 溶剂量分别为银杏叶质量的8、7
倍。滤过后合并滤液, 减压蒸发回收甲醇, 滤去不溶
物, 用蒸馏水定容至50 mL,即得含生药1. 0 g / mL
的溶液,冷藏静置备用。
2. 4　HPLC 法分析条件的确定:由于鞣质类化合物
的最大吸收波长为 280 nm [ 6] , 银杏叶提取物中有效
成分在360 nm 下才有较强的吸收[ 10] ,故本实验采
用不同的色谱条件分析银杏叶提取物中的鞣质和有
效成分。
　　银杏叶提取物中鞣质分析的色谱条件: 色谱柱
为Capcell Pak C18AQ ( 150 mm×4. 6 mm, 5 Lm) ;进
样量: 20 LL; 柱温: 30 ℃; 流动相: 0. 5% H3PO4 水
溶液( A) -CH3OH( B) ;梯度洗脱: 0～10 m in B液由
18%增加至 24%, 10～25 min B 液由 24%增加至
70%, 25～35 m in 70% B 液, 35～40 min 100% B
液;体积流量: 0. 8 mL/ m in; 检测波长: 280 nm。
　　银杏叶提取物中有效成分分析的色谱条件:色
谱柱为 Capcell Pak C18 AQ ( 150 mm×4. 6 mm, 5
Lm) ; 进样量: 20 LL;柱温: 30 ℃;流动相: [水-乙腈-
异丙醇( 500∶100∶15,加入2. 460 g 枸橼酸) ] ( A) -
[水-乙腈-异丙醇( 500∶235∶25, 加入3. 040 g 枸橼
酸) ] ( B) ; 梯度洗脱: 0～20 m in B 液由 0%增加至
50%, 20～25 min B 液由50%增加至100% ;体积流
量: 0. 8 mL/ m in;检测波长: 360 nm。
2. 5　胶原纤维吸附剂对银杏叶提取物中鞣质的选
择性吸附:取10 mL 银杏叶提取物溶液于100 mL 量
瓶中, 加30%乙醇溶液至刻度, 摇匀(含生药0. 1 g/
mL)。取上述溶液50 mL 于250 mL 锥形瓶中,称取
0. 500 g 胶原纤维吸附剂放入锥形瓶中, 25 ℃下振
荡吸附24 h 后滤过。采用HPLC法比较银杏叶提取
物吸附前后组成成分的变化, 结果见图1、2。
t / min
图1　银杏叶提取物溶液在280 nm波长下吸附前( A)、后
( B)的HPLC图谱
Fig. 1　HPLC Chromatogram of GbE solution
before (A) and af ter (B) adsorption
at 280 nm wave length
t / min
图2　银杏叶提取物在360 nm 波长下吸附前(A)、后( B)
有效成分的HPLC图谱
Fig. 2　HPLC Chromatogram of active components
in GbE before (A) and after (B) adsorption
at 360 nm wave length
　　280 nm 波长下检测的成分主要是银杏叶提取
物中的鞣质,其保留时间为12～25 m in。吸附前后相
比可见,峰高明显降低,但峰形基本不变。这是由于
·63·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 1期 2008 年1 月
鞣质是由一系列相对分子质量不同的化合物组成的
混合物, 在保留时间为12～25 min无法得到分离的
色谱峰,而表现为一个较宽的坡峰;同时由于银杏叶
提取物中有效成分在280 nm 下也有一定的吸收,而
且某些成分在 280 nm 下有较强的吸收[ 10] ,因此在
鞣质被除去后,这些成分仍然保留,仍有明显的吸收
坡峰。360 nm 波长下检测的银杏叶提取物有效成
分有较强的吸收峰[ 10] ,而鞣质的吸收峰很小[ 6]。因
此, 360 nm 波长下各色谱峰为银杏叶提取物中的有
效成分。并且吸附前后的HPLC 图谱中各组分的峰
形完全一致, 绝对峰高基本不变。表示胶原纤维对银
杏叶提取物中鞣质具有选择性吸附能力, 而对有效
成分基本不吸附。
2. 6　胶原纤维对银杏叶提取物-落叶松鞣质混合溶
液的吸附:为了验证胶原纤维吸附剂对银杏叶提取
物中鞣质的选择吸附特性,在银杏叶提取物中加入
一定量的落叶松鞣质。取10 mL 银杏叶提取溶液(含
生药1. 0 g / mL)于100 mL 量瓶内,加入1. 000 mg/
mL 鞣质溶液50 mL,混合后用30%乙醇溶液定容至
100 mL,摇匀。取溶液50 mL 于250 mL 锥形瓶中,
称取 0. 500 g 胶原纤维吸附剂放入锥形瓶中, 25 ℃
下振荡吸附24 h后滤过。采用HPLC法比较银杏叶提
取物吸附前后组成成分的变化,结果见图3。
t/ min
图3　银杏叶提取物-落叶松鞣质混合溶液在 280 nm
条件下吸附前(A)、后( B)的HPLC图谱
Fig. 3　HPLC Chromatogram of GbE-larch tannin
solution before ( A) and af ter (B) adsorption
at 208 nm wave length
　　可以看出,加入落叶松鞣质后,保留时间在12～
25 min 的坡峰峰高明显增加,但峰形基本一致。落
叶松鞣质与银杏叶提取物的色谱峰相互重叠,因而
吸收增强。吸附后与吸附前相比坡峰明显降低,峰形
不变。峰高基本相同,峰形也一致,即银杏叶提取物-
落叶松鞣质混合溶液吸附后与银杏叶提取物吸附后
谱图完全一致。这表明,银杏叶提取物-落叶松鞣质
混合溶液中的鞣质被吸附后,在HPLC 图谱上表现
为保留时间12～25 min 的吸收峰降低,而且进一步
证实胶原纤维吸附剂能够选择性吸附银杏叶提取物
中的鞣质。
2. 7　明胶法检测:为了验证银杏叶提取物中鞣质是
否被胶原纤维吸附剂全部去除, 进一步采用明胶-氯
化钠法[ 9]对鞣质进行检测。分别取吸附前和吸附后
的溶液15 mL 各两份,在吸附前的两份溶液中分别
加入 10 mL1%明胶-氯化钠溶液和 10 mL 蒸馏水
(空白样) ,在吸附后两份溶液中也分别加入 10 mL
1%明胶-氯化钠溶液和 10 mL 蒸馏水(空白样) , 离
心30 min( 10 000 r / min) ,取上清液1 mL 稀释10倍
后测定其紫外吸收, 结果见图4。
t / min
1-空白样　2-加明胶后离心
1-cont rol　2-adding NaC l-gelat in solut ion
图4　银杏叶提取物离心液的紫外吸收光谱
Fig. 4　UV-Vis Absorption spectra of GbE
supernatant af ter centrifugation
　　在 1%明胶-氯化钠溶液检测试验中, 吸附前银
杏叶提取物溶液加入1%明胶-氯化钠溶液后有明显
的浑浊现象, 而吸附后加入1%明胶-氯化钠溶液后
则是澄清的。由紫外吸收光谱图可见,加入1%明胶
-氯化钠溶液离心后吸光度( A)值显著下降,其原因
是明胶与鞣质结合, 使鞣质发生沉淀[ 6]。吸附后溶液
加1%明胶-氯化钠溶液离心后的上清液和空白样的
·64· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 1期 2008 年1 月
吸光度( A)曲线几乎重合,这表明银杏叶提取物经
胶原纤维吸附后, 已经全部除去了所含的鞣质。
3　讨论
　　本研究以戊二醛交联胶原纤维为吸附剂去除银
杏叶提取物中鞣质。该吸附剂对鞣质具有较好的吸
附选择性,可以完全除去银杏叶提取物中的鞣质,而
有效成分基本不损失。由于该吸附剂为天然皮胶原
纤维,使用安全。因此,胶原纤维吸附材料可用于中
药提取物或制剂中鞣质的高选择性脱除。但需要进
一步对其安全性进行评价。
参考文献:
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G inkgo biloba L. phytoph armaceut icals [ J ] . I l Farmaco,
2005, 60: 583-590.
HPLC法测定血脂平胶囊中丹皮酚
郑　林,丁　宁, 陈荣发X
(贵阳中医学院,贵州 贵阳　550002)
　　血脂平胶囊由徐长卿、刺梨、绞股蓝、山楂 4味
药材配制而成,为贵阳中医学院药厂生产的中药复
方制剂,活血祛痰,用于高脂血症。处方徐长卿药材
中的丹皮酚为控制生产工艺的指标性物质。丹皮酚
在抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、改善微循环、抗心
律失常、抗肝纤维化、高血压等诸多方面都具有显著
的疗效[ 1]。《国家药品监督管理局标准(试行)》WS-
10513( ZD-0513) -2002血脂平胶囊质量标准中采用
紫外分光光度法测定, 规定以徐长卿中丹皮酚计不
得少于1. 15 mg/粒。但紫外分光光度法在应用中出
现重现性、稳定性差、前处理方法耗时长等不足。徐
长卿药材中丹皮酚的测定方法有气相色谱法、高效
液相色谱法等 [ 2, 3]。《中国药典》2005年版一部徐长
卿药材项下也采用HPLC 法对丹皮酚进行控制。因
此,本实验采用HPLC 法对血脂平胶囊中指标性成
分丹皮酚进行测定。
1　仪器、试剂与试药
　　Ag ilent 1100高效液相色谱仪(在线脱气机、单
泵、VWD 检测器、自动进样器、Ag ilent 化学工作
站) , Speco rd 40紫外分光光度计、超声提取器(功率
250 W、频率34 kHz) ; 甲醇为色谱纯和分析纯、水为
重蒸馏水; 丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定
所提供(批号 0708-9704,供定量测定用) ;血脂平胶
囊由贵阳中医学院药厂提供。
2　方法与结果
2. 1　供试品溶液的制备:精密称取血脂平胶囊内容
物0. 5 g ,置于圆底烧瓶中,精密加入25 mL 甲醇, 称
定质量, 回流提取30 min, 放冷后,用甲醇补足减失
质量, 摇匀,用0. 45 Lm 微孔滤膜滤过,即得。同法制
备缺徐长卿的阴性供试品溶液。
2. 2　系统适用性试验: L ichropher 5 C18色谱柱( 150
mm×4. 6 mm, 5 Lm) ;流动相:甲醇-水( 60∶40) ; 检
测波长: 274 nm; 体积流量: 1. 0 mL/ min; 柱温: 室
温。供试品中丹皮酚色谱峰与其他成分得到较好分
离,理论板数达7 000以上,分离值R> 1. 5,色谱图
见图1。检测结果较为理想,空白试验无干扰。
2. 3　标准曲线的制备:精密称取丹皮酚对照品3. 33
mg 置于 25 mL 量瓶中, 加甲醇溶解, 并稀释至刻
度,摇匀,制成质量浓度为133. 2 Lg/ mL 的溶液。精
密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12、14 LL 进样, 并
·65·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 1期 2008 年1 月
X 收稿日期: 2007-05-14
* 贵阳中医学院药学系 07届毕业实习生