全 文 ：·532· 中苹菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
除了两性霉素B是通过与麦角甾醇特异性结合，破坏
真菌细胞膜结构，从而起到抗真菌作用外，其余都是
麦角甾醇的生物合成抑制剂。这类药物虽然作用于麦
角甾醇生物合成过程中的不同环节，但最终都能使真
菌中的麦角甾醇的质量分数下降。
用于检测细胞膜中麦角甾醇的方法有薄层色谱
法、高效液相色谱法等o]。反相高教液相色谱分析法
具有分析速度快、分离效能高、自动化程度好的特点
面被广泛使用。本实验以酮康唑为阳性对照，采用反
相液相色谱法测定了肉桂醛、柠檬醛作用烟曲霉后
细胞膜中麦角甾醇的变化。实验中发现，一定浓度的
药物作用后烟曲霉细胞膜中麦角甾醇较阴性对照组
减少，随着药物浓度的增加，麦角甾醇也随之减少。
表明药物影响了细胞膜中麦角甾醇的生物合成，从
而抑制了烟曲霉的生长繁殖。至于药物抑制了麦角
甾醇生物合成的哪一个环节或多个环节，还有待进
一步研究。通过测定真菌中麦角甾醇，有助于探讨抗
真菌药物的作用机制，为中药活性成分的体外抗真
菌作用研究提供了新方法。
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正交试验法优选酸枣仁中自桦脂酸的提取工艺
赖 玲，扬 昕，医[习，吴孔弦
(华中科技大学同济医学院药学院分析测试中心，湖北武汉430030)
摘要：目的优化酸枣仁中自桦脂酸的提取工艺。方法以白棒脂酸和于浸膏得率为检测指标，采用l。s(3‘)正交
试验，考察乙醇体积分数、溶剂用量、提取时间和提取次数4个影响因素，采用高效液相色谱法进行白桦脂酸测定。
结果乙醇体积分数对提取物中自桦脂酸有显著影响，其他因素影响不显著，最佳提取工艺条件为3倍量95％乙
醇热回流3次，每次2h。结论优选得到的工艺稳定、方法可行。
美键词：酸枣仁；白桦脂酸；正交试验；高效液相色谱
中墨分类号：R284．2，R286．02文献标识玛：B 文章编号：0253—2670(2006)04063203
Orthogonaltestforoptimizingextractiontechniqueofbetulinicac d
inSemenZiziphiSp nosae
LAILing，YANGXin，陌河百j园，wuKong—xian
(TongjiPharmaceuticalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030-China)
Keywords：SemenZiziphiSp nosae；betulinicacid；orthogonaltest；HPLC
鉴鐾县留：翠辈嚣蓉关学同济医学院科学研究基金资助(01514709)
作者简介：翼，：戋绩警‰；；轰，、要焦棼i毫曩嚣吉菇蓑要喜』基为c妻蓼要剂型
万方数据
中革鸯ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
酸枣仁为鼠李科植物酸枣zi,：iphusjujuba
var．spinosa(Bunge)HuexHF．Cho 的干燥成
熟种子，具有养心安神的功效，是较为常用的镇静催
眠中药“]。其中自桦脂酸(betulinicacid)的质量分
数较高o]。白桦脂酸及其衍生物具有明显抗炎活性，
白桦脂酸对白血病细胞P388具有较强的抑制作
用口]，因此具有良好的开发前景。
本实验采用正交试验设计结合高效液相色谱法
(HPLC)，以自桦脂酸的质量分数和干浸膏得率为
检测指标对诸影响酸枣仁中自桦脂酸的提取工艺因
素进行了考察。
1仪器与试剂
惠普(安捷伦)Agilent1100高效液相色谱仪；
AgilentSerial泵及VwD检测器；Sepu3000工作站；
TGl6—11台式离心机(长沙平凡仪器有限公司)。
无水乙醇、95％乙醇均为分析纯，HPI。C用试剂
均为色谱纯。酸枣仁购于武汉天成大药房，经本院生
药教研室张长弓教授鉴定，取酸枣仁适量，按1：3
加水煮沸30min，共煮3次，于80、C烘干，粉碎，备
用。白桦脂酸对照晶购于德国Aldrich公司，质量分
数大于90％。
2方法与结果
2．1正交试验设计：选用L。(34)正交表进行正交试
验设计，因素水平安排见表1。
表1因素水平
Table1 Factorsandlevels
2．2供试品溶液的制备：将酸枣仁粗粉于80℃干
燥至恒重，精密称取9份，按I～9进行编号，按照正
交试验要求进行操作。合并滤液，定容至100mL。精
密量取5mL，挥干溶剂，用适量甲醇溶解，定容至
25ml。，取续滤液1．5mL，离心(3500r／rain)10
min，取上清液，即得。
2．3干浸膏得率的计算：精密量取供试品溶液25
mL，置已干燥至恒重的蒸发皿上，水浴挥干溶剂，
105C干燥至恒重，称质量，计算干浸膏得率。
2．4白桦脂酸测定
2．4．1色谱条件：色谱柱HypersilCJ8(250mmx
4．6mm，5”m)；流动相：乙腈一水一冰醋酸(70：
30：0．08)；检测波长：307am；柱温：40C；体积流
量：1mL／min。
2．4．2线性关系考察：精密称取干燥至恒重的白桦
脂酸对照品4．40mg，甲醇溶解，转移并定容于25
mL量瓶中，摇匀。精密吸取适量对照品溶液配成系
列质量浓度，按上述色谱条件测定，重复进样(”=
3)，20“L／次。以平均峰面积为纵坐标，质龟浓度为
横坐标绘制标准曲线，并进行回归分析。结果得回归
方程：Y一10905X一26788，r一0．9991，表明白桦
脂酸在7．04～176}*g／mL内线性关系良好。
2．4．3精密度试验：精密吸取同一质量浓度白桦脂
酸对照品溶液，进样测定，20t-tL／次。自桦脂酸峰面
积的RSD为o．16％(n一5)。
2．4．4稳定性试验：取新制备的酸枣仁供斌品溶
液，分月0在0、2、4、8、12、24h分别进样20p1，。结果
测得酸枣仁中自桦脂酸的平均质量分数为
0．248％，RSD为1．29％，表明供试品溶液中白桦脂
酸在24h内稳定。
2．4．5重现性考察：精密称取干燥至恒重的原料粗
粉5份，制备供试品溶液，进样测定，20pI。／次，结果
白桦脂酸面积的RSD为0．83％。
2．4．6加样回收率试验：精密称取干燥至恒重的、
含白桦脂酸0．247％10份3g的原料粗粉，其中9
份中每3份按80％、100％、120％水平加5．93、
7．41、8．89mg的白桦脂酸对照品，另1份作为空白
对照，制备供试品溶液，重复进样“一3)，20pI，／次，
测定。结果平均回收率为99．96％，RSD为0．62％。
2．4．7测定：取供试品溶液，重复进样(n一3)，20
,uL／次，测定按外标两点法计算。
2．5结果：色谱图见图l。正交设计见表2，方差分
析见表3、4。
I
㈠
—J、—————、，、／L一
*-白榉脂酸
*be￡u]inicac d
图l 自桦脂酸对照品(A)和酸枣仁提取翱(B)的
HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfbetullnlcacid
referencesubstance(A)andSemen
Ziz扣hiSpinosaeextract(B)
万方数据
中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第4期2006年4月
表2正交试验结果与分析
Table2 Resultsoforthogonaltestandanalysis
表3以干浸膏得幸为指标的方差分析
Table3 Varianceanalysisba edon ry
extractra easindex
f^o，tZ·Z)一19-00Fm^If2，2)=99，00
表4以白桦脂酸为指标的方差分析
Table4 Varianceanalysisba edOHbetulinicac daSindex
误差来源 离均羞平方和自由度均方 F值 显著性
A 0．192 2 0 096 64 P<0．05
B 0 003 2 0 0015 1
D 0 018 2 0．009 6
误差(C)00 3 2 0．001s
Fo05(2，2)一19 00 FcⅢ旺．2)=9900
极差分析表明，4个因素对酸枣仁中自桦脂酸
提取率影响的顺序为：以干浸膏得率为检测指标：
A>D>B>C；以白桦脂酸为检测指标：A>I)>B>
C；方差分析表明，因素A对提取工艺有显著影响，
而且随着乙醇体积分数升高，出膏率有所降低。考虑
到工业生产上操作简便、省时、经济，最终选定
A。B。C：D。，即95％乙醇，3倍量×3次，每次2h为最
佳提取工艺。
3讨论
试验及文献报道“’“，酸枣仁中提取分离白桦脂
酸关键在于除去其中的酸枣仁皂苷A和B及脂肪
油等杂质的干扰。笔者采用水煮酸枣仁饮片3次，除
去了大部分皂苷类、糖类、鞣质类等易溶于水，极性
大的物质，而白桦脂酸没有损失。
曾设计乙醇体积分数为65％、80％、95％，但各
影响因素之间没有显著性差异，重新调整乙醇体积
分数为35％、65％、95％，结果各影响因素I训存在显
著性差异，而且乙醇体积分数影响显著。
确定最佳工艺后．笔者实验室进行r3批平行
实验并到我院生药实验室放大生产r3批，以白桦
脂酸的量和干浸膏得率为考察指标，结果稳定、可
靠、重现性好，证明该工艺稳定、可行。
References：
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帝面删吐^毋、p《Ⅻ’矿驴1驴矗坳《叼埘h掣、扩世“盘、扩’驴驴舻《№硒h帮、驴qn口、驴硒谚越h护、P舻《h护l舻驴，驴’驴舻匈
§ §
3 《中草菊》投稿特别注意事项 i
§ §
》 1．实验性论文需要单位介绍信(注明：论文内容真实，作者排名无争议，无一稿两授，无泄密)。》
《 2．创新性论文优先发表，新化合物免收版面费。 《
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》 5．本刊不收审稿费，但刊用稿件要收取版面费。 §
l 6．投稿时请留下联系方式(电话和Email)。 Z；口．，p、口、：p、p、p、．p、。p口口口、口．．94、。。h．fi，㈣，p口口口口，；口、㈣、dP、㈣、。．M口口口、口、《P口g
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万方数据
正交试验法优选酸枣仁中白桦脂酸的提取工艺
作者： 赖玲， 杨昕， 杨光， 吴孔弦， LAI Ling， YANG Xin， YANG Guang， WU Kong-xian
作者单位： 华中科技大学同济医学院药学院,分析测试中心,湖北,武汉,430030
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(4)
被引用次数： 1次

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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200604017.aspx