全 文 ：·1838· 中草蒋 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
肿瘤和抑制蛋白激酶活性，且在人的肿瘤细胞中能
选择性地抑制表皮生长因子受体(EGFR)[3]。蒲葵
果实水提取物和乙醇提取物体外有抑制细胞增殖，
抗氧化作用，在非特异性酯酶实验中，乙醇提取物还
能诱导HL一60细胞的单核细胞或巨噬细胞分化且
有剂量依赖性n引。
本实验通过对蒲葵籽的4个提取物进行初筛，
表明蒲葵籽的醋酸乙酯提取部分(P3)具有体外抗
HIV一1活性。P3能阻断HIV一1慢性感染细胞与正
常细胞的融合，提示其作用靶点或靶点之一可能为
阻断病毒进入细胞。通过基因工程重组HIV—l蛋白
酶和逆转酶的体外活性抑制实验，发现提取物P3
能有效的抑制蛋白酶活性，也有微弱的抑制逆转录
酶活性。由此可见，蒲葵籽的醋酸乙酯提取物具有较
强的体外抗HIV一1活性，其作用机制可能主要为阻
断病毒进入和抑制HIV一1蛋白酶活性。目前本课题
组正在对蒲葵籽的醋酸乙酯提取物P3进行进一步
的分离纯化，希望从中筛选出具有抗HIV活性的化
合物，明确其作用机制。
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20(S)一原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠
肿瘤生长的抑制作用
张锐，徐华丽，曲绍春，于小风，陈明侠，睢大贫+
(吉林大学药学院药理教研室，吉林长春130021)
摘 要：目的 研究20(S)一原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采
用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)一原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用，流式细胞术测定20(S)一原
人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响，并在裸小鼠人肺癌模型E观察20(5)一原人参二醇对荷瘤裸
小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)一原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系，并
且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰，24小时凋亡率分别为32．47％、32．75％、33．51％。荷瘤裸小鼠动物实验
表明，20(S)一原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用，抑瘤率分别为18．78％、34．37％、50．02％。
结论20(S)一原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。
关键词：20(S)一原人参二醇；A549细胞；肺癌；裸小鼠
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1838—04
收稿日期：2008—03—29
基金项目：国家“九五”重点科技攻关课题(96—901—01—83)
作者简介：张锐(1978一)，女，博士研究生，研究方向为抗肿瘤药物研究。Tel：(0431)85619705E—mail：zgrl219@163．com
*通讯作者睢大贫Tel：(0431)85619705E—mail：suidy@jlu．edu．cn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1839·
Inhibitionof20(S)一protopanaxadiolonproliferationoflungcancer
A549cellsandtumorg owthofnudemice
ZHANGRui，XUHua—li，QUShao—chun，YUXiao—feng，CHENMing—xia，SUIDa—yuan
(DepartmentofPharmacology。SchoolofPharmacy。JilinUn versity，Changchun130021。China)
Abstract：ObjectiveTostudytheffectsof20(5)一protopanaxadiol(PPD)ontheproliferationof
humanlungcarcinomaA549cellineandthetumorg owthofnudemice．MethodsHumanlung
carcinomaA549cellinewastreatedwithPPD．CellgrowthratewasdeterminedwithMTTassay．The
effectsofPPDonapoptosisrateandeellcyclew reobservedbytheflowcytometer．Thesubcutaneous
transDlantabletumormodelofhumanlungcancerinnudemicewasestablished．Thetumorinhibitoryrate
wascalculatedtoevaluatetheanti—tumoreffect．ResultsPPDcouldinhibittheproliferationofhuman
lungcarcinomaA549cellinatime—anddose—dependentmanner．Theapoptoticpeakwasobservedinthe
PPDgroupswiththeapoptosisrateof32．47％，32．75％，and33．51％in24h，respectively．AndPPD
inhibitedthgrowthof umanlungcarcinomaA549cellsinnudemicewiththetumorinhibitoryrateof
18．78％，34．37％，and50．02％．Conclusion20(S)一Protopanaxadiolcouldinhibittheproliferationof
lungcancerA549cellandthetumorg owthofnudemice．
Keywords：20(S)一protopanaxadiol(PPD)；A549cell；lungcancer；nudemice
20(S)一原人参二醇(protopanaxadiol，PPD)
是从西洋参PanaxquinquefoliumL．的茎叶中提
取并开发利用的天然抗癌新药，具有广谱的抗肿瘤
作用n]。20(S)一原人参二醇对动物移植性肿瘤B16、
Lewis、H：。肿瘤、HepG2和HeI。a等癌细胞有较强
抑制生长作用，对HeLa细胞集落形成的抑制强度
超过原人参二醇Rg。[2。3；还能使乳腺癌、白血病、淋
巴癌等癌细胞发生程序性死亡，且癌细胞株凋亡率
随20(S)一原人参二醇浓度升高而增加【4’5]。近年来
研究表明20(S)一原人参二醇对非小细胞型肺癌有
显著疗效，且对多药耐药性及晚期癌症有明显抑制
作用L63；本实验采用20(S)一原人参二醇直接作用于
人肺癌A549细胞和荷瘤裸小鼠，观察20(S)一原人
参二醇对肺癌细胞和荷瘤裸小鼠肿瘤组织的生长抑
制作用。
1材料
1．1试剂与仪器：20(S)一原人参二醇(质量分数
98．5％)由浙江亚克药业有限公司提供，批号
020115。羧甲基纤维素钠(CMC，上海化学试剂公司
提供)；注射用环磷酰胺(CTX，上海华联制药有限
公司提供，批号20040205，规格为200mg／支)；人
肺癌A549细胞(中国科学院上海细胞生物研究所
提供)，RPMI1640培养基(GibcolBRI。公司)，胎
牛血清、二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)、胰
蛋白酶(上海生物工程有限公司)；碘化丙啶(PI)
购于北京鼎国生物有限公司；RnaseA为Sigma产
品；超净工作台，C0：孵育箱，酶标仪(El×800
Bi02TEKInstruments)。
1．2 动物和细胞株：BALB／C裸小鼠，6～8周龄，
体质量18～22g，雌雄兼用，每批实验采用同一性
别，由中国医学科学院实验动物繁育场提供，合格证
号：SCXKll—00—0006，饲养于SPF级动物实验室。
人小细胞肺癌细胞株A549，购自中国科学院上海
细胞生物研究所。
2方法
2．1对A549细胞生长的抑制作用：取对数生长期
的A549细胞，调整细胞浓度为4×105／mI。，接种于
96孔培养板，细胞对照组(1％DMSO)和药物处
理组加入100肛I。细胞悬液，每组设3个复孑L，空白
对照组加入RPMI1640全培养基，每孑L100肛L。细
胞贴壁24h后，药物处理组分别加入终浓度为
12．5、25、50、100、200／J￡mol／L20(S)一原人参二醇，
100ttL／孔，细胞对照组加入含l％DMSO的
RPMI1640培养液i00tLL／孑L，空白对照组只加入
RPMI1640培养液100tLL／孑L。将96孔培养板置于
37‘C、5％CO：培养箱分别培养12、24、36、48、72h
后，加入5mg／mLMTT10弘L，继续培养4h，弃上
清液，加入DMSO100ttL／孑L，溶解紫色结晶体，振
摇10min，待结晶溶解后置于酶标仪，测定570nm
的吸光度(A)值，计算抑制率[抑制率一(I一实验
组A值／对照组A值)×100％]。实验重复3次，将
作用时间和抑制率经一定变换后用非线性回归拟合
计算，求得作用24h的半数抑制浓度-In。)。
2．2对A549细胞凋亡及周期的影响：取对数生长
期的A549细胞，调整细胞数为5×105个，接种于6
孔培养板内，贴壁24h，分别加入终浓度为100、50、
万方数据
·1840· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
25／-mol／L的20(S)一原人参二醇，终质量浓度为
1肛g／mL的CTX。作用24h后，用胰酶消化细胞，
收集1×105个细胞于70％冰乙醇固定过夜，离心
弃掉乙醇，用PBS洗涤1次，将细胞重悬于300弘L
PBS中，加入RnaseA和PI室温避光染色30min，
流式细胞仪激发波长488nm检测凋亡率及各周期
细胞比例。每批实验重复3次。
2．3 裸小鼠人肺癌模型的建立：A549细胞在
37℃、5％C02，含10％胎牛血清的RPMI1640培
养基中培养，将处于对数生长期的细胞用0．25％胰
蛋白酶消化，用无菌PBS液重悬制成5×107／mL的
单细胞悬液，每只裸小鼠于右侧腹股沟区皮下接种
0．2mL细胞悬液，每天观察各注射点有无红肿破溃。
2．4抑瘤实验：造模7d后，注射局部出现明显皮
丘，所有裸鼠均出现直径8～10mm的皮下结节，移
植瘤模型建立。将40只裸小鼠随机分为5组，每组
8只，分为模型组，给予1％羧甲基纤维素钠；阳性
药对照组，给予CTX30mg／kg；20(S)一原人参二醇
大、中、小剂量组，分别给予20(5)一原人参二醇
100、50、25mg／kg。分组当日开始给药，1％羧甲基
纤维素钠和20(S)一原人参二醇每日ig给药，连续
15d，CTX隔日ip给药，共7次。观察肿瘤体积和生
长速度，停药后第2天处死裸鼠，称体质量，剥离瘤
组织，称取瘤质量，计算抑瘤率[抑瘤率一(1一实验
组平均瘤质量／对照组平均瘤质量)×100％]。
2．5 统计学处理：数据以z±5表示，采用SPSS
12．0统计学软件进行分析。
3 结果
3．1对A549细胞增殖的抑制作用：由图1可见随
着20(S)一原人参二醇浓度的升高，对细胞增殖的抑
制率也逐渐升高，不同浓度的20(S)一原人参二醇对
细胞均有抑制作用。同时，在显微镜下观察细胞的形
态变化，结果发现，在给药组中细胞皱缩、破裂、聚集
成团，培养液中散在细胞碎片，其24h的IC。。值为
39．75／比mol／L，说明20(S)一原人参二醇对A549细
胞增殖具有明显的抑制作用，且随着时间的增加抑
制作用加强，存在时间剂量关系。
3．2对A549细胞凋亡及周期的影响：流式细胞仪
分析显示，20(S)一原人参二醇组及CTX组均出现典
型的亚G。期凋亡峰，CTX组及100、50、25tL￡mol／L
20(S)一原人参二醇组凋亡率分别为10．51％、
32．47％、32．75％、33．51％，各剂量20(S)一原人参
二醇组凋亡率均高于对照组及CTX组(P<0．05)。
20(S)一原人参二醇组细胞处于G。／G。期的比率明显
120
芝80
需
磊
嚣40
0
t，h
1～6-0．12．5、25、50、100、200pmol-L-120(S)一原人参二醇
1—6—0，12．5，25，50。100，200pmol·L一120(S)一protopanxadiol
图1 20(S)一原人参二醇对A549细胞的生长抑制作用
(i土s，n一3)
Fig．1Inhibitionof20(S)一protopanxadiolonproli—
ferationofA549cellsG土s，n一3)
高于对照组(P率则明显低于对照组(P期相对稳定，说明20(5)一原人参二醇组肿瘤细胞增
殖指数下降，细胞生长受阻于G。／G，期，细胞趋于成
熟，见表1。
表1 20(S)一原人参二醇对A549细胞凋亡和周期的影响
(；士s，开一3)
Table1 Effectof20(S)一protopanaxadiolonapoptosis
andcycleofA549cells(工±s，n一3)
与对照组比较：‘尸。P3．3荷瘤裸小鼠人肺癌模型的建立情况：所有40
只裸小鼠在实验过程中均成活，各个细胞悬液接种
点未见红肿破溃及出血表现。在细胞悬液接种的第
7天，各个接种点均可见肿瘤结节，直径8～10mm。
在实验中观察到裸小鼠在给予20(5)一原人参二醇
后无异常表现。肿瘤组织从裸小鼠上剥离下来进行
肉眼观察，呈结节状，灰白色，质地偏硬，表面有假包
膜，容易与周围组织剥离，用药组肿瘤横断面大部分
可见中央出现明显的坏死灶，模型组则少见坏死灶。
3．4抑瘤实验：由表2可见，除CTX组外，20(S)一
原人参二醇各组裸小鼠实验前后体质量没有明显的
差异，在15d给药后，可明显抑制人小细胞肺癌在
裸鼠体内的生长，其抑瘤率为18．78％～50．02％
(P 万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月- 841·
表2 20(S)一原人参二醇对人肺癌A549裸小鼠肿瘤生长
的抑制作用(；土s)
Table2 Inhibitionof20(S)一protopanaxadioI
ongrowthof umanlu gtumor
A549cellsinnudemice(；±s)
与模型组比较：‘尸’P<0．05’。P4讨论
人参作为高档滋补珍品已有几千年的历史，人
参的主要活性成分是人参皂苷，人参皂苷具有抗疲
劳、延缓衰老、抑制肿瘤细胞生长、调节中枢神经系
统、提高机体免疫力、改善心脑血管供血不足等作
用L7]。关于抗肿瘤作用方面研究最多的是二醇组人
参皂苷20(S)一人参皂苷Rg。和Rh：，它们在抑制肿
瘤血管生成、降低肿瘤微血管密度、诱导肿瘤细胞凋
亡、抗肿瘤转移、对化疗药物减毒增效等方面具有较
广泛的抗肿瘤功效[8’9]。将人参皂苷Rg。的3位上的
末端葡萄糖水解掉可得到人参皂苷Rh：，再把人参
皂苷Rh：的3位上的最后一个葡萄糖水解掉就得到
20(S)一原人参二醇，20(S)一原人参二醇作为人参二‘
醇组皂苷化学水解及人肠道菌代谢的最终产物，有
可能比人参皂苷Rg。和人参皂苷Rh：具有更强的抗
癌活性、抗癌增效减毒作用以及增强机体免疫功能
的作用，而且生物利用度可能更高Ll⋯。利用高沸点
有机溶剂及碱催化降解方法制备了具有天然构型而
且产率较高的20(S)一原人参二醇，基本解决了常规
方法过程复杂、产率低、成本高的问题，并对其抗肿
瘤的作用进行了初步的研究。
本研究采用MTT法观察20(5)一原人参二醇
对人小细胞肺癌A549细胞增殖的影响，结果表明
20(S)一原人参二醇对A549细胞的增殖具有明显的
抑制作用，随着药物浓度的增加，这种抑制作用也逐
渐增强，并且呈现一定的剂量依赖关系；此外，流式
细胞仪结果显示，经20(S)一原人参二醇处理24h
后的A549细胞出现典型的亚G，期凋亡峰，且20
(S)一原人参二醇阻止肿瘤细胞生长于G。／G。期，初
步结果表明20(5)一原人参二醇对A549细胞的杀
伤作用可能由于其对A549细胞凋亡的诱导；在动
物实验中，可以看到20(S)一原人参二醇组肿瘤质量
和模型组的肿瘤质量相比具有显著性差异(P<
0．001)，说明20(S)一原人参二醇对荷瘤裸鼠的肿瘤
生长具有明显的抑制作用。
肺癌的发生是多因素综合作用的结果，很难从
单一因素变化来确定其发病机制。本实验只说明了
20(S)一原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸鼠
肿瘤生长具有抑制作用，其具体的作用机制仍有待
深入研究。但20(S)一原人参二醇作为具有抗肿瘤作
用的单体皂苷，其抗肿瘤生长的作用机制可能与其
诱导肿瘤细胞凋亡、抗肿瘤转移、清除肿瘤细胞和组
织内的自由基、提高抗氧化水平、通过调控基因表达
和信号传导通路来调控肿瘤细胞生长的作用有关。
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万方数据
20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生
长的抑制作用
作者： 张锐， 徐华丽， 曲绍春， 于小风， 陈明侠， 睢大筼， ZHANG Rui， XU Hua-li， QU
Shao-chun， YU Xiao-feng， CHEN Ming-xia， SUI Da-yuan
作者单位： 吉林大学药学院药理教研室,吉林,长春,130021
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 5次

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3. 张锐.徐华丽.于小风.曲绍春.陈明侠.睢大筼.ZHANG Rui.XU Hua-li.YU Xiao-feng.QU Shao-chun.CHEN Ming-
xia.SUI Da-yuan 20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞体内外作用的研究[期刊论文]-中国药理学通报2008,24(11)
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癌间质血管密度和肿瘤细胞增殖活性的影响[期刊论文]-临床肝胆病杂志2006,22(4)
6. 冷吉燕.付军.王继萍.LENG Ji-yan.FU Jun.WANG Ji-ping 20(s)-原人参二醇对肝癌血管内皮生长因子及碱性成
纤维细胞生长因子蛋白表达的影响[期刊论文]-临床肝胆病杂志2008,24(1)
7. 曲婷婷 人参有效成分抗肿瘤的研究进展[期刊论文]-中医药学刊2005,23(12)
8. 崔倩卫.王继萍.冷吉燕 20(S)-原人参二醇对胃癌细胞增殖活性及细胞凋亡的影响[期刊论文]-中国老年学杂志
2011,31(5)
9. 曾小莉.涂植光 人参皂甙Rh2对人肝癌细胞SMMC-7721信号传导的影响[期刊论文]-中华肝脏病杂志2004,12(9)
10. 冷吉燕.王桂贤.崔倩卫.秦俊杰 20(S)-原人参二醇对胃癌血管形成的抑制作用[期刊论文]-中国老年学杂志
2010,30(20)

引证文献(5条)
1.赵光辉.樊学斌.李超.李玮峰.牛苗玲 20(S)-原人参二醇对鼻咽癌细胞凋亡的诱导作用[期刊论文]-按摩与康复医
学（下旬刊） 2011(4)
2.翟旭光.陈广通 20(S)-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用[期刊论文]-南通大学学报（医学版）
2010(5)
3.翟旭光.陈广通.熊旭东.应泽亮.沈琴 20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的诱导作用[期刊论文]-交通医学
2010(4)
4.顾恪波.王逊.何立丽.孙桂芝 孙桂芝教授治疗肺癌常用方剂浅析[期刊论文]-世界中西医结合杂志 2013(2)
5.王小峰.潘欣萍.徐建彬.陈伟.王玉芹 20(S)-原人参二醇药学与生物活性研究[期刊论文]-长春中医药大学学报
2012(5)


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