全 文 :中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第ll期2008年11月· 667·
黄酮的提取率最高,总黄酮的平均质量分数达
1.853%。因此实验选择用70%乙醇做提取用的
溶剂。
流动相的选择:黄酮碳苷的测定多采用水一甲醇
系统,但在此流动相的不同比例条件下荭草苷与异
荭草苷极性很接近,使样品中的两个成分很难达到
基线分离,因而实验尝试加入适量酸以增大流动相
的极性,结果发现选择甲醇一水一冰醋酸(40:70:1)
可以达到理想的分离效果。
本实验采用微波萃取法提取淡竹叶中的黄酮
苷,具有溶剂用量少,提取快速,有效成分的提取率
较高的特点。所建立的RP—HPLC测定方法具有方
法简便、准确,结果稳定、重复性好的特点,可作为淡
竹叶及其制剂质量控制的定量方法。
参考文献:
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HPLC法测定大豆异黄酮的不确定度评定
饶毅1,张洁2,李新南2,魏惠珍1,吴有根2,王跃生1
(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西南昌 330006;2.江西中医学院,江西南昌330004)
擒耍:目的对HPLC法测定大豆异黄酮中的大豆苷和染料木苷的测定不确定度进行分析,找出影响不确定度
的因素。方法采用HPLC法测定大豆苷和染料木苷,并根据《测量不确定度评定与表示》(JFL059—1999)中有关规
定评估其不确定度。结果 不确定度评估大豆苷为±0.51%、染料木苷为士0.79%。结论大豆苷不确定度各分量
均较小,而染料木苷不确定度主要由对照品的稀释、样品及对照品的峰面积所引入。
关键词:大豆异黄酮I大豆苷}染料木苷;高效液相色谱;测量不确定度
中图分类号:R286.1 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)11—1667一04
测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的
分散性的参数[1]。《检测和校准实验室能力的通用要
求》规定,检测和校准实验室都必须有对测量结果进
行不确定度评定的程序,并应用这些程序对实验结
果进行测量不确定度的评定。本实验通过HPLC法
测定大豆异黄酮中大豆苷、染料木苷的不确定度评
定,建立HPLC测定法的不确定度评定方式。
1材料
岛津LC一10A高效液相色谱仪,岛津AUW
220D电子天平,所用玻璃器皿均为天玻牌A级。
甲醇、乙腈均为色谱纯,所用试剂水均为超纯
水;大豆苷对照品由中国药品生物制品检定所提供,
染料木苷对照品由深圳TAUT0生物技术公司提
供,质量分数≥99%;大豆异黄酮由华北制药股份有
限公司提供,批号:Y0607003。
2方法与结果
2.1大豆异黄酮中大豆苷和染料木苷的HPLC法
测定
2.1.1 色谱条件:大连依利特公司C。。色谱柱(250
mm×4.6mm,5pm);流动相:乙腈一水(15:85);
体积流量:1.0mL/min;检测波长:254nm;柱温:40
℃;进样量:10弘L。
2.1.2对照品溶液的配制:精密称取大豆苷对照品
10.20mg置50mL量瓶,用50%乙醇稀释至刻度,
摇匀,即得大豆苷对照品储备液。精密称取染料木苷
对照品12.31mg置25mL量瓶,用50%乙醇稀释至
刻度,摇匀,再从中取1mL置10mL量瓶中,用50%
乙醇稀释至刻度,摇匀,即得染料木苷对照品储备
液。分别取大豆苷、染料木苷对照品储备液各1mL,
置10mL量瓶中,用50%乙醇稀释至刻度,摇匀,
即得。
2.1.3供试品溶液的配制:精密称取大豆异黄酮样
品10mg置100mL量瓶中,加入适量50%乙醇,超
声溶解,用50%乙醇加至刻度,摇匀,即得。
收稿日期:2008—03—22
作者简介:饶毅(1964一),男,江西南昌人,教授,博士,主要从事中药质量控镧研究工作.
Tell(0791)7119609E—mail:raoyi.99@126.corli
万方数据
·1668· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
2.1.4 测定结果:依据Q/HYGJ03.04.08—2004
《华北制药股份有限公司企业标准一大豆异黄酮》进
行测定,结果大豆异黄酮中大豆苷的质量分数为
21.31%(咒=3),染料木苷的质量分数为10.38%
(咒一3)。
2.2不确定度的评定:依据《测量不确定度评定与
表示})(JFl059—1999)进行不确定度评定。采用数学
模型不确定度x=i锻X100%,其中优一为对
照品的质量,A,为样品的峰面积,玑为样品的稀释
体积,A,为对照品的峰面积,E为对照品的稀释体
积,m,为样品的称样量。
2.3不确定度分量的分析:被测样品的不确定度包
括对照品峰面积的不确定度、对照品溶液的不确定
度、样品峰面积的不确定度、样品溶液的不确定度4
个方面,其中对照品溶液的不确定度包括标准物质
纯度的不确定比(Pi)、称量天平带人的不确定度
“(优,)和配制对照品的不确定度轧(yi)3个方面,样
品溶液的不确定度包括称量天平带入的不确定度
“(,,z,)、配制对照品的不确定度“(y.)两个方面。
2.3.1对照品质量的相对不确定度扰(优。):主要有3
个来源,包括①对照品质量分数的不确定度“(户,):
大豆苷对照品未给出质量分数和限度标识,染料木
苷对照品证书提供的质量分数为99%,未给出限度
标识,故此项不考虑。②称量由天平示值带入的不确
定度“(mi。):电子天平经检定为1级,天平称量允差
为士0.1mg,则标准扩展不确定度U=0.1mg
(志一2),按正态分布换算成标准偏差为0.1/2=0.05
mg。③称量由天平重复性带人的不确定度U(研堙):
根据天平的检定证书重现性标准偏差为0.05mg。
因此,合成标准不确定度 “(mi)=
厂———————————一 一√“2(m订)+“2(mf2)=~/O.052+0.052=0.071mg,相对标准不确定度中大豆苷瓮碧=0.071/10.20=
0.70o/,染料木苷型要卫=o.071/12.31=0.58%。
|I‘i
2.3.2配制大豆苷对照品时由玻璃器皿带入的相
对不确定度“(yi):V产生笋。
’13
(1)50mL量瓶“(K。)来源主要有3种:①校准:A级
50mL单标线移液管示值允差士0.05mL,取k一
/可,则“(yIll):生兰=0.029mL;②重复性:重
~/3
复测定10次,测得u(y-12)=0.0095mL;③温度:由
于本试验温度与校准温度相同,此项可忽略。
u(V11)=√“2(y121)+“2(yi22)=
以订函乒再F瓣=o.030mL
(2)1mL移液管u(yi:)主要来源有3种:①校准:A
级1mL单标线移液管示值允差士0.007mL,取k=
/丁,“(y.21):i0.007:0.0040mL;②重复性:通
~/3
过10次测定,计算得“(y-22)=o.0067mL;⑧温度:
由于本试验温度与校准温度相同,所以此项可忽略。
u(V托)一 √“2(ym)+“2(yi22)=
舨订瓜兀F丽1丽=0.0078mL
(3)10mL量瓶“(yf7)所测结果同拼(yfl):摊(yi7)=
√U2(ym)+影2(yi72)=Jo.0292+0.00952
因此大豆苷对照品合成标准相对不确定度为:
掣一√[掣]2+[掣]2+[掣]z-
40.00062+0.00782+0.00142=0.79%
2.3.3配制染料木苷对照品时由玻璃器皿带入的
相对不确定度“(y,):V,=
y“×yis×yf2
y门×yi6
。
(1)25mL量瓶不确定度“(E。):①校准摊(yⅢ):A
级25mL单标线移液管示值允差士0.030mL,k=
v厂丁,拓(Vi31):;0.030:0.017mL;②重复性
~/3
u(Vm):重复测定10次,测得“(yf32)一0.021mL;③
温度:由于本试验温度与校准温度相同,所以此项可
忽略。
u(Vi3)一 √“2(y埘)+“2(Vj32)=
~/O.0172+0.0212= .027mL。
(2)1mL移液管不确定度群(V“):同“(y,。),
“(V“)一40.00402+0.00672=0.0078mL。
(3)10mL量瓶扰(V,5):同“(V订),甜(Vf5)=
/0.0122+0.00832=0.014mL。
(4)1mL移液管不确定度“(y,。):同“(y,:),
“(Vi6)=/0.00462+0.00672=0.0078mL。
(5)10mL量瓶“(y,,)的不确定度同“(yn),
扰(yi7)=Jo.0292+0.00952。
因此,染料木苷对照品的合成相对标准不确定
度 计 算 公 式 为:坚乒 :
~%/露-u(ViD-2码-u(V可,)-2i芦-u(再Vs)-2磅-u(V,)-⋯2-百u(VT).-z’
:,,/—0.—00—1—12—+—0.—00—7—82—+—0.—00—1—4z—+—O.—00782+ .0014z=
万方数据
中草嚼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 669·
1.13%;
2.3.4对照品测得的峰面积的相对不确定度“(A):
①大豆苷:对照品液4次进样重复测得量的标准不
确定度按贝赛尔公式计算s=
2396·56。则相对不确定度配(A一)一者=0.32%。
②染料木苷:对照品液4次进样重复测得量的标准
不确定度按贝赛尔公式计算s=
3252.5。则相对不确定度摊(A)一音=2.76%。
2.3.5样品质量的不确定度U(优,):主要来源有2
种(1)电子天平称量示值的不确定度U(优,,):天平称
量允差为士0.1mg,则标准扩展不确定度U=0.1
mg(五一3),按正态分布换算成标准偏差为U(m。。)=
0.1/3=0.033mg;(2)电子天平称量重复性的不确
定度扰(m,:):根据天平的检定证书重现性标准偏差
为0.05mg,即U(m,2)=0.05mg。因此,合成不确定
-_____。。。。。__-___●-●-______-●_-_____-_-_______-____________一
度 为: “ (m,1)一 √甜2(mn)+犯2(m。2)=
J0.0332+0.052—0.060mg,相对标准不确定度
竺!竺!:0.060/10.24=0.58%
mJ
2.3.6稀释样品时,由玻璃器皿(100mL量瓶)带
入的不确定度“(E):(1)校准U(y,。):A级10mL单
标线移液管示值允差土0.100mL,取k=/3,则
“(y,。)一堕型:0.058mL;(2)重复性矩(y,:):重复
~/3
量取10次,测得U(y,2)=O.032mL;(3)由于本试验
温度与校准温度相同,所以此项可忽略。U(n)=
~/—u2(V,1)+—u2(s,z):40.0582干o-0322:o.066
mL掣一o.。66%
2.3.7样品测得的峰面积的相对不确定度U(A):
样品6次重复测定结果的标准不确定度按贝赛尔公
式计算5大豆昔= 一1200I5橐并木昔=
=5442。相对不确定度托大豆昔(A.)一
警乱015%,嘲一∽2警22.28%。
2.3.8合成不确定度:各相对不确定度分量见表1、2。
大 豆 苷 合 成 不 确 定 度 =
“页i河孑万了瓦瓦雨干万瓦丁瓦瓦孬干而 =
40.70%2+O.79%2+0.3zS2+0.58S2+o.15%2--I-o.066%2=
O.012
染 料木苷 合 成不 确 定 度 一
J、/—uZ—(m—l—)+——u2—(V—i—)+—u—Z—(A—i—)+—u—Z—(m—,)—+—u—Z(—A—,)—+—u—Z(—V—,)一
/O.58%2+1.13%2+2.76%2+0.58S2+O. 66%2+2.28%2=
0.038
2.3.9扩展不确定度:取包含因子k=2,则大豆苷
扩展不确定度Ur(S)=21.31%×0.012×2—
0.51%,染料木苷扩展不确定度Ur(S)=10.38%×
0.038×2=0.79%。
2.3.10测量不确定度报告:质量分数测定的结果
可表示为大豆苷(21.31士0.51)%,染料木苷
(10.38士0.79)%。
3讨论
由于被测样品为原料粉末,主成分测定过程中
不受辅料和杂质的影响,且其样品非均匀性引入的
不确定度可忽略。本测定方法采用单点对照品比较
裹1大豆苷不确定度分■
Table1 Uncertaintyitemofdaldzin
万方数据
·1670· 中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
表2染料木苷不确定度分■
Table2 Uncertaintyitemofgenistin
法,由于配制的样品与对照品的质量浓度相近,其峰
面积响应中可能的非线性引入的不确定度可忽略。
环境温度、环境湿度的随机变化对质量、峰面积会带
来影响,其不确定度纳入称量重复性、进样重复性
中,因样品和对照品几乎为同时操作,故环境温度湿
度的系统影响而可忽略。
由于本实验中使用的天平和量瓶的精密度较
高,不确定度均参考检定和实验的数据,未采用最大
允差,且称量接近、操作简单,不包括人为过失误差,
故不确定度较小。由于HPLC仪本身对测定结果的
影响因素很多,难以一一评估。又因为在实际测定
中,HPLC仪误差引起的不确定度已体现在色谱峰
面积的测量结果中,所以对HPLC仪的体积流量、流
量精度和进样精密度等各因素的不确定度分量不作
另行细化讨论。实验未进行回收率的不确定度评定,
并以回收率对检测结果进行修正,因为回收率测得
值的离散度是包含在测量结果离散度内的,且用回
收率修正结果,不仅会重复评定,而且会脱离实
际‘2J。
分析评估不确定度时,应尽量考虑到产生不确
定度的所有来源,因为合成不确定度的数值几乎完
全取决于重要的不确定度分量。根据上述评定可得,
本方法测量大豆苷结果的各分量不确定度均较小,
测量染料木苷结果的不确定度主要来自于对照品和
样品的峰面积的不确定度、稀释对照品带来的不确
定度。比较大豆苷和染料木苷的不确定度,染料木苷
的扩展不确定度(土0.79%)为大豆苷的扩展不确定
度(土0.51%)的1.5倍。这是由于染料木苷对照品
的质量浓度较低,约为大豆苷对照品的1/5倍,故染
料木苷在高效液相色谱上的响应不稳定而造成其峰
面积不确定度较大。且染料木苷对照品稀释次数较
多,稀释过程中带来了较大的不确定度。在分析了以
上影响测量不确定度的原因后,如果采取了相应的
措施,完全可以将测量结果的不确定度进一步减小。
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测量不确定度评定及防止重复评定的探讨l-J].中国卫生检验
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毛知母的减压加温润制工艺研究
宋坤,陆兔林,季德。
(南京中医药大学药学院,江苏南京210029)
摘要:目的探讨毛知母的最佳减压加温润制工艺。方法 以菝葜皂苷元、芒果苷为指标选择润制时间、润制温
度、润制压力3个因素,用L。(3·)正交设计表,采用方差分析法,对毛知母进行减压加温润制工艺的优选。结果润
收稿日期:2008—05—07
作者简介:宋坤(1973~),江苏省南京人,讲师,从事中药饮片质量标准方面的研究工作.
...Tel:(025)85811513E—mail:songseng@yeah.net
*南京中医药大学02届硕士研究生
万方数据
HPLC法测定大豆异黄酮的不确定度评定
作者: 饶毅, 张洁, 李新南, 魏惠珍, 吴有根, 王跃生
作者单位: 饶毅,魏惠珍,王跃生(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330006), 张洁
,李新南,吴有根(江西中医学院,江西,南昌,330004)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2008,39(11)
被引用次数: 3次
参考文献(2条)
1.JF 1059-1999.测量不确定度评定与表示 1999
2.冯家力;潘振球;曾栋 气相色谱-质谱法测定马吲哚的测量不确定度评定及防止重复评定的探讨[期刊论文]-中国
卫生检验杂志 2006(08)
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本文链接:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200811023.aspx