全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第ll期2008年11月· 667·
黄酮的提取率最高，总黄酮的平均质量分数达
1．853％。因此实验选择用70％乙醇做提取用的
溶剂。
流动相的选择：黄酮碳苷的测定多采用水一甲醇
系统，但在此流动相的不同比例条件下荭草苷与异
荭草苷极性很接近，使样品中的两个成分很难达到
基线分离，因而实验尝试加入适量酸以增大流动相
的极性，结果发现选择甲醇一水一冰醋酸(40：70：1)
可以达到理想的分离效果。
本实验采用微波萃取法提取淡竹叶中的黄酮
苷，具有溶剂用量少，提取快速，有效成分的提取率
较高的特点。所建立的RP—HPLC测定方法具有方
法简便、准确，结果稳定、重复性好的特点，可作为淡
竹叶及其制剂质量控制的定量方法。
参考文献：
1-13李水福，王如伟．陈琴鸣，等．浅谈竹类的药用现状及开发利
用前景[J]．中国药业，2002，11(11)：53．
[z]张胜帮，赵玲玲．淡竹叶中黄酮类化合物的提取研究[J]．食
品科学，2006，27(10)：255—257．
[3]宋秋烨，吴启南．中药淡竹叶的研究进展[J]．中华中医药学
刊，2007，25(3)：526—527．
[4]宋秋烨，陈梅，吴启南．淡竹叶中总黄酮提取工艺研究[J]．
中国中医药信息杂志，2007，14(3)：46—47．
[5]李核，李攻科，张展叠．微波辅助萃取技术的进展[J]．分
析化学，2003，31(10)：1261—1265．
HPLC法测定大豆异黄酮的不确定度评定
饶毅1，张洁2，李新南2，魏惠珍1，吴有根2，王跃生1
(1．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌 330006；2．江西中医学院，江西南昌330004)
擒耍：目的对HPLC法测定大豆异黄酮中的大豆苷和染料木苷的测定不确定度进行分析，找出影响不确定度
的因素。方法采用HPLC法测定大豆苷和染料木苷，并根据《测量不确定度评定与表示》(JFL059—1999)中有关规
定评估其不确定度。结果 不确定度评估大豆苷为±0．51％、染料木苷为士0．79％。结论大豆苷不确定度各分量
均较小，而染料木苷不确定度主要由对照品的稀释、样品及对照品的峰面积所引入。
关键词：大豆异黄酮I大豆苷}染料木苷；高效液相色谱；测量不确定度
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1667一04
测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的
分散性的参数[1]。《检测和校准实验室能力的通用要
求》规定，检测和校准实验室都必须有对测量结果进
行不确定度评定的程序，并应用这些程序对实验结
果进行测量不确定度的评定。本实验通过HPLC法
测定大豆异黄酮中大豆苷、染料木苷的不确定度评
定，建立HPLC测定法的不确定度评定方式。
1材料
岛津LC一10A高效液相色谱仪，岛津AUW
220D电子天平，所用玻璃器皿均为天玻牌A级。
甲醇、乙腈均为色谱纯，所用试剂水均为超纯
水；大豆苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，
染料木苷对照品由深圳TAUT0生物技术公司提
供，质量分数≥99％；大豆异黄酮由华北制药股份有
限公司提供，批号：Y0607003。
2方法与结果
2．1大豆异黄酮中大豆苷和染料木苷的HPLC法
测定
2．1．1 色谱条件：大连依利特公司C。。色谱柱(250
mm×4．6mm，5pm)；流动相：乙腈一水(15：85)；
体积流量：1．0mL／min；检测波长：254nm；柱温：40
℃；进样量：10弘L。
2．1．2对照品溶液的配制：精密称取大豆苷对照品
10．20mg置50mL量瓶，用50％乙醇稀释至刻度，
摇匀，即得大豆苷对照品储备液。精密称取染料木苷
对照品12．31mg置25mL量瓶，用50％乙醇稀释至
刻度，摇匀，再从中取1mL置10mL量瓶中，用50％
乙醇稀释至刻度，摇匀，即得染料木苷对照品储备
液。分别取大豆苷、染料木苷对照品储备液各1mL，
置10mL量瓶中，用50％乙醇稀释至刻度，摇匀，
即得。
2．1．3供试品溶液的配制：精密称取大豆异黄酮样
品10mg置100mL量瓶中，加入适量50％乙醇，超
声溶解，用50％乙醇加至刻度，摇匀，即得。
收稿日期：2008—03—22
作者简介：饶毅(1964一)，男，江西南昌人，教授，博士，主要从事中药质量控镧研究工作．
Tell(0791)7119609E—mail：raoyi．99@126．corli
万方数据
·1668· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
2．1．4 测定结果：依据Q／HYGJ03．04．08—2004
《华北制药股份有限公司企业标准一大豆异黄酮》进
行测定，结果大豆异黄酮中大豆苷的质量分数为
21．31％(咒=3)，染料木苷的质量分数为10．38％
(咒一3)。
2．2不确定度的评定：依据《测量不确定度评定与
表示})(JFl059—1999)进行不确定度评定。采用数学
模型不确定度x=i锻X100％，其中优一为对
照品的质量，A，为样品的峰面积，玑为样品的稀释
体积，A，为对照品的峰面积，E为对照品的稀释体
积，m，为样品的称样量。
2．3不确定度分量的分析：被测样品的不确定度包
括对照品峰面积的不确定度、对照品溶液的不确定
度、样品峰面积的不确定度、样品溶液的不确定度4
个方面，其中对照品溶液的不确定度包括标准物质
纯度的不确定比(Pi)、称量天平带人的不确定度
“(优，)和配制对照品的不确定度轧(yi)3个方面，样
品溶液的不确定度包括称量天平带入的不确定度
“(，，z，)、配制对照品的不确定度“(y．)两个方面。
2．3．1对照品质量的相对不确定度扰(优。)：主要有3
个来源，包括①对照品质量分数的不确定度“(户，)：
大豆苷对照品未给出质量分数和限度标识，染料木
苷对照品证书提供的质量分数为99％，未给出限度
标识，故此项不考虑。②称量由天平示值带入的不确
定度“(mi。)：电子天平经检定为1级，天平称量允差
为士0．1mg，则标准扩展不确定度U=0．1mg
(志一2)，按正态分布换算成标准偏差为0．1／2=0．05
mg。③称量由天平重复性带人的不确定度U(研堙)：
根据天平的检定证书重现性标准偏差为0．05mg。
因此，合成标准不确定度 “(mi)=
厂———————————一 一√“2(m订)+“2(mf2)=~／O．052+0．052=0．071mg，相对标准不确定度中大豆苷瓮碧=0．071／10．20=
0．70o／，染料木苷型要卫=o．071／12．31=0．58％。
|I‘i
2．3．2配制大豆苷对照品时由玻璃器皿带入的相
对不确定度“(yi)：V产生笋。
’13
(1)50mL量瓶“(K。)来源主要有3种：①校准：A级
50mL单标线移液管示值允差士0．05mL，取k一
／可，则“(yIll)：生兰=0．029mL；②重复性：重
~／3
复测定10次，测得u(y-12)=0．0095mL；③温度：由
于本试验温度与校准温度相同，此项可忽略。
u(V11)=√“2(y121)+“2(yi22)=
以订函乒再F瓣=o．030mL
(2)1mL移液管u(yi：)主要来源有3种：①校准：A
级1mL单标线移液管示值允差士0．007mL，取k=
／丁，“(y．21)：i0．007：0．0040mL；②重复性：通
~／3
过10次测定，计算得“(y-22)=o．0067mL；⑧温度：
由于本试验温度与校准温度相同，所以此项可忽略。
u(V托)一 √“2(ym)+“2(yi22)=
舨订瓜兀F丽1丽=0．0078mL
(3)10mL量瓶“(yf7)所测结果同拼(yfl)：摊(yi7)=
√U2(ym)+影2(yi72)=Jo．0292+0．00952
因此大豆苷对照品合成标准相对不确定度为：
掣一√[掣]2+[掣]2+[掣]z-
40．00062+0．00782+0．00142=0．79％
2．3．3配制染料木苷对照品时由玻璃器皿带入的
相对不确定度“(y，)：V，=
y“×yis×yf2
y门×yi6
。
(1)25mL量瓶不确定度“(E。)：①校准摊(yⅢ)：A
级25mL单标线移液管示值允差士0．030mL，k=
v厂丁，拓(Vi31)：；0．030：0．017mL；②重复性
~／3
u(Vm)：重复测定10次，测得“(yf32)一0．021mL；③
温度：由于本试验温度与校准温度相同，所以此项可
忽略。
u(Vi3)一 √“2(y埘)+“2(Vj32)=
~／O．0172+0．0212= ．027mL。
(2)1mL移液管不确定度群(V“)：同“(y，。)，
“(V“)一40．00402+0．00672=0．0078mL。
(3)10mL量瓶扰(V，5)：同“(V订)，甜(Vf5)=
／0．0122+0．00832=0．014mL。
(4)1mL移液管不确定度“(y，。)：同“(y，：)，
“(Vi6)=／0．00462+0．00672=0．0078mL。
(5)10mL量瓶“(y，，)的不确定度同“(yn)，
扰(yi7)=Jo．0292+0．00952。
因此，染料木苷对照品的合成相对标准不确定
度 计 算 公 式 为：坚乒 ：
～％／露-u(ViD-2码-u(V可,)-2i芦-u(再Vs)-2磅-u(V,)-⋯2-百u(VT)．-z’
：,,／—0．—00—1—12—+—0．—00—7—82—+—0．—00—1—4z—+—O．—00782+ ．0014z=
万方数据
中草嚼ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 669·
1．13％；
2．3．4对照品测得的峰面积的相对不确定度“(A)：
①大豆苷：对照品液4次进样重复测得量的标准不
确定度按贝赛尔公式计算s=
2396·56。则相对不确定度配(A一)一者=0．32％。
②染料木苷：对照品液4次进样重复测得量的标准
不确定度按贝赛尔公式计算s=
3252．5。则相对不确定度摊(A)一音=2．76％。
2．3．5样品质量的不确定度U(优，)：主要来源有2
种(1)电子天平称量示值的不确定度U(优，，)：天平称
量允差为士0．1mg，则标准扩展不确定度U=0．1
mg(五一3)，按正态分布换算成标准偏差为U(m。。)=
0．1／3=0．033mg；(2)电子天平称量重复性的不确
定度扰(m，：)：根据天平的检定证书重现性标准偏差
为0．05mg，即U(m，2)=0．05mg。因此，合成不确定
-_____。。。。。__-___●-●-______-●_-_____-_-_______-____________一
度 为： “ (m，1)一 √甜2(mn)+犯2(m。2)=
J0．0332+0．052—0．060mg，相对标准不确定度
竺!竺!：0．060／10．24=0．58％
mJ
2．3．6稀释样品时，由玻璃器皿(100mL量瓶)带
入的不确定度“(E)：(1)校准U(y，。)：A级10mL单
标线移液管示值允差土0．100mL，取k=／3，则
“(y，。)一堕型：0．058mL；(2)重复性矩(y，：)：重复
~／3
量取10次，测得U(y，2)=O．032mL；(3)由于本试验
温度与校准温度相同，所以此项可忽略。U(n)=
～／—u2(V,1)+—u2(s,z)：40．0582干o-0322：o．066
mL掣一o．。66％
2．3．7样品测得的峰面积的相对不确定度U(A)：
样品6次重复测定结果的标准不确定度按贝赛尔公
式计算5大豆昔= 一1200I5橐并木昔=
=5442。相对不确定度托大豆昔(A．)一
警乱015％，嘲一∽2警22．28％。
2．3．8合成不确定度：各相对不确定度分量见表1、2。
大 豆 苷 合 成 不 确 定 度 =
“页i河孑万了瓦瓦雨干万瓦丁瓦瓦孬干而 =
40．70％2+O．79％2+0．3zS2+0．58S2+o．15％2--I-o．066％2=
O．012
染 料木苷 合 成不 确 定 度 一
J、／—uZ—(m—l—)+——u2—(V—i—)+—u—Z—(A—i—)+—u—Z—(m—,)—+—u—Z(—A—,)—+—u—Z(—V—,)一
／O．58％2+1．13％2+2．76％2+0．58S2+O． 66％2+2．28％2=
0．038
2．3．9扩展不确定度：取包含因子k=2，则大豆苷
扩展不确定度Ur(S)=21．31％×0．012×2—
0．51％，染料木苷扩展不确定度Ur(S)=10．38％×
0．038×2=0．79％。
2．3．10测量不确定度报告：质量分数测定的结果
可表示为大豆苷(21．31士0．51)％，染料木苷
(10．38士0．79)％。
3讨论
由于被测样品为原料粉末，主成分测定过程中
不受辅料和杂质的影响，且其样品非均匀性引入的
不确定度可忽略。本测定方法采用单点对照品比较
裹1大豆苷不确定度分■
Table1 Uncertaintyitemofdaldzin
万方数据
·1670· 中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
表2染料木苷不确定度分■
Table2 Uncertaintyitemofgenistin
法，由于配制的样品与对照品的质量浓度相近，其峰
面积响应中可能的非线性引入的不确定度可忽略。
环境温度、环境湿度的随机变化对质量、峰面积会带
来影响，其不确定度纳入称量重复性、进样重复性
中，因样品和对照品几乎为同时操作，故环境温度湿
度的系统影响而可忽略。
由于本实验中使用的天平和量瓶的精密度较
高，不确定度均参考检定和实验的数据，未采用最大
允差，且称量接近、操作简单，不包括人为过失误差，
故不确定度较小。由于HPLC仪本身对测定结果的
影响因素很多，难以一一评估。又因为在实际测定
中，HPLC仪误差引起的不确定度已体现在色谱峰
面积的测量结果中，所以对HPLC仪的体积流量、流
量精度和进样精密度等各因素的不确定度分量不作
另行细化讨论。实验未进行回收率的不确定度评定，
并以回收率对检测结果进行修正，因为回收率测得
值的离散度是包含在测量结果离散度内的，且用回
收率修正结果，不仅会重复评定，而且会脱离实
际‘2J。
分析评估不确定度时，应尽量考虑到产生不确
定度的所有来源，因为合成不确定度的数值几乎完
全取决于重要的不确定度分量。根据上述评定可得，
本方法测量大豆苷结果的各分量不确定度均较小，
测量染料木苷结果的不确定度主要来自于对照品和
样品的峰面积的不确定度、稀释对照品带来的不确
定度。比较大豆苷和染料木苷的不确定度，染料木苷
的扩展不确定度(土0．79％)为大豆苷的扩展不确定
度(土0．51％)的1．5倍。这是由于染料木苷对照品
的质量浓度较低，约为大豆苷对照品的1／5倍，故染
料木苷在高效液相色谱上的响应不稳定而造成其峰
面积不确定度较大。且染料木苷对照品稀释次数较
多，稀释过程中带来了较大的不确定度。在分析了以
上影响测量不确定度的原因后，如果采取了相应的
措施，完全可以将测量结果的不确定度进一步减小。
参考文献：
[1]测量不确定度评定与表示ES]．JF1059—1999，1999．
[2]冯家力，潘振球，曾栋。等．气相色谱一质谱法测定马吲哚的
测量不确定度评定及防止重复评定的探讨l-J]．中国卫生检验
杂志，2006，16(8)：1011．
毛知母的减压加温润制工艺研究
宋坤，陆兔林，季德。
(南京中医药大学药学院，江苏南京210029)
摘要：目的探讨毛知母的最佳减压加温润制工艺。方法 以菝葜皂苷元、芒果苷为指标选择润制时间、润制温
度、润制压力3个因素，用L。(3·)正交设计表，采用方差分析法，对毛知母进行减压加温润制工艺的优选。结果润
收稿日期：2008—05—07
作者简介：宋坤(1973～)，江苏省南京人，讲师，从事中药饮片质量标准方面的研究工作．
．．．Tel：(025)85811513E—mail：songseng@yeah．net
*南京中医药大学02届硕士研究生
万方数据
HPLC法测定大豆异黄酮的不确定度评定
作者： 饶毅， 张洁， 李新南， 魏惠珍， 吴有根， 王跃生
作者单位： 饶毅,魏惠珍,王跃生(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西,南昌,330006)， 张洁
,李新南,吴有根(江西中医学院,江西,南昌,330004)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 3次
参考文献(2条)
1.JF 1059-1999.测量不确定度评定与表示 1999
2.冯家力;潘振球;曾栋 气相色谱-质谱法测定马吲哚的测量不确定度评定及防止重复评定的探讨[期刊论文]-中国
卫生检验杂志 2006(08)
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3. 饶毅.黎莉.刘隆洪.袁华生.魏惠珍.黄周华.杨世林 HPLC法同时测定防己药材中防己诺林碱和粉防己碱[期刊论
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200811023.aspx