全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月· 821·
灯盏花素经鼻给药吸收特性研究
石森林1，徐莲英2，毛展凯1，张韩清3，李万里1
(1．浙江中医药大学药学院，浙江杭州 310053；2．上海中医药大学中药学院，上海201203；
3．金华市中心医院．浙江金华321000)
摘要：目的研究灯盏花素的离体、在体经鼻吸收特性，为灯盏花素的鼻腔给药制剂设计提供依据。方法采用
V—C扩散池，以新鲜犬鼻黏膜为渗透屏障，以含灯盏花乙素0．25，0．50、1．25mg／mL的灯盏花素PBS液(pH6．5)
为释放液，以空白PBS为接收液，进行渗透试验；采用大鼠鼻腔循环灌流法，以1．01、1．70、4．48mg／mL灯盏花素
PBS溶液(pH6．5)作为鼻腔循环液，HPLC法测定灯盏乙素，进行在体鼻黏膜吸收试验。结果灯盏花素高、中、
低质量浓度组的犬鼻黏膜渗透系数分别为3．6×10一、1．272×10～、1．856X10_3cm／min(n一3)。随着灯盏花素的
质量浓度增加，其渗透系数呈剂量依赖性增加；高、中、低质量浓度灯盏花素的大鼠在体吸收速度常数分别为4．5×
10～、2．3×10～、1．7×10-3rain～，随质量浓度的增加，鼻黏膜吸收量逐渐增加，但其吸收速度常数较小。结论灯
盏花素可经鼻吸收，质量浓度对其吸收的影响较大，适合制备成经鼻给药的新制剂。
关键词：灯盏花素；灯盏花乙素；鼻腔循环灌流；鼻黏膜吸收；吸收速度常数
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)12—1821—03
灯盏花素为灯盏花的主要有效成分，具有改善
脑微循环，增加脑血流量，降低血管阻力，抗缺血、缺
氧，抗血小板聚集、抑制血管内凝血、促进纤溶活性
等功能，临床主要用于治疗脑血栓形成、脑栓塞等脑
血管意外所致完全性及不完全性瘫痪。鼻黏膜给药
具有生物利用度高、吸收快、给药方便，且能向脑内
递药等优点[1]。与口服给药相比吸收快，还因避免了
首过效应而生物利用度较高；与注射给药相比给药
方便，不良反应少，并具一定的脑内靶向分布特性。
故鼻黏膜给药对脑部疾病具有潜在的治疗优势。为
探讨灯盏花素经鼻给药治疗脑血管疾病的可行性，
本实验进行了灯盏花素经鼻吸收特性的研究。
1材料和仪器
灯盏乙素对照品由中国药品生物制品检验所提
供；灯盏花素购于云南玉溪万方天然药物有限公司；
乙腈、甲醇、磷酸、丙二醇等试剂均为色谱纯；其他试
剂均为分析纯。
V—C扩散池(浙江大学材料化工学院玻璃车
间定制)；BT00—100M恒流泵(保定兰格恒流泵公
司)；Agilent1100高效液相色谱仪、UVD检测器
(美国Agilent公司)；PL5124型纯水机，美国PALL
公司；CQ250型超声波清洗器(上海超声波仪器
厂)；AB一204一N电子天平(梅特勒一托利多)。
SD大鼠，雄性，体质量250～300g，浙江中医药
大学实验动物中心；犬，浙江中医药大学实验动物
中心。
2方法与结果
。。
2．1灯盏乙素的HPLC测定方法的建立
2．1．1供试品溶液的制备：灯盏花素真空干燥24h
后，取约5mg，精密称定，置于50ml，量瓶中，用pH
6．5PBS溶解并稀释至刻度，密塞，摇匀。精密吸取
1mL，置于5mL量瓶中，用渗透液稀释至刻度，摇
匀，即得。
2．1．2对照品溶液的制备：灯盏乙素对照品真空干
燥24h后，取约5mg对照品，精密称定，置于50mL
量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，密塞，摇匀，
即得对照品储备液。精密吸取此对照品储备液2mL
于lOmL量瓶中，用流动相稀释至刻度，密塞，摇匀，
即得。置4℃冰箱保存。
2．1．3色谱条件：色谱柱为ZorbaxXDBC，。(150
mm×3．9mm，5弘m)；流动相：乙腈一水一磷酸(20：
80：0．2)；检测波长：327am；柱温：室温；体积流
量：1mI。／min。色谱图见图1，表明色谱该条件可以
用于灯盏乙素的测定。
2．1．4标准曲线的制备：精密吸取灯盏乙素对照品
储备液一定量，依次配成1--40ttg／mL对照品液，进
样20肛L，测定峰面积。以峰面积为纵坐标，进样量为
横坐标拟合标准曲线，得回归方程Y一3049．1116
x(，．一0．999)，结果表明，灯盏乙素在22．5～540
ng时，峰面积与进样量有良好的线性关系。
收稿日期：2008—04—22
基金项目：国家中医药管理局项目(06—07ZP24)；浙江省科技攻关项目(2003C33017)
作者简介：石森林，男，博士，副教授，硕士生导师。Tel：(0571)86613524E—mail：pjstone@163．com
万方数据
·1822· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
图1灯盏乙录和供试品HPLC圈
Fig．1HPLCChromatogramofscuteilarin(A)
andbreviscapine(B)
2．1．5精密度试验：准确吸取3个不同质量浓度的
灯盏乙素对照品溶液20．0pL，各连续进样6次，测
定峰面积，结果其RSD分别为0．227％、0．226％、
0．143％。
2．1．6稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、
0．5、1、2、4、8、24h进样20肛L，测定灯盏乙素峰面
积。结果其峰面积RSD为0．349％，可见样品在24h
内稳定性良好。
2．1．7回收率试验：精密称取5份一定量灯盏乙素
对照品，加入渗透液中，制备供试品溶液，进样测定，
结果灯盏乙素的平均回收率为99．31％，RSD为
0．592％。
2．2离体吸收研究
2．2．1鼻黏膜的剥制瞳]：将宰杀2h的犬鼻部取下，
切开鼻腔，暴露出鼻中隔及两侧鼻甲骨，将覆盖在其
上的鼻腔薄膜剥离，用生理盐水洗净薄膜上残留的
血迹，再将薄膜放在一片铝箔上，铺开，然后置入低
温冰箱中冷冻、储藏，一周内使用。
药物的供试液，接受池内加pH6．5的PBS5．0mL。
扩散池水浴外套与超级恒温水浴槽相接，维持整个
系统的温度在(37±0．5)+C，加入搅拌子，恒速搅
拌。于设定时间从接收池取样0．2mL，同时补充等
体积PBS。所取样品经3000r／min·离心20min，取
上清液，HPLC法测定灯盏乙素质量浓度(C。测)。
2．2．3渗透液处理：新鲜鼻黏膜固定于扩散池结合
部，黏膜的浆膜面向接受池，供给池中加入空白(不
含药物)供试液，接受池内加入接受液(pH6．5
PBS)，于(37±0．5)℃，恒速搅拌24h，接受液3000
r／min离心20min，上清液过膜，备用。
2．2．4 数据处理：按下式计算校正药物浓度
(C。校)、单位面积累积渗透量(Q)，稳态透过速率
(，。)、渗透系数(P)。以不同时间的Q对时间t做图，
该图的直线部分斜率即为L，。。
c。幢一C。潮+o．2／5厶C，
曰
Q=C。校xV／A
P一3I|Cn
己C。：各取样前各点的测定浓度之和，A为扩散池横截面
积，y为接受池中接受液体积，C。为供给池中供试药物浓度
2．3 灯盏花素的鼻黏膜吸收：以含灯盏乙素
0．25、0．50、1．25mg／mI。灯盏花素PBS液(pH6．5)
为释放液，空白PBS为接收液，进行渗透试验，于不
同时间点取样，测定，计算，结果见表1。根据试验结
果，计算各组P，结果低、中、高质量浓度组的灯盏花
素P分另0为3．6×10一5、1．272×10—3、1．856×10—3
2．2．2V—C扩散池的安装与操作：取离体低温保 cm／min(咒一3)。实验结果表明，灯盏花素的离体犬
存的新鲜鼻黏膜固定于扩散池的结合部，黏膜的浆 鼻黏膜渗透试验的渗透系数与质量浓度有关，各组
膜面向接受池，供给池中加入一定质量浓度的被试 两两比较均有显著性差异。
表l灯盏花素离体犬鼻黏膜吸收累积渗透量(尼=3)
Table1 Accumulationpermeabilityamountofmembranapituitesonabsorptionforbreviscapineindoginvivo(开一3)
2．4灯盏花素大鼠鼻腔在体吸收f3“1
2．4．1洗出液的收集：取50mLpH6．5的PBS，按
大鼠在体鼻循环法操作，流速2．5mL／min，持续循
环30min，即得大鼠鼻腔洗出液。将洗出液在37℃
恒温水浴中平衡5min，备用。
2．4．2洗出液的稳定性：精密称取灯盏花素约1、
1．7、2．5mg各1份，用大鼠鼻腔洗出液配制得
101．97、171．42、242．64肛g／mL灯盏花素溶液，在
37‘C恒温水浴中孵育，在各规定时间点，取样，测
定，结果见表2。表明灯盏花素在大鼠鼻腔洗出液中
较稳定，8h内进行循环灌流实验，不影响残余药液
的测定。
2．4．3大鼠鼻腔循环灌流法：大鼠腹腔注射20％乌
拉坦按照0．5mL／100g麻醉，仰卧固定于平板上，
在颈部做切口，暴露气管和食管。取聚乙烯管2支，
一支插入气管，另一支的一端插入食管，直至鼻腔后
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月· 823·
部，用胶黏剂将鼻腔与口腔的鼻腭通道封闭，以防药
液从口腔中流失，管子的另一端与药液接触，将盛有
药液的循环池以(37±1)‘C水浴恒温，蠕动泵使药
液经鼻腔循环，循环液流速2．5mL／min。定时从循
环池中取药液测定。
表2灯盏花素在大鼠鼻腔洗出液中的稳定性
Table2 Stabilityofbreviscapineinratasale uate
试验号 塑垄圣奎!!坚：!兰：!!
Oh 8 h 18h 24h 48h
l 101．97100．81 97．02 96．14 91．88
2 171．42171．02169．42 164．0 161．09
3 242．64242．01 241．91233．14230．23
2．4．4数据处理：药物经鼻吸收进入大鼠体内，循
环液中药物以一级速度消除；整个实验过程中，鼻腔
的分泌和重吸收可以忽略不计，循环液体积始终不
变，根据lnC=lnC。--ht计算吸收速度常数(愚)，式中
C。为循环液初始质量浓度，C为t时样品质量浓度。
2．4．5在体鼻黏膜吸收结果：配制pH6．5的PBS，
用NaCl调节渗透压至与0．205mol／LNaCI相当，
以其配制质量浓度为1．01、1．70、4．48mg／mL灯盏
花素溶液，作为鼻腔循环液，进行在体鼻黏膜吸收试
验(咒一3)。每个质量浓度取8mL进行鼻腔循环，分
别于循环后10、20、30、60、90、120min定时取样200
pL，同时补加等量含NaCl的空白PBS，HPLC法检
测残留药物质量浓度，计算透过量M，并将测得的浓
度值按一级速度方程回归，结果见表3、4。实验结果
表明：灯盏花素在不同质量浓度条件下，随质量浓度
的增加，鼻黏膜吸收逐渐增加，但其吸收速度常数
较小。
表3不同质量浓度的灯盏花素在体鼻黏膜吸收量
Table3 Nasalbsorptionam untofbreviscapineatd fferentco centration
表4灯盏花素在体鼻黏膜吸收速度比较
Table4 Comparisononvelocityofmembrana
pituitosaab orptionforbreviscapine
质量浓度／
(mg．mL一1)
吸收方程
吸收速度常数
(×10—3min一1)
3讨论
鼻黏膜给药研究方法主要有离体法、在体法和
体内法。离体法一般采用V—C扩散池法或Ussing
扩散池法[5]，研究鼻腔内药物吸收机制；主要采用
兔、犬和羊等鼻黏膜，但渗透系数不同，可能与各动
物黏膜组织结构不同有关。因此选择动物模型，应考
虑种属差异。灯盏花素离体犬鼻黏膜渗透试验结果
表明黏膜渗透系数随着浓度提高而增加。在体法主
要采用Hirai氏鼻腔循环灌流法，研究药物鼻黏膜吸
收速率与时间的关系及吸收机制。药物的理化性质
是影响其鼻黏膜吸收的主要因素，其中油水分配系
数尤为重要L6]，尽管鼻黏膜除亲脂性通道外，还存在
亲水性通道[7]，但以亲脂性通道为主，因此脂溶性药
物易吸收。本研究发现灯盏花素鼻黏膜吸收随浓度
增加而逐渐增加，但其吸收速度常数较小。
本研究发现灯盏花素可经鼻吸收，但灯盏花素
在体吸收速度与黏膜渗透系数较小，可能与灯盏花
素在pH4以上，油水分配系数小有关，提示亲脂性
通道是其经鼻吸收的主要途径。
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万方数据
灯盏花素经鼻给药吸收特性研究
作者： 石森林， 徐莲英， 毛展凯， 张韩清， 李万里
作者单位： 石森林,毛展凯,李万里(浙江中医药大学药学院,浙江,杭州,310053)， 徐莲英(上海中医药
大学中药学院,上海,201203)， 张韩清(金华市中心医院.浙江,金华,321000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(12)
被引用次数： 2次

参考文献(7条)
1.蒋新国 药物的鼻黏膜膜吸收[期刊论文]-中国新药杂志 2003(11)
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