全 文 ：·358· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
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RP—HPLC法测定灌胃赤芍胡椒复方小鼠血浆中芍药苷的含量
裴 瑾1’2，杨祖贻H，刘荣敏1，程佳1，万德光2，胡 荣2
(1．四川省肿瘤研究所，四川成都610041；2．成都中医药大学药学院，四川成都610075)
摘 要：目的 建立小鼠口服赤芍胡椒复方后血浆中芍药苷浓度的RP—HPLC定量分析方法。方法以甲醇一水
(38：62)为流动相。色谱柱为KromasilC18(250mm×4．6mm，7肛m)，体积流量为0．5mL／min，以二极管阵列检测
器获取230am波长下数据，采用外标定量法。结果芍药苷与血浆中其他成分能很好分离，芍药苷在5．o～250．0
ng／pL线性关系良好(r一0．9999)，最低检测质量浓度为1．49ng／肛L，平均回收率大于90％。结论本方法准确
性、灵敏度、专一性高，可为芍药苷的体内血浆药物浓度分析提供有意义的方法学参考。
关键词：赤芍胡椒复方；芍药苷；高效液相色谱；血药浓度
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)03—0358—03
Determinationofpae iflorininmouseplasmaafterigcompounddecoction
ofRadixPaeoniaeRubrawithFructusPiperisbyRP—HPLC
PEIJinl”，YANGZu—yil，LIURong—minl，CHENGJial，WANDe—guan92，HURon92
(1．SichuanCancerInstitute，Chengdu610041，China；2．CollegeofPharmacy，ChengduUniversity
ofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610075，China)
Abstract：ObjectiveAnHPLCm thodwasestablishedford terminationofpae iflorininplasma
afterigcompounddecoctionofRadixPaeoniaeRubrawithFructus尸iperistomice．MethodsThe
conditionsofchromatography：KromasilC18column(250mm×4．6mm，7pm)wasusedwithamobile
phaseofCH30H—H20(38：62)；flowratewas0．5mL／min；thedet ctingwavelengthwas230nm；
exterHalstandardmethodwasquantitativenalysismethod．ResultsPaeoniflorinwasfullyseparated
ftomtheothercomponentsinplasma．The1inearrangewas5．O一250．0ng／弘L(r一0．9999)，thelowest
detectabilitywas1．49ng／弘L，theaveragerecoverywashigherthan90％．ConclusionThismethod
speciallyprovidesanaccuratendsensitivewayindetectingheinvivobloodconcentrationofpae iflorin
inplasma．
Keywords：compounddecoctionofRaidxPaeoniaeRubrawithFructusPiperis；paeoniflorin；HPLC；
bloodconcentration
收稿日期：2004—06-06
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(02—03ZP50)；四川省中医药管理局科研基金资助项目(200217)
作者简介：裴瑾(1970～)，女，四川成都人，博士，讲师，主要从事中药质量研究工作。Tel：(028)81607731
*通讯作者Tel：(028)85420916E—mail：chianghm@163．com
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月·359·
赤芍胡椒复方是中药活血温里复方中的一种基
本配伍形式，主治寒凝血滞引起的多种疼痛症，方中
赤芍活血化瘀，胡椒温里散寒，在该配伍中温里药可
增加活血药的临床疗效。芍药苷是赤芍主要有效成
分之一，具有抗血栓形成、抗血小板凝集、抗凝血等
作用。选择芍药苷作为赤芍的效应成分具有一定的
代表意义。为说明复方配伍的药效物质基础及作用
机制，有必要对复方的主要活性成分进行动物体内
的定性、定量分析。但体内药物成分分离、分析、测定
难度较大，因此建立适合于该复方主要活性成分的
分析方法尤为重要。本研究建立的小鼠口服赤芍胡
椒复方后芍药苷血浆药物浓度分析方法，为活血温
里复方药物配伍机制深入研究奠定了药动学基础。
1材料
Agilent1100高效液相色谱仪，二极管阵列检
测器，Agilent色谱数据处理系统。芍药苷对照品(中
国药品生物制品检定所，批号：0736—200219)，所用
甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为重蒸去离子
水。赤芍、胡椒药材购自四川I省中药材公司，经成都
中医药大学万德光教授鉴定为川赤芍Paeonia
veitchiiLynch的干燥根、胡椒PipernigrumL．的
干燥果实。赤芍提取物(PE)、赤芍胡椒复方提取物
(PPE)由四川I省肿瘤研究所制备。
2方法
2．1 色谱条件：色谱柱：KromasilC18(250mm×
4．6miD．，7um)；流动相：甲醇一水(38：62)；体积流
量：0．5mL／min；二极管阵列检测波长：230nm；柱
温：25℃；灵敏度：0．01AUFS；进样量：10肛L。
2．2对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适
量，加甲醇溶解，制成0．50mg／mL的对照品溶液，
置于4℃冰箱备用。
2．3血浆样品的制备：将小鼠随机分为空白对照
组、对照组和实验组，每组10只。空腹14h后，根据
小鼠体重按剂量ig，给予空白对照组水、对照组赤芍
提取物、实验组赤芍胡椒复方，ig后于1．0h眼眶取
静脉血0．5mL，用肝素血液抗凝，离心取上清液获
得血浆。
2．4血样的预处理：用微量加样器取100,uL血浆，
置于0．5mL高速离心管中，加入3倍体积的乙醇，
电动混匀器充分混匀后经5000-～10000r／min离
心15～20min，取上清液于0．5mL试管中，37℃水
浴挥干，用50弘L甲醇重溶，再次5000～100 0r／
min离心15～20min，取上清液置微量进样管中。
2．5系统适用性考察：取小鼠空白血浆加入芍药苷
对照品溶液，另取对照组血浆，各5份，按血样预处
理方法处理，分别进样、测定，其峰面积RSD分别为
3．48％、4．03％。
2．6方法专属性考察：在上述色谱条件下，分别测定
芍药苷对照品、赤芍提取物、胡椒提取物、空白对照
组、对照组、实验组血浆。可见芍药苷与血浆中蛋白杂
峰、内源性物质、赤芍提取物的其他成分以及这些成
分的体内代谢物和结合性成分均能很好的分离。
3 结果
3．1 色谱分离：在上述色谱条件下，赤芍提取物及
血样中的芍药苷与其他物质完全分离，空白血浆、胡
椒提取物均无干扰，通过二维、三维色谱图对其吸收
峰定性，其保留时间均与对照品一致(图1)。
1一芍药苷
1一paeoniflorin
图1 芍药苷对照品(A)、空白血浆(B)、igPE对照组
(c)和igPPE实验组(D)的HPLC图
Fig．1HPLCchromatogramsfpaeoniflorin
referencesubstance(A)，blankplasm
(B)，plasmaofmiceafterigPE(C)，
andplasmaofmiceafterigPPE(D)
3．2标准曲线及线性范围：分别取芍药苷对照品溶
液1、5、10、50弘L，室温下分别加入空白血浆50弘L，
再加入甲醇定容至100肛L，按色谱条件项下操作测
定，以芍药苷峰面积与对应进样质量浓度进行线性
回归，得芍药苷的回归方程为C=4．037×10叫A一
1．098×lO～，r一0．9999(咒一5)。结果表明血浆中芍
药苷在5．0～250．0ng／t-L与峰面积线性关系良好。
3．3最低检测浓度测定：以信噪比(S／N)为3时的
芍药苷对照品质量浓度为分析方法的检测限。取质
量浓度为0．050rng／mL的芍药苷对照品溶液0．5、
1．5、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0IzL分别加入到50弘L
空白血浆中，按血样预处理方法处理后进样分析。结
果本方法的检测限为1．49ng／uL。．
3．4精密度试验：芍药苷对照品溶液在1d内连续
进样，测定5次，其峰面积日内RSD为1．02％；同
法测定对照组、实验组血浆样品，芍药苷峰面积
RSD分别为2．36％、3．13％；另连续测定5d芍药
苷对照品溶液、对照组、实验组血浆样品中芍药苷峰
面积日间RSD分别为2．35％、4．12％、4．63％。表
万方数据
·360· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第3期2005年3月
明方法精密度较好，符合体内药物浓度测定的要求。
3．5 回收率试验：精密量取芍药苷对照品溶液5、
10、20、40pL，室温下分别加入空白血浆50弘L，再
加入甲醇定容，制成一定质量浓度的芍药苷血浆对
照品溶液，摇匀后按血样预处理项下处理、测定，结
果见表1，不同质量浓度下均有大而稳定的回收率。
表1血浆中芍药苷的回收率试验(露一3)
Table1 Recoveriesofpaeoniflorininplasma锄一3)
3．6血药浓度的测定：取已制备好的血浆样品，按
上述色谱条件测定，由标准曲线计算出芍药苷的血
药浓度。小鼠ig赤芍提取物后血浆中芍药苷质量浓
度为(42．28-1-4．43)ng／弘L(卵一10)，ig赤芍胡椒复
方后血浆中芍药苷质量浓度为(78．56±5．61)ng／
ttL(行一10)。
4讨论
目前复方给药后血浆中药物效应成分可以定量
的理论已经提出，但研究中药的体内代谢及中药主
要有效成分体内检测方法是一个比较薄弱的方面。
本研究参考有关文献[1~3]，经反复对比试验，最后选
定甲醇一水(38：62)为流动相，在此条件下，小鼠血
浆中芍药苷与血浆中蛋白杂峰、内源性物质、芍药提
取物的其他成分以及这些成分的体内代谢物和结合
性成分均能很好的分离，峰形良好，且主峰时间适宜
(芍药苷保留时间约13rain)。本方法最低检测质量
浓度为1．49ng／／-L，平均回收率大于90％，日内、日
间RSD均小于10％，精密度好，符合体内药物浓度
测定的要求。
在血液样品处理中筛选了甲醇、乙醇、加热等方
法，最终采用乙醇沉淀蛋白，操作程序简便，样品损
失率低。本检测方法的建立为活血温里复方中活血
药主要有效成分血药浓度和生物利用度的研究提供
了可靠的检测方法。
致谢：四川大学周文铨教授，四川省肿瘤研究所
董昱研究员、唐小海主任医师对本研究工作的支持。
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丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究
宋敏，杭太俊’，张正行
(中国药科大学药物分析室，江苏南京 210009)
摘要：目的建立HPLC法测定丹参药材水溶性成分的指纹图谱标准，确定指纹对照品对照法的作用，实现丹参
药材指纹图谱标准的重现与易控。方法采用C。。色谱柱，甲醇一1．o％冰醋酸溶液梯度程序洗脱，体积流量为1．0
mL／min。以丹参对照药材制备指纹对照品进行色谱系统适用性试验，考察梯度洗脱程序、流动相酸度以及色谱柱
填充剂对指纹图谱重现性的影响。结果建立的指纹图谱测定系统，对丹参水溶性成分分离良好，选择色谱图中15
个特征峰作为指纹峰。将不同产地的10批药材的指纹图谱与同时测定的指纹对照品图谱进行比较，结果即使改变
色谱柱填充剂也可以获得一致的相似性评价结论。结论 色谱指纹图谱可以体现药材中多个成分的信息，但色谱
系统的变化对指纹图谱的重现性有很大的影响，而且在不同的色谱柱条件下所得的指纹图谱结果不尽相同。因而
为了实现指纹图谱标准的重复可控，应同时规定指纹图谱测定的色谱系统适用性条件和指纹对照品。
关键词：丹参；高效液相色谱法；指纹图谱；指纹对照品
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)03—0360—05
收稿日期：2004—05—18
作者简介：宋敏(1977一)，女，重庆人，博士研究生，研究方向为色谱与光谱分析。
Tel：(025)83271090E—mail：eqsongmin@sina．com
*通讯作者
万方数据
RP-HPLC法测定灌胃赤芍胡椒复方小鼠血浆中芍药苷的含量
作者： 裴瑾， 杨祖贻， 刘荣敏， 程佳， 万德光， 胡荣， PEI Jin， YANG Zu-yi， LIU Rong-
min， Cheng Jia， WAN De-Guang， HU Rong
作者单位： 裴瑾,PEI Jin(四川省肿瘤研究所,四川,成都,610041;成都中医药大学药学院,四川,成都
,610075)， 杨祖贻,刘荣敏,程佳,YANG Zu-yi,LIU Rong-min,Cheng Jia(四川省肿瘤研究所
,四川,成都,610041)， 万德光,胡荣,WAN De-Guang,HU Rong(成都中医药大学药学院,四川
,成都,610075)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(3)
被引用次数： 2次

参考文献(3条)
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引证文献(2条)
1.杨祖贻.裴瑾.刘荣敏.程佳.万德光.胡荣 当归肉桂配伍后阿魏酸生物利用度的研究[期刊论文]-中国中药杂志
2006(12)
2.韩旭华 白芍有效成分经皮微乳的抗炎镇痛作用及其药效物质基础[学位论文]博士 2006


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200503015.aspx