全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·527·
苷，杂质却因未到饱和而很少析出，所以固体沉淀量
增加(从0．864g增加到2．967g)，但其表观纯度下
降不大(从79．32％下降到74．08％)。从C到E过
程，柚皮苷等杂质也逐渐达到饱和析出，所以固体沉
淀量迅速增加(从2．967g增加到4．858g)，表观纯
度下降明显(从74．08％下降到62．96％)。从结晶的
角度看，在D和E中，虽然固体沉淀量很多，但由于
固体沉淀中杂质太多，其中不单只有柚皮苷，还有许
多色素类杂质都沉淀析出，对结晶产生很大的影响，
直至E无法结晶。所以，本实验中新橙皮苷的分离
是一种基于新橙皮苷和柚皮苷在正丁醇溶解度差异
的分离方法，所以正丁醇萃取液的减压浓缩的程度
是非常关键的一步，直接关系到新橙皮苷的纯度和
生产得率。
3．3杂质促溶作用对新橙皮苷产品得率的影响：表
1显示的促溶能力暗示着枳壳的提取方法对最终新
橙皮苷产品得率的影响是非常复杂的，一方面是新
橙皮苷提取率对最终产品得率的影响；还有另一个
不能忽略的方面是不同的提取方法会带入不同的杂
质，这也会对最终产品得率和质量产生影响。
References：
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RP—HPLC[J]．JBeOingUnivTraditChinMed(北京中医药
大学学报)，2004，27(1)：54—56．
RP—HPLC法测定金槐冠心片中薯蓣皂苷元的含量
徐雄良1，向轶1，柯尊洪2，张志荣p
(1．四JIf大学华西药学院，四川成都610041；2．成都康弘科技实业(集团)有限公司，四川I成都610041)
摘 要：目的 建立RP—HPLC法测定金槐冠心片中薯蓣皂苷元含量的方法。方法采用RP—HPLC法，Shim—pack
CLC一0DS柱(150mm×6．0mm，5弘m)，以甲醇一乙腈(3：2)为流动相，在206nm波长下测定样品水解后的薯蓣
皂苷元含量。结果该方法专属性强；平均空白回收率为95．6％，RSD为2．44％，平均加样回收率为98．7％，RSD
为2．66V00(n一6)。结论该方法简便，分离效果好，可用于金槐冠心片中薯蓣皂苷元的质量控制。
关键词：金槐冠心片；薯蓣皂苷元；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)04—0527—03
Quantitativeanalysisofdiosgenini J huaiGuanxinTabletbyRP—HPLC
XUXiong—lian91，XIANGYil，KEZun—hon92，ZHANGZhi—ron91
(1．WestChinaSchoolofPharmacy，SichuanUniversity，Chengdu610041，China；2．ChengduKanghong
ScienceandTechnologyIndustry(Group)Co．，Ltd．，Chengdu610041，China)
Keywords：JinhuaiGuanxinTablet；diosgenin；HPLC
金槐冠心片由四川省中药研究所于1973年研
制，对冠状动脉粥样硬化性冠心病具有较好的治疗
效果[1]，收载于《四川省药品标准》(中药成方制剂，
1993年版)。本品由穿山龙、槐米、雪胆3味药材经
提取压制而成，具有活血、散结、通脉等功效。原标准
未对其质量进行控制。穿山龙为方中主药，主要含有
多种水溶性和水不溶性皂苷，其中水不溶性皂苷主
要为薯蓣皂苷元与不同糖类结合而成的薯蓣皂苷，
常通过测定水解后生成的薯蓣皂苷元来控制穿山龙
的质量。由于本品穿山龙是以70％乙醇渗漉后的提
取物投料，因此可通过直接水解穿山龙总皂苷来测
定片中的薯蓣皂苷元。文献报道[z3在低波长下采用
RP—HPLC测定穿山龙中薯蓣皂苷元的含量，本实
验在此基础上进一步考察其色谱条件，测定金槐冠
心片中薯蓣皂苷元的含量。该方法简便、分离效果
好，可用于控制本品的质量。
1仪器与试药
日本岛津LC--10Avp高效液相色谱仪，包括
SPD一10Avp紫外可见光检测器，CLASS—VP
V5．03色谱数据处理工作站；CQ一250型超声波清
收稿日期：2004—07—06
基金项目：四川省重点科技项目(01SG008—01)
*通讯作者Tel：(028)85501566Fax：(028)85456898E—mail：zrzzl@vip．sina．com
万方数据
·528· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
洗器(中国船舶工业总公司第七研究院第七二六研
究所)；薯蓣皂苷元对照品(供含量测定用，批号：
1539—200001，中国药品生物制品检定所)；金槐冠心
片(自制，批号：010901、010902、011007、011008)；甲
醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其他试剂均为分
析纯。
2方法与结果
2．1 色谱条件：色谱柱为Shim—packCLC—ODS柱
(150mm×6．0mm，5肛m)(日本岛津)，流动相为
甲醇一乙腈(3：2)，体积流量为1mL／min，检测波长
为206nm，柱温为30℃，进样量为lo肛L。理论板数
按薯蓣皂苷元峰计不低于7000，分离度大于2．0。
2．2对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干
燥4h的薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成0．15
mg／mL的溶液。
2．3供试品溶液的制备
2．3．1水解时酸种类和浓度的选择：取本品素片适
量，研细，取适量(相当于穿山龙0．25g)，精密称定，
置50mL圆底烧瓶中，分别加入1mol／L硫酸、2
mol／L硫酸、2mol／L盐酸各30mL，水浴回流5h，
冷却，滤过，用适量水洗涤容器及滤渣，烘干(70--80
℃)，加氯仿20mL，超声处理10min，滤过；滤渣与
滤纸再加氯仿20mL，同法超声处理2次，滤过，合
并滤液，挥干氯仿，残渣加甲醇使溶解，移置10mL
量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，
按上述色谱条件测定，结果表明2mol／L盐酸水解
较2mol／L硫酸稍好。因此选择2mol／L盐酸。
2．3．2水解时酸量和时间的选择：按上述试验条
件，考察样品分别在2mol／L盐酸30mL水解5h、
40mL水解4h和40mL水解5h时的程度。结果
以40mL盐酸水解5h时的水解条件最优。
2．3．3超声提取溶剂的选择：在上述条件下，分别
以氯仿、石油醚、醋酸乙酯、苯为超声提取溶剂，同法
制样，测定。结果表明，上述4种溶剂的超声提取效
率依次减小。因此，选择氯仿为超声提取溶剂。
2．3．4超声提取次数的选择：由于本品经酸水解后
生成的薯蓣皂苷元与槲皮素等均不溶于酸水中，水
解液冷却后滤过，取滤渣与滤纸于70～80℃烘干
(约2h)，加氯仿20mL，在超声(35kHz、320w)处
理10min的条件下考察薯蓣皂苷元提取完全的次
数。结果表明，在上述条件下，第3次提取仅为前2
次的1％。因此，超声提取3次即可达到完全提取。
2．3．5供试品溶液的制备：取本品适量，除去薄膜
衣，研细，取适量(相当于穿山龙0．25g)，精密称定，
置50mL圆底烧瓶中，加2mol／L盐酸40mL，沸
水回流5h，取出，冷却，滤过，用适量水洗涤容器及
滤渣，烘干(70--80℃)，加氯仿20mL，超声处理15
min，滤过；滤渣与滤纸再加氯仿20mL，同法超声
处理2次，每次10min，滤过，合并滤液，挥干氯仿，
残渣加甲醇使溶解，移至10mL量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。
2．4 阴性对照溶液的制备：精密称取阴性样品(全
处方中缺穿山龙，按样品制备工艺制备)适量，按上
述供试品溶液的制备方法制样，即得。
2．5精密度试验：精密吸取供试品溶液，在上述色
谱条件下连续进样6次，测定薯蓣皂苷元的峰面积，
计算其RSD为1．72％(胛一6)。
2．6稳定性试验：精密吸取供试品溶液，在上述色
谱条件下，每2h测定1次。结果表明，供试品溶液
在10h内稳定，样品中薯蓣皂苷元质量分数的RSD
为1．44％(卵一6)。
2．7重现性试验：取同一批样品6份，按上述供试
品溶液的制备方法和测定条件，平行测定，每份样品
进样3次，计算样品中薯蓣皂苷元的质量分数，结果
其RSD为1．34％。
2．8 回收率试验：取上述阴性对照溶液和已知薯蓣
皂苷元含量的金槐冠心片粉末各6份，精密称定，分
别加入1．512mg／mL薯蓣皂苷元对照品溶液1．0
mL和0．5mL，同法制样，测定，计算回收率。结果
薯蓣皂苷元的平均空白回收率为95．6％，RSD为
2．44％；平均样品回收率为98．7％，RSD为2．66％
(卵一6)。
2．9样品测定：按上述供试品溶液的制备方法和测
定条件，测得4批样品中薯蓣皂苷元的质量分数分
别为：o．61％(RSD一2．36％)、o．59％(RSD一
1．97％)、o．53％(RSD一1．09％)、0．54％(RSD一
1．57％)(咒一3)。即样品中薯蓣皂苷元的平均质量
分数为0．56％，每片按0．2g计算则为1．1mg，故
确定本品每片含穿山龙以薯蓣皂苷元(C：，H。。O。)
计，不得少于1．0mg。色谱图见图1。
3讨论
3．1 流动相的优化：参照文献报道[2]比较了甲醇一
乙腈的体积比为4：1、7：3和3：2时供试品溶液
的色谱图，结果仍以甲醇一乙腈(3：2)时基线平直、
分离效果最佳。
3．2供试品溶液的水解条件：本品由穿山龙、槐米、
雪胆3味药材的提取物组成，其中槐米提取物水解
后主要为槲皮素，雪胆提取物主要为雪胆总皂苷。在
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·529·
A
+889l
0 5 10 150 5 10 150 5 10 15
t{rain
*一薯蓣皂苷元
*一diosgenin
图1薯蓣皂苷元对照品(A)、阴性对照(B)和金槐
冠心片(c)的HPLC图谱
Fig．1HPLCchromatogramsfdiosgenin(A)，
negativesample(B)，andJinhuaiGuanxin
Tablet(C)
酸性条件下水解穿山龙总皂苷时，雪胆总皂苷也可
被水解，其主要皂苷元为齐墩果酸[3]。经优化，本试
验选择2mol／L盐酸40mL水浴回流5h，而文献
报道[21选择lmol／L硫酸20mL水解5h测定0．25
g穿山龙中的薯蓣皂苷元，说明雪胆总皂苷等成分
的影响而需要更多的酸才能使穿山龙总皂苷完全水
解。经与齐墩果酸对照品(供含量测定用，批号：
0709—9803，中国药品生物制品检定所)比较，样品水
解后约在22rain处可见齐墩果酸峰，进一步表明雪
胆总皂苷水解为齐墩果酸并消耗一定量的酸。另外，
文献报道[13采用3mol／L盐酸50％乙醇溶液测定
本片中穿山龙和雪胆皂苷水解产物的总量。在水解
甾体皂苷时，通常使用硫酸、盐酸进行水解。文献报
道认为穿山龙水解为薯蓣皂苷元时使用2mol／L盐
酸较2mol／L硫酸佳[4]。本试验亦表明，使用2tool／
L盐酸较2mol／L硫酸稍好，而使用lmol／L硫酸
水解较差。因此，对于不同的药材和不同组成的制
美国ALPHA实验室认可
美中国际合作中国企业
剂，其水解时酸的种类、浓度、酸量、时间各不相同，
必须对水解条件进行优化。
3．3在上述色谱条件下，供试品中薯蓣皂苷元的分
离度较大，阴性对照溶液在薯蓣皂苷元峰对应处基
线平直，对测定无干扰。由于本品中雪胆总皂苷的主
要水解物齐墩果酸，不溶于水，亦可被氯仿提取，且
在208nm波长处有最大吸收，但在上述色谱条件
下的tR值约为22rain，因此对薯蓣皂苷元的测定无
干扰。而槲皮素在水中几乎不溶，氯仿中微溶，在低
波长处无紫外吸收，因此，对测定亦无干扰。
3．4由于本品中的槲皮素比例较大，不利于供试品
溶液的制备，采用氯仿超声提取经干燥后的滤渣，不
仅可有效提取薯蓣皂苷元，也可除去大量的槲皮素。
3．5本品水解液冷却后的滤液，经氯仿提取3次，
每次20mL，同法制样，在上述色谱条件下测定。结
果表明，滤液中未检出薯蓣皂苷元。
3．6原质量标准采用重量法间接测定穿山龙和雪
胆皂苷水解产物的总量，质量难以控制。本实验采用
RP—HPLC法测定其薯蓣皂苷元，方法简单、准确可
靠，可用于控制本品的质量。同时，在该条件下，亦可
考察雪胆总皂苷的水解程度，以实现在同一条件下
同时测定本品中薯蓣皂苷元和齐墩果酸，从而更好
地控制本品的质量。
References：
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】996．2】(2)：】4一】7．
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天津经济技术开发区第十二大街
万方数据
RP-HPLC法测定金槐冠心片中薯蓣皂苷元的含量
作者： 徐雄良， 向轶， 柯尊洪， 张志荣， XU Xiong-liang， Xiang　Yi， KE Zun-hong，
ZHANG Zhi-rong
作者单位： 徐雄良,向轶,张志荣,XU Xiong-liang,Xiang　Yi,ZHANG Zhi-rong(四川大学华西药学院,四
川,成都,610041)， 柯尊洪,KE Zun-hong(成都康弘科技实业(集团)有限公司,四川,成都
,610041)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(4)

参考文献(4条)
1.Chao C L 中药制剂汇编 1983
2.Xu X L;Zhang Z R;Ke Z H Quantitative analysis of diosgenin in Rhizoma Dioscoreae Nipponicae[期刊论
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200504019.aspx