全 文 ：中草瞒ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1081·
号”之间亲缘关系也较近，而“民勤1号”与其余3种
亲缘关系较远。
3讨论
甘草长期生长在甘肃、新疆恶劣气候条件下，其
基因构成可能会产生不同程度的变异，而这种变异
正是进行甘草新品系选育的基础。
“民勤1号”、“喀什1号”、“阿克苏1号”分别采
集于甘肃、新疆等地的野生种群，笔者在对其进行引
种栽培和优良品系选育的过程中，发现与常规人工
栽培品系内蒙古乌拉尔甘草相比，在单位面积产量、
抗性、产品品质等方面具有显著的优势。
UPGMA聚类图表明4种来源乌拉尔甘草被划
分为4组，并表现出不同远近的亲缘关系。遗传多样
性分析显示，民勤1号的遗传多样性最大(o．2061)，
遗传多样性最小的是喀什1号(o．1952)，这可能与
生长环境有关：喀什较民勤生态环境恶劣，甘草生态
位比较狭窄，遗传分化不如民勤明显。指纹图谱显示
出“民勤L号”、“阿克苏1号”、“喀什1号”和内蒙古
对照乌拉尔甘草相比具有的特异性谱带数量分别为
6条、5条和2条。说明由于受到恶劣生长环境的长
期影响，3个不同来源乌拉尔甘草经过较长时间的
演变之后，已经各自形成了其独有的基因结构。因此
可以确定经过多年栽培选育的“民勤1号”、“喀什1
号”和“阿克苏1号”可以作为乌拉尔甘草优良栽培
新品系选育目标进行深入研究。
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佛手茎尖微嫁接技术研究
张桂芳，贺 红’，徐鸿华，林小桦，吴立蓉
(广州中医药大学中药学院，广东广州 510006)
摘 要：目的 探讨佛手茎尖微嫁接技术，为佛手无病苗木的培育奠定基础。方法 黑暗条件下培养柠檬实生苗用
作砧木，以佛手茎尖为接穗，采用倒“T”字形法进行茎尖微嫁接试验，并对影响嫁接成活率的因素进行研究。结果
成功获得了佛手茎尖微嫁接苗，并优化了微嫁接的条件：选取苗龄为14d的柠檬实生苗为砧木，嫁接成活率较高；
以带4个叶原基的佛手茎尖为接穗，效果较好，嫁接成活率可达65．2％；茎尖微嫁接后，切口外缠parafilm膜，能明
显提高成活率。结论建立了佛手茎尖微嫁接的方法，获得了嫁接成活苗。
关键词：佛手；茎尖微嫁接；成活率
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)07—1081—04
Techniqueforshoot—tipgraftingofCitrusmedicavar．sarcodactylis
ZHANGGui—fang，HEHong，XUHong—hua，LINXiao—hua，WULi—rong
(CollegeofChineseMateriaMediea，GuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine，Guangzhou510006，China)
Abstract：ObjectiveTostudythtechniqueforshoot—tipgraftingofCitrusmedicavar．sarcodactylis
inordertolaya foundationforculturingd sease—freeplantlets．MethodsUsingdarkgrownlemon
收稿日期：2006—09—08
基金项目：广东省自然科学基金项目(020792)；国家中医药管理局研究课题(02—03ZP48)
作者简介：张桂芳(1980一)，女，博士，从事药用植物组织培养及中药资源开发利用研究。
*通讯作者贺红Tel：(020)39358067E—mail：hehon967@yahoo．com．an
万方数据
·1082· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
seedlingasrootstockandshoot—tipofC．medicavar．sarcodactylisasscion，thehoot—tipgraftingwasexe—
cutedbygraftingascioni aninverted—Tincisionoflemonseedling．Andthefactorsaffectinghesurvival
rateofshoot—tipgraftingwerestudied．ResultsThemicro—graftedplantletsofC．medicavar．sarco-
dactyliswereachieved．Itwasuggestedthatthemoresurvivalrateofgraftingwasobtainedbyusing14一
day—olddarkgrownseedlingsasrootstocks．Thescionsconsistedof heapicalmeristemplusfourleafpri—
mordiawereoptimalforgrafting，withsurvivalrateof65．2％．Moreover，thesurvivalrateofgrafting
couldbeincreasedobviouslyifthegrafting—incisionsweretwistedwithparafilm．ConclusionAprocedure
ofshoot—tipgraftinginvitrohasbeenestablishednC．medicavar．sarcodactylisandmicro—graftedsur—
vivalp antletshavebeenobtained．
Keywords：CitrusmedicaL．var．sarcodactylis(Noot．)Swingle；shoot—tipgrafting；survivalrate
佛手CitrusmedicaL．var．sarcodactylis
(Noot．)Swingle为芸香科柑桔属植物，以干燥果
实入药，具有疏肝理气、和胃止痛的功效[1]。随着市
场需求的扩大及产业化生产的发展，对佛手的产量
和质量提出了更高的要求，需要在栽培管理、病虫害
防治及优质种苗的培育等方面做好工作。笔者通过
调查发现，影响佛手产量和质量的主要因素之一是
病害的危害，尤其是佛手黄龙病。而且，由于佛手通
常以扦插和嫁接繁殖，长期的无性繁殖，病原体逐代
传递和积累，造成植株长势减弱、生活力下降、产量
降低、品质变劣，严重威胁佛手的生产。运用现代生
物技术培育无病原体苗，已成为佛手生产中极为迫
切的问题。茎尖微嫁接技术可以脱除病原体，这项技
术已在柑桔、沙田柚上获得成功，并逐步在生产上应
用[2叫]。本实验探讨了佛手茎尖微嫁接的方法并对
影响嫁接成活率的因素进行研究，为佛手无病苗木
的培育奠定基础。
1材料与方法
1．1 材料：感染黄龙病的佛手CitrusmedicaL．
var．sarcodactylis(Noot．)Swingle来源于广东省
肇庆地区，通过电镜和PCR技术检测证明感染了黄
龙病病原[63；砧木为柠檬C．1imon(Linn．)Burm．
f．实生苗。
1．2方法
1．2．1 砧木的培养：取成熟柠檬果实中的种子，经
表面消毒，剥去种皮，接种于MS培养基上，在培养
箱中黑暗条件下培养，培养温度为28℃。
1．2．2接穗的准备：采摘2～3cm长的佛手病株嫩
芽，切取0．5～1cm茎尖，用蒸馏水冲洗几次，75％
酒精浸泡约30S，0．1％HgCl：消毒6min，无菌水
冲洗4～5次后，在双目显微镜下剥取0．2mmt左右
的茎尖作为接穗(图1一A)。
1．2．3茎尖微嫁接：在无菌条件下，将砧木苗从培
养瓶中移出，选择根茎部直径较大的健壮苗，切去子
叶和部分过长的根并去顶，留约1．5cm长的上胚轴
(图1一B)，在双目显微镜下，用自制的解剖刀在上胚
轴上切成倒“T”字形切口，随后，将茎尖接到砧木的
倒“T”字形切口上，根据实验要求分为外缠parafilm
膜和不缠膜。
1．2．4嫁接苗的生长：将嫁接苗移入带滤纸桥的液
体培养基中，以MT为基本培养基，附加6-BA0．1
mg／L和7．5％的蔗糖；培养温度为(26士1)℃，每
天光照12h，光照强度为2klx。观察嫁接苗的长势，
一个月后记录嫁接成活率。一般每个实验处理，嫁接
的苗数为20个左右。
2结果与分析
2．1佛手茎尖微嫁接苗的获得：按照上述嫁接方
法，在双目显微镜下，将切好的茎尖嫁接到砧木上胚
轴的倒“T”字形切口上，外缠parafilm膜，再将整株
移入带滤纸桥的液体培养基中。培养一周后，接穗和
上胚轴切口处产生愈伤组织，嫁接苗开始成活。这时
要及时除去砧木上长出的不定芽以减少对接穗萌发
的影响；两周后，接穗开始萌生新叶，砧木也长出少
量白色、幼嫩的新根；第3周，茎尖微嫁接苗长出
6～8片真叶(图l-C)，此时，将其从培养室中移出，
在室内自然光下培养3d，取出用蒸馏水洗净，置于
5mg／LIBA溶液中浸泡24h后，单株移人混合土
壤(50％的营养土：50％细砂)的营养钵中，注意植
株的保湿，移栽时应使根系紧密接触土壤，用1／2
MT培养液充分湿润土壤。一个月后，茎尖微嫁接成
活苗可以长出10片左右新叶(图1一D)。
2．2砧木苗龄对嫁接成活率的影响：为了考察砧木
苗龄对嫁接成活率的影响，取苗龄为8、10、12、14、
16、18、20、22、26、32、36d的实生苗为砧木，以带4
个叶原基的佛手茎尖为接穗，分别进行微嫁接，并在
嫁接切口外缠parafilm膜。可以看到，培养两周时，
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
砧木苗龄在8～18d的茎尖微嫁接苗长势良好，茎
尖生长快，根系旺盛，长出许多白色、幼嫩的新根；随
着砧木苗龄的增加，茎尖长势逐渐变差；而砧木苗龄
为32～36d的嫁接苗长势最差，茎尖生长缓慢，且
逐渐萎蔫，根系变黄。一个月后统计成活率(图2)，
砧木苗龄为14d，茎尖嫁接成活率最高，达60．o％；
苗龄小于14d的砧木，其嫁接成活率较低；但随着
70
60
50
《40
嬖30
餐20
lO
苗龄的增加，嫁接成活率也逐渐下降。当砧木苗龄为
36d时，嫁接成活率为0，说明砧木苗龄对嫁接成活
率影响较大。由于苗龄为14d时，砧木长势良好，苗
径围度较粗，且尚未纤维化，切口易产生愈伤组织，
有利于和接穗愈合；接穗通过砧木可以及时获得水
分和营养，所以嫁接成活率较高。因此，以下试验均
选取苗龄为14d的柠檬实生苗为砧木。
A一带2个叶原基的佛手茎尖(50倍)B一砧木c一茎尖微嫁接苗D一移栽成活的茎尖微嫁接苗
A—microbudwithapicalmeristemandtwoleafprimordial(50times)B-rootstock
C—-micro-·graftedpl n letD-transplantmicro·-graftedplantlets
图l佛手茎尖微嫁接
Fig．1Shoot—tipgraftingofC．medicavar．sarcodactylis
70
60
水50
森40
烘30
趟20
10
万方数据
·1084· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
镰100◆一t／d图4切口外缠膜对嫁接成活率的影响Fig．4Effectofincisiontwistedwithparafilmonsurvivalrateofshoot—tipgrafting
的愈伤组织可快速填满伤I=I，明显提高嫁接成活率。
3讨论
柑桔属植物的病害较为严重，如黄龙病是由类
细菌(类菌原体)侵染所致，以木虱作为传播媒介，是
一种毁灭性的病害。现有的防治措施，主要是喷洒农
药杀灭木虱及烧毁病株，从切断传染源方面来控制
其蔓延，但对病害本身并没有有效的防治手段。同时
农药残留超标，严重制约了高产、优质、低残留药材
和水果的生产。因此，无病苗木的培育具有重要的意
义。目前，柑桔属植物无病苗木的培育方法主要有热
处理法、珠心胚培养、茎尖培养及茎尖微嫁接等4
种。热处理法较为简便易行，但经处理后的苗木和接
穗存活率较低，且对于病毒脱除困难[7]。珠心胚培养
会产生童期症状，且多变异[8]。茎尖培养脱除病原
体，在许多植物上获得成功并应用于生产，但柑桔属
植物的离体实验表明，茎尖培养难以成活且存在生
根难的问题[5]。采用茎尖微嫁接可以克服此类困难，
自Navarro等[2]首次应用于柑桔脱毒后，20多年来
得到了迅速的发展，并产生了巨大的经济效益。由于
它既不会产生变异，也无童期现象，同时，又能脱除
大部分病原体，因此已成为获得柑桔属植物无病原
体苗木的最佳途径[2~5]。通过茎尖微嫁接试验，笔者
建立了佛手茎尖微嫁接方法，获得了较高的嫁接成
活率，为培育佛手脱病原体苗奠定了基础。本实验首
次报道佛手茎尖微嫁接技术，有关微嫁接苗病原体
的检测及繁殖，还有待进一步研究。
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海南胡椒药材的HPLC指纹图谱研究
张艳秋，洪金波
(海南省药物研究所，海南海口 570314)
摘 要：目的 建立胡椒药材的指纹图谱，为胡椒的质量控制提供新方法。方法 采用高效液相色谱法，选用
YMCC，8色谱柱(250mm×4．6mm，5脚)，流动相为甲醇一水(65：35)；体积流量为lmL／rnin；检测波长为245
am。结果建立了胡椒药材的指纹图谱，并检测了不同来源10批胡椒药材HPLC指纹图谱，相似度较高，并且利
用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”生成了胡椒药材的对照指纹图谱，共有指纹峰12个，各色谱峰分离良好；
对比分析4批市售胡椒粉HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度。结论所建立的胡椒药材的指纹图谱有良好的精
密度、重现性、稳定性，适于胡椒的质量控制。
关键词：胡椒；HPLC；指纹图谱；相似度
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)07—1084一04
收稿日期：2006—10—20
基金项目：海南省自然科学基金项目(20103)
作者简介：张艳秋(1962一)，女，吉林人，研究员，研究方向为中药质量控制的方法学研究和薪品开发。
E—mail：zyq@hifda．gov．cn
万方数据
佛手茎尖微嫁接技术研究
作者： 张桂芳， 贺红， 徐鸿华， 林小桦， 吴立蓉， ZHANG Gui-fang， HE Hong， XU Hong-
hua， LIN Xiao-hua， WU Li-rong
作者单位： 广州中医药大学中药学院,广东,广州,510006
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 2次

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引证文献(2条)
1.张桂芳.徐鸿华.贺红 佛手茎尖玻璃化超低温保存和植株再生[期刊论文]-中草药 2009(11)
2.张桂芳.贺红.徐鸿华 影响佛手茎尖微嫁接成活率的因素[期刊论文]-广州中医药大学学报 2009(5)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200707046.aspx