全 文 ：图 1　加入氮酮 (A)及不加入氮酮 (B)的
化瘀巴布膏剂体外透皮吸收曲线
Fig. 1　 Percutanous absorption curves of HBSP with
laurocapran (A) and without laurocapran (B)
贴于离体鼠皮角质层一侧。 接收池中不加接收液以
消除因经皮渗透及吸水造成的影响 ,而只考察试验
过程中因挥发性成分挥发而造成的影响。分别于 8,
24, 50 h依次称取其中一份巴布剂约 0. 5 g ,同时该
套装置即结束试验。另称取新拆封的巴布剂约 0. 5 g
作为 0 h的样本 ,进行丁香酚的含量测定。
　　样品置 25 mL容量瓶中 ,加适量无水乙醇 ,超
声提取 30 min后放冷 ,定容 ,取 3μL注入气相色谱
仪中测定 ,根据峰面积计算出含量 (C ) ,以时间 t为
横坐标 ,各时间点丁香酚含量 (C )为纵坐标 ,绘制曲
线 ,见图 2。 可见体外透皮吸收试验过程中 ,化瘀巴
布剂基本稳定。
3　讨论
3. 1　我们曾经选用生理盐水、 30%乙醇生理盐水
液、 50%乙醇生理盐水液作为接受液测定胡椒碱的
含量 ,结果用 50%乙醇生理盐水液溶解最好 ,含量
最高。 所以选用 50%乙醇生理盐水液作为接受液。
3. 2　胡椒碱对照品溶液经紫外扫描 ,发现 339 nm
图 2　 50 h内丁香酚含量变化曲线
Fig. 2　 Angenol change curve during 50 h
处有最大吸收 ,所以选用 339 nm为检测波长。
3. 3　不加氮酮明显小于加了氮酮的化瘀巴布膏的
累计透过量 ,说明氮酮起到了很好的促渗透作用 ,化
瘀巴布膏中加入氮酮是合理可行的。
3. 4　化瘀巴布膏在 0～ 50 h体外经皮恒速渗透 ,作
用时间较长 ,有望发展成为长效的经皮给药制剂。
3. 5　制剂稳定性试验中曾选择冰片作为指标 ,因为
对照品有两个峰 ,计算后得到的标准曲线中的线性
关系不如丁香酚 ,两者的含量相似 ,故采用丁香酚为
挥发性成分指标。
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苦玄参、黄芩与黄柏的大孔树脂提取研究
邹节明 ,陆　浩 ,何　斌 ,吴敏菊
(桂林三金药业股份有限公司药物研究所 ,广西 桂林　 541004)
摘　要: 目的　探讨大孔吸附树脂在精制苦玄参、黄芩与黄柏有效部位的应用。 方法　以中药中的有效成分为指
标 ,筛选适用的大孔吸附树脂型号 ,评价树脂吸附与解吸工艺。 结果　苦玄参、黄芩与黄柏提取物精制适用树脂型
号分别为 HPD500、 HPD300与 HPD100,吸附阶段的泄漏点分别为 1. 5, 0. 5和 1;饱和点分别为 11, 2和 4. 75;解吸
阶段的适用乙醇浓度分别为 50% , 30%和 50%。结论　不同型号的大孔吸附树脂对中药有效部位的提取精制有较
大差别。
关键词: 苦玄参 ;苦玄参苷 IA;黄芩 ;黄芩苷 ;黄柏 ;盐酸小檗碱 ;大孔吸附树脂
中图分类号: R284. 2; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0222 05
·222· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-09-09
Study on extracting purified active components of Picria fel-terrae , Scutellar ia baicalens is
andPhellodendron chinense with macroporous resins
ZOU Jie-ming , LU Hao , HE Bin, WU Min-ju
( Institute o f Mate ria M edica, Guilin Sanjin Pha rmaceutical Co. , Ltd. , Guilin 541004, China)
Abstract: Object　 To study the application of macropo rous resins to the purified activ e components of
Picria f el-terrae Lour. , Scutellaria baicalensis Geo rgi, and Phellodendron chinense Schneid. Methods　
With the puri fied activ e components of Chinese ma teria medica ( CMM ) as a standa rd, w e selected the sui t-
able macroporous resins and studied the optimum tech nolog ical pa rameters of the adso rption and elution.
Results　 The sui table three types o f macroporous resins which w ere used to the purified activ e components
o f CMM were HPD500 fo r P . f el-terrae. , HPD300 for S. baicalensis , and HPD100 for P. chinense. In the
abso rption course, w hen the ratio s betw een the medicinal ma teria ls amount and the vo lume o f macroporous
resins w ere 1. 5 for P . fel-terrae , 0. 5 fo r S. baicalensis and 1 for P . chinense , the purified activ e compo-
nents of CMM appeared leaking , and w ere no mo re absorbed when the ratios w ere 11 fo r P. fel-terrae , 2
fo r S. baicalensis and 4. 75 fo r P. chinense. In the elution course, the optimum alcohol concentra tions w ere
50% fo r P. fel -terrae, 30% fo r S. baicalensis and 50% for P . chinense. Conclusion　 It is obviously dif-
ferent to refine the activ e components of CMM, while using the div erse types of macroporous
resins.　　　　
Key words: Picria fel -terrae Lour. ; picfelterra enin Ⅰ A; Scutellaria baicalensis Geo rgi; baicalin;
Phellodendron chinense Schneid; berberine hydro chlo ride; macroporous resin
　　大孔吸附树脂作为一种多孔道、大孔径的高分
子分离材料 ,根据被吸附对象的极性和相对分子质
量大小、以及在不同溶剂中的溶解度差异 ,可以大
量、迅速、选择性地吸附或解吸化学成分 ,达到有机
化合物的分离和提纯。在实际生产应用中 ,针对不同
中药有效部位选择适用的树脂并采用合理的实验设
计和测定方法评价具体工艺条件 ,才能充分发挥大
孔吸附树脂处理技术在中药提取中的作用 [1, 2 ]。本实
验以苦玄参提取物中的苦玄参苷Ⅰ A、黄芩提取物中
的黄芩苷和黄柏提取物中的总生物碱的含量为考察
指标 ,选择适用于提取上述中药的皂苷类、黄酮类、
总生物碱类有效部位的大孔吸附树脂型号 ,并通过
吸附曲线、解吸曲线和 HPLC谱图等技术方法评价
树脂吸附与解吸工艺。
1　仪器与材料
Waters高效液相色谱仪 ( W aters515高压泵 ,
Wa ters717自动进样器 , Waters996二级管矩阵检
测器 , Millennium 32色谱工作站 ) ,岛津 UV-
2401PC紫外分光光度仪。
苦玄参 Picria f el-tarrae Lour.、黄芩 Scute-
l laria baicalensis Geo rgi、黄柏 Phel lodendron chine-
nse Schneid.均购自桂林药材站。苦玄参苷Ⅰ A对照
品由广西植物研究所提供 (纯度为 98. 31% ) ,黄芩
苷 (批号: 0715-200010)、盐酸小檗碱 (批号: 0713-
9906)对照品购自中国药品生物制品检定所。甲醇、
乙腈为色谱纯 ,水为超纯水 ,其他试剂均为分析纯。
大孔吸附树脂均购自河北沧州宝恩化工有限公司。
2　方法与结果
2. 1　苦玄参苷Ⅰ A的含量测定
2. 1. 1　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Phenomenex C18
( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm);流动相: 乙腈-水 -冰醋
酸 ( 38∶ 62∶ 0. 5) ;流速: 1 mL /min;检测波长: 264
nm。在此条件下 ,苦玄参苷Ⅰ A与样品中其他成分
达到基线分离 (图 1)。
图 1　苦玄参苷Ⅰ A对照品 (A)和苦玄参
供试品 (B)的 HPLC图谱
Fig. 1　 HPLC chromatograms of picfelterraenin
Ⅰ A (A) andP . f el-tarrae (B)
2. 1. 2　对照品溶液制备:精密称取经五氧化二磷干
燥至恒重的苦玄参苷Ⅰ A对照品 4. 87 mg ,置 10 mL
棕色量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀即得。
2. 1. 3　供试品溶液的制备:苦玄参切成段状 ,取适
量 ,加 12倍量水提取 2次 ,每次 1 h,滤过 ,滤液合
并 ,浓缩至浸膏 (生药含量为 1 g /mL) ,冷冻保存。分
别用蒸馏水稀释不同的倍数 ,过膜 ,备用。
·223·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
2. 1. 4　线性关系的考察: 精密吸取苦玄参苷Ⅰ A对
照品溶液 4, 6, 8, 10, 12, 14μL注入液相色谱仪 ,按
上述色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标 ,苦玄
参苷Ⅰ A含量为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得方程 Y=
613 539X+ 37 410, r= 0. 999 1,线性范围: 1. 912～
6. 692μg。
2. 1. 5　测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10μL,注入液相色谱仪 ,测定。
2. 1. 6　精密度试验:取同一供试品溶液 ,连续自动
进样 5次 ,计算得苦玄参苷Ⅰ A峰面积的 RSD=
0. 676% 。
2. 1. 7　稳定性试验:取同一份供试品溶液 ,于配制
后 0, 1, 2, 4, 6, 12, 24 h依法测定。苦玄参苷Ⅰ A峰面
积的RSD= 2. 38% 。
2. 2　黄芩苷的含量测定
2. 2. 1　 色 谱 条 件: 色 谱 柱: Phenomenex C18
( 4. 6 mm× 250 mm , 5μm);流动相: 甲醇 -水 -磷酸
( 50∶ 50∶ 0. 02) ;流速: 0. 8 mL /min;检测波长: 277
nm。 在此条件下 ,黄芩苷与样品中其他成分能达到
基线分离 (图 2)。
图 2　黄芩苷对照品 ( A)与供试品 ( B)的 HPLC图谱
Fig. 2　HPLC chromatograms of baicalin (A)
andS . baicalensis (B)
2. 2. 2　对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷
干燥至恒重的黄芩对照品 6. 168 mg ,置 100 m L棕
色量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀即得。
2. 2. 3　供试品溶液的制备:取黄芩同 2. 1. 3操作。
2. 2. 4　线性关系的考察: 精密称取黄芩苷对照品
10. 10 mg,置 25 mL量瓶中 ,加甲醇使溶解并稀释
至刻度 ,摇匀。精密量取 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0
m L分别置 10 mL量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即
得。分别精密吸取上述溶液各 10μL,注入液相色谱
仪 ,测定 ,以峰面积为横坐标 ,进样量为纵坐标绘制
标准曲线 ,得方程 Y= 2. 349× 10- 7 X+ 3. 688×
10
- 3
, r= 0. 999 8,线性范围: 0. 202～ 2. 02μg。
2. 2. 5　测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10μL,注入液相色谱仪 ,测定。
2. 2. 6　精密度试验: 取同一供试品溶液 ,连续自动
进样 5次 ,计算黄芩苷峰面积 ,其RSD= 0. 374%。
2. 2. 7　稳定性试验: 取同一份供试品溶液 ,于配制
后 0, 1, 2, 4, 6, 12, 24 h依法测定。黄芩苷峰面积的
RSD= 3. 97%。
2. 3　总生物碱的含量测定 [3 ]
2. 3. 1　对照品溶液的制备:精密称取经 105℃干燥
至恒重的盐酸小檗碱对照品 8 mg ,置 10 mL量瓶
中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀。 精密量取 1
mL,置 25 m L量瓶中 ,加乙醇至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 3. 2　标准曲线的制备:分别精密量取对照品溶液
1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL,置 10 mL量瓶中 ,加
0. 1 mol /L盐酸溶液至刻度 ,摇匀 ,以相应的试剂为
空白。 照分光光度法 ,在 345 nm波长处测定吸光
度。 以吸光度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲
线 ,得方程 Y= 0. 072 8X - 0. 003, r= 0. 999 99,线
性范围: 3. 48～ 17. 4μg /mL。
2. 3. 3　供试品溶液的制备:取黄柏按照 2. 1. 3项下
的方法所得样品溶液 ,置中性氧化铝柱 ( 5 g ,内径约
1 cm,湿法装柱 ,用乙醇 30 mL预洗 )上 ,用乙醇洗
脱 ,收集洗脱液 ,置 50 mL量瓶中 ,至洗脱液近刻度
时为止 ,加乙醇至刻度 ,摇匀即得。
2. 3. 4　测定方法:精密量取供试品溶液 2 mL,置 10
mL量瓶中 ,照 2. 3. 2项下的方法 ,自“加 0. 1 mol /L
盐酸溶液至刻度……”起 ,依法测定 ,计算即得。
2. 4　大孔吸附树脂预处理:以 95%乙醇溶液浸泡
树脂 24 h,充分溶胀后用湿法装柱 ( 4 cm× 80 cm) ,
以 2 BV /h的流速洗脱 ,至流出液与水混合不呈白
色混浊为止 ,再用蒸馏水洗至无醇味 ,备用。 称取树
脂时以树脂在水中溶胀后的体积 ( mL)为单位。
2. 5　上柱样品液的制备:照 2. 1. 3项下方法制备苦
玄参、黄芩上柱样品液和 2. 3. 3项下方法制备黄柏
的上柱样品液。
2. 6　适用树脂的筛选: 采用静态吸附法 ,通过测定
吸附残液和解吸液的指标成分浓度筛选最适树脂。
量取大孔型树脂 (苦玄参、黄芩、黄柏分别取 10, 40,
20 mL树脂 ) ,置锥形瓶中 ,分别加入上柱样品液 (苦
玄参、黄芩、黄柏的上柱样品液含生药浓度分别为
0. 2, 0. 05, 0. 1 g /m L) ,浸渍 24 h (每隔 8 h振摇一
次 ) ,滤过。 100 mL蒸馏水洗涤树脂 ,洗涤液与滤液
合并 ,测定吸附残液中的指标成分浓度评价吸附效
果。 向树脂中加入一定浓度的乙醇溶液 (苦玄参、黄
芩、黄柏分别用 70%乙醇 100 mL, 50%乙醇 200
mL, 50%乙醇 100 mL) ,浸渍 24 h(每隔 8 h振摇一
·224· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
次 ) ,滤过。 用乙醇溶液 50 mL洗涤树脂 ,洗涤液与
滤液合并作为样品溶液 ,测定解吸液中的指标成分
浓度 ,评价解吸效果。结果见表 1。
　　表 1显示: HPD500树脂对苦玄参苷Ⅰ A的吸附
表 1　不同型号大孔吸附树脂的静态吸附和解吸效果
Table 1　 Results of adsorpt ion and elution with diff erent types of macroporous resins
树脂
型号
苦玄参苷Ⅰ A
吸附量
/( mg· mL- 1)
解吸量
/ ( mg· mL- 1)
解吸率
/%
黄芩苷
吸附量
/( mg· mL- 1 )
解吸量
/ ( mg· mL- 1)
解吸率
/%
黄柏总生物碱 (以盐酸小檗碱计 )
吸附量
/( mg· mL- 1 )
解吸量
/ ( mg· mL- 1)
解吸率
/%
HPD100 　　 7. 90 　　 6. 64 　　 84. 1 　　 20. 18 　　 8. 37 　　 41. 5 　　 11. 77 　　 7. 42 　　 63. 0
HPD300 10. 46 7. 01 67. 0 22. 35 11. 29 50. 5 10. 20 6. 25 61. 3
HPD400 9. 61 7. 21 75. 0 19. 48 10. 02 51. 4 9. 84 7. 26 73. 7
HPD500 10. 50 8. 70 82. 9 16. 40 9. 47 57. 7 9. 79 6. 86 70. 1
HPD600 9. 36 8. 06 86. 1 16. 32 8. 95 54. 9 9. 09 6. 31 69. 4
HPD700 10. 14 5. 94 58. 5 19. 90 10. 88 54. 7 10. 89 8. 14 74. 7
HPD800 2. 80 2. 51 89. 6 19. 82 0. 02 0. 1 0. 24 0. 20 83. 7
　 D001 0. 98 0. 92 94. 4 6. 27 0. 02 0. 3 10. 43 0. 13 1. 3
　 D113 0. 80 0. 74 92. 0 2. 75 0. 91 33. 0 10. 90 0. 10 1. 0
　 D201 2. 65 2. 39 90. 2 19. 63 0. 01 0. 1 0. 31 0. 28 89. 0
　 D301 3. 03 2. 78 91. 8 18. 46 0. 01 0. 1 0. 50 0. 44 86. 7
量最高 ,确定作为苦玄参提取工艺的适用树脂型号 ;
HPD300树脂对黄芩苷的吸附量最高 ,因此作为黄
芩提取工艺的适用树脂型号 ; HPD100树脂对总生
物碱吸附量最高 ,确定作为黄柏提取工艺的适用树
脂型号。
2. 7　吸附阶段的考察:取静态吸附实验选择的树脂
400 mL装柱 (径高比为 1∶ 8)。 取生药上柱样品液
(生药浓度均为 0. 1 g /mL)以 4 BV /h的流速 (约 27
m L /min)连续通过树脂柱 ,收集流出液。 测定流出
液中的指标成分浓度 ,绘制吸附曲线 ,见图 3～ 5。
图 3　 HPD500树脂对苦玄参水提取液的吸附曲线
Fig. 3　 Adsorption curve in water extract ion of P .
fel-tarrae with HPD500 macroporous resin
图 4　 HPD300树脂对黄芩水提取液的吸附曲线
Fig. 4　 Adsorption curve in water extraction of S .
baicalensis with HPD300 macroporous resin
　　图 3～ 5显示 ,苦玄参水提取液中苦玄参苷Ⅰ A
的泄漏点和饱和点分别在 1. 5和 11左右 ,黄芩水提
取液中黄芩苷的泄漏点和饱和点分别在 0. 5和
图 5　 HPD100树脂对黄柏水提取液的吸附曲线
Fig. 5　 Adsorption curve in water extraction of P .
chinense with HPD100 macroporous resin
2. 00左右 ,黄柏水提取液中总生物碱的泄漏点和饱
和点分别在 1. 00和 4. 75左右。
2. 8　解吸阶段的考察:取已吸附的树脂 , 4 BV蒸馏
水淋洗后 ,依次用 10% , 30% , 50% , 70% , 90%乙醇
溶液各 4 BV进行梯度解吸 ,分段收集解吸液 (每份
1 BV,共 20份 )。测定解吸液中的指标成分浓度 ,绘
制解吸曲线 ,见图 6～ 8。 合并各浓度的解吸液 ,测定
指标成分含量结果见表 2。
图 6　 HPD500树脂对苦玄参水提取液的解吸曲线
Fig. 6　 Elution curve in water extraction of P .
fel-terrae with HPD500 macroporous resin
　　图 6～ 8和表 2显示:苦玄参水提取液的适用解
吸乙醇浓度为 50% ,其解吸液中的苦玄参苷Ⅰ A浓
度达到最高值 ,解吸产物的总固物中苦玄参苷Ⅰ A
含量最高 ,比原液提高了约 4. 2倍。30%乙醇溶液解
·225·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
图 7　 HPD300树脂对黄芩水提取液的解吸曲线
Fig. 7　 Elution curve in water extraction of S.
baicalensis with HPD300 macroporous resin
图 8　 HPD100树脂对黄柏水提取液的解吸曲线
Fig. 8　 Elution curve in water extraction of P .
chinense with HPD100 macroporous resin
吸液中的黄芩苷解吸量最高 ,总固物中黄芩苷含量
比原液提高了约 4. 1倍。 10% , 30%和 50%乙醇解
吸液中都有较高的黄芩苷含量 ,提示在黄芩提取工
表 2　不同浓度的乙醇溶液解吸物的比较
Table 2　 Comparison of eluted components
on diff erent alcohol concentrations
样　品 总固体中苦玄参苷Ⅰ A含量 /%
总固体中黄
芩苷含量 /%
总固物中总生
物碱含量 /%
上柱样品液 　　 2. 77 　　 19. 33 　　 10. 09
吸附流出液 0. 00 6. 42 0. 00
10%乙醇解吸液 0. 35 60. 18 0. 79
30%乙醇解吸液 1. 62 79. 53 17. 13
50%乙醇解吸液 11. 52 35. 56 42. 08
70%乙醇解吸液 11. 40 2. 59 12. 42
90%乙醇解吸液 0. 00 0. 00 2. 39
艺中可以考虑使用 10% 、 30% 、 50%乙醇进行梯度
洗脱。黄柏水提取液的适用解吸乙醇浓度为 50% ,
其解吸液中的总生物碱浓度达到最高值 ,解吸产物
的总固物中总生物碱含量最高 ,比原液提高了约
4. 2倍。
3　讨论
3. 1　不同中药有效部位的提取精制对大孔吸附树
脂型号有不同要求 ,不同型号的大孔吸附树脂对其
的吸附与解吸能力存在较大差别 ,应从先进性、适用
性、生产性以及经济性等方面予以综合评价 ,选择吸
附与解吸效果均较好的适用树脂型号。
3. 2　选用 HPD500、 HPD300、 HPD100树脂 ,采用
单柱单洗脱剂的方法 ,分别对主要有效部位为皂苷
类的苦玄参、黄酮类的黄芩、总生物碱类的黄柏水提
取液有较好的精制效果 ,其产物中有效成分含量可
提高 4倍以上。
3. 3　大孔吸附树脂应用于中药提取物的精制 ,若单
柱吸附 ,上柱液含生药量以在泄漏点附近为宜 ;若多
柱串联吸附 ,上柱液含生药量以接近饱和点为宜。
3. 4　乙醇是大孔吸附树脂处理技术用于中药精制
的常用经济解吸剂 ,不同类型、性质的中药有效部位
或成分都可通过试验寻找最佳解吸效果的乙醇浓度
或最佳的梯度洗脱组合。
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　　进口沉香为瑞香科植物沉香 Aquilaria agal-
locha Roxb.含有树脂的木材 ,是传统的进口中药。
文献报道 [1 ]其主要含有倍半萜类、芳香族成分和
2-( 2-苯乙基 )色酮衍生物等成分 ,其中芳香族成分
苄基丙酮具止咳作用 ,并与沉香中树脂的形成有关 ,
黄白色木材 (未形成树脂的组织 )中没有苄基丙
酮 [2 ] ,因此本实验建立了气相色谱法测定苄基丙酮
含量的方法。结果证明本方法灵敏、准确、可靠 ,可作
为控制沉香质量的有效方法。
1　仪器与试药
·226· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-04-04