全 文 ：·药剂与工艺·
银杏叶注射剂指纹图谱的研究
游　松1 ,王　亮1 ,蒋雅红1 ,贾　娴 1 ,杨华峰 2 ,姚新生 1
( 1. 沈阳药科大学 生物制药系 ,辽宁 沈阳　 110016; 2. 丽珠集团丽宝生化制药有限公司 ,广东 珠海　 519020)
摘　要: 目的　建立银杏叶药材、中间体及其注射剂中间体的指纹图谱。 方法　以芦丁为内标物 ,采用 HPLC法分
析银杏黄酮苷。结果　银杏叶药材、中间体及注射剂的指纹图谱有较好的相关性 ,所有共有峰的参数符合国家药品监
督管理局关于有关中药注射剂的技术要求。 结论　本研究将有助于银杏叶药材的标准化种植及其制剂的质量控制。
关键词: 银杏叶 ;注射剂 ;指纹图谱 ;高效液相色谱法
中图分类号: R286. 02; R283. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0216 03
Studies on fingerprint of GINKGO LEAVES INJECTION
YOU Song
1 , W ANG Liang
1 , JIAN G Ya-hong
1 , JIA Xian
1 , YAN G Hua-feng
1 , YAO Xin-sheng
1
( 1. Depa rtment o f Biopharmacy , Shenyang Pharmaceutica l Univ er sity , Shenyang Liaoning 110016; China;
2. Libao Biopharmaceutica l Com pany o f Lizhu Group, Zhuhai Guangdong 519020, China)
Abstract: Object　 To set up the fing erprints of Ginkgo leav es, i ts ex t ract and injection so as to con-
trol quali ty o f the injection. Methods　 HPLC with UV detecto r w as used to analyze the pat terns of the o-
riginal flavone g lycosides and rutin w as used as internal standard compound. Results　 The fingerprints of
Ginkgo leav es, i ts ex t ract and injection w ere set up. Furthermore, the fingerprints of them show ed an ex-
cellent correlation, and all the pa rameters of the main co-peaks meet the requirements for SDA s technical
regula tions on the injection of TCM. Conclusion　 The studies a re useful fo r the quality cont ro l of Ginkgo
leav es and its injection.
Key words: Ginkgo leav es; injection; fingerprint; HPLC
　　中药现代化的重要任务之一就是要建立一套客
观的质量控制方法用以规范中药生产。中药注射剂
多数为多组分制剂 ,其中未知非定量成分占有相当
比例。 为了确保中药注射剂的质量稳定和临床用药
的安全 ,国家药品监督管理局拟首先在中药注射剂
质量标准中引入指纹图谱技术要求。 近年有关银杏
叶及用其提取物的制剂的研究很多 ,特别是在提取
工艺和含量测定方面。 目前公认的银杏叶有效成分
黄酮苷和萜类内酯 ,大多数上市的银杏叶口服制剂
以黄酮苷作为含量测定指标 ,方法多以 HPLC法间
接测定黄酮苷元 (槲皮素、山奈酚和异鼠李素 )为主。
在大部分尚不清楚的情况下间接测定总成分含量还
不能真正反映原药材和制剂质量的稳定 ,特别是中
药注射剂。为此 ,我们在多年对银杏叶化学成分和提
取工艺研究的基础上 [1, 2 ] ,用 HPLC法研究了银杏
叶药材、注射剂中间体和注射剂三者的指纹图谱。这
将有助于银杏叶药材的标准化种植 ,银杏叶提取物
及其制剂的质量控制。
1　材料和方法
1. 1　药品: 银杏科银杏属银杏秋季绿叶 ,产于江苏
省邳州铁富镇银杏叶种植园 ,采于 1999年 8月 20
日到 9月 20日 , 80℃以下风干 ,按《中华人民共和
国药典》规定中药材取样法取样 12批 ;银杏叶注射
剂及其中间体为本课题组小试产品。
1. 2　供试品的制备:称取干银杏叶 50 g放入圆底
烧瓶中 ,加 10倍量 50%乙醇 ,水浴回流 2 h,吸出
5 mL回流液用甲醇定容至 10 mL容量瓶中 ,再吸取
5 mL,过 TOYOPAK ODS柱 ,滤液即为液相样品 ;
取银杏叶注射剂及其中间体适量用甲醇溶解备用。
称取参照物芦丁 5 mg ,用甲醇溶解并定容于 10 mL
容量瓶中 ,再从中吸取 1 mL用甲醇定容至 10 mL
容量瓶中 ,备用。
1. 3　仪器、试剂与色谱条件: 日本岛津 LC-10AT
高效液相色谱仪 , SPD-10A紫外检测仪 ;乙腈为色
·216· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2000-08-15基金项目:国家科技攻关项目 ( 94-Z-01-1)作者简介:游　松 ( 1963-) ,男 ,沈阳人 ,博士学位 ,沈阳药科大学教授、博士生导师 , 1996年赴日本东京大学留学 ,主要研究领域为二次代谢产物生合成和生物转化 ,中药和天然药物的标准化。 Tel: 024-23843711转 3942
谱纯 ,磷酸为分析纯 ;色谱柱: Diamonsi l C18 ( 5μm,
4. 6 mm× 250 mm);流动相: A(乙腈 ) -B(酸水 ,水 -
磷酸= 100∶ 1)进行梯度洗脱 , 85% ～ 83% B( 0～ 30
min) , 83% ～ 80% B( 30～ 40 min) , 80%～ 75% B
( 40～ 60 min) , 75%～ 85% B( 60～ 80 min) ;流速:
1 mL /min;进样量: 20μL;检测波长: UV 360 nm。
2　指纹图谱及各项技术参数
2. 1　指纹图谱: 银杏叶药材、注射剂中间体和注射
剂指纹图谱见图 1。 原药材成分比中间体和制剂更
复杂 ,可以看到有 40多个峰。
a-内标物芦丁
A-药材　 B-注射剂中间体　 C-注射剂
图 1　银杏叶指纹图谱
2. 2　共有指纹峰的标定、共有指纹峰面积比值和非
共有峰面积:共有指纹峰的标定是根据对 12批样品
测定基础上进行的。 在此首先阐明对共有峰标定的
理解:由于中药注射液的制备都是经过对原料药多
步纯化制得的 ,因此原料药的指纹图与中间体和制
剂的存在很大的差别 (图 1)。为了更好地阐明它们
之间的相关性 ,制定原药材指纹图应突出其制剂中
保留成分的分离 ,在对共有峰峰面积比值计算时应
重点参考中间体指纹图谱中峰的构成。只有这样 ,才
能尽可能排除原药材供试品指纹图谱中杂质峰对计
算共有指纹峰技术参数的影响。根据指纹图谱的技
术要求和以上的考虑 ,将原料药材的指纹图谱峰分
为共有指纹区 ( 15 min以后 )和杂质区 ( 15 min以
前 )进行统计 ,从 12批样品图谱的共有指纹区可以
选出 20个共有峰 ,其中 6号峰为芦丁 ,应当说明的
是:杂质区大多数峰也为原药材共有峰 ,其中最大峰
的面积也小于 5% 。根据对 12批样品测定的数据 ,
以 6号峰为参照计算共有峰面积比。 12批样品非共
有峰峰面积比均小于 5% ,共有峰的编号及有关参
数见表 1。
3　方法学考察
3. 1　稳定性试验:取一新制备供试品溶液 ,连续测
定 6次 ,每次间隔 2 h,供试品 0, 2, 4, 6, 8和 10 h的
测定结果表明本方法稳定。
3. 2　精密度试验:取一新制备供试品溶液 ,连续测
表 1　银杏叶药材、注射剂中间体和注射剂指纹图谱的共有峰及其参数 (n= 3)
共有峰编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
相对保留时间 0. 54 0. 62 0. 67 0. 71 0. 78 1. 00 1. 04 1. 09 1. 18 1. 41
相对峰面积值 0. 43 0. 28 0. 14 0. 08 0. 81 1. 00 0. 08 0. 54 0. 18 1. 03
　　　续表 1
共有峰编号 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
相对保留时间 1. 47 1. 54 1. 57 1. 64 1. 70 1. 76 1. 84 1. 91 1. 98 2. 23
相对峰面积值 0. 96 0. 04 0. 32 0. 07 0. 57 0. 03 0. 10 0. 12 0. 80 0. 59
　　　　注: 6号峰为参照物芦丁的峰
定 6次 ,对测定结果中各峰的相对保留时间和峰面
积百分比进行了比较 ,占峰面积百分比 5%以上峰
的 RSD < 3%。
3. 3　重现性试验: 取同一供试品 ,同法制备 6个供
试品溶液进行测定 ,对测定结果中各峰的相对保留
时间和峰面积百分比进行了比较 ,占峰面积百分比
5%以上峰的 RSD < 3%。
4　讨论
4. 1　供试品的制备:供试品的制备是依据银杏叶标
准提取物提取工艺中确定的方法进行的。 为了最大
程度的保留原有成分 ,并保证分析的顺利进行 ,在样
品预处理时只使用了 TOYO PAK ODS柱除去脂溶
性杂质。
4. 2　参照物的确定: 银杏叶中有两类有效成分 (黄
酮苷类化合物和萜类内酯 ) ,它们的含量分别在含量
测定项下进行了测定和规定。 鉴于指纹图谱的目的
是甄别原料和药品的真伪 ,为此 ,我们认为选定银杏
叶中种类较多的黄酮苷类化合物 [ 3] ( 20种以上 )为
检验对象能够起到指纹鉴别的作用。芦丁是银杏叶
中含有的一种黄酮苷类化合物 ,也是中国药品生物
制品检定所确认的黄酮苷类标准物质 ,因此被选定
为本指纹图谱技术要求的参照物。
·217·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
4. 3　检测波长选定 UV 360 nm为大多数黄酮苷类
化合物的特征波长 ,也是芦丁的长波最大吸收波长。
参考文献:
[1 ]　游　松 ,姚新生 ,崔承彬 ,等 .银杏叶中银杏内酯的分离与结构
测定 [ J] .中国药物化学杂志 , 1995, 5( 4): 258-265.
[2 ]　游　松 ,姚新生 ,崔承彬 ,等 . 银杏叶中金松双黄酮的核磁共振
谱分析 [ J] .沈阳药学院学报 , 1991, 8( 2): 124-128.
[3 ]　 Sticher O. Quali ty of Gin kgo p reparations [ J] . Plan ta Medica,
1993, 59: 2.
黄芩苷稳定性研究
于波涛 ,张志荣* ,刘文胜 ,王　平* * ,杨　婷* * *
(四川大学华西药学院 ,四川 成都　 610041)
摘　要: 目的　研究黄芩苷在不同条件下的稳定性。方法　采用经典恒温法考察黄芩苷在不同 p H值水溶液、甲醇、
乙醇和氯仿以及小鼠肺匀浆、小鼠肝匀浆、小鼠血浆和小牛血清中的稳定性。 结果　黄芩苷在酸性环境中稳定 ,在
碱性环境中不稳定 ,在上述有机溶剂中稳定 ,而在上述生物样品中不稳定。 结论　黄芩苷在不同条件下稳定性不
同 ,在实际应用中应加以考虑。
关键词: 黄芩苷 ;稳定性 ;反相高效液相色谱法 ;经典恒温法
中图分类号: R286. 01　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 03 0218 03
Studies on stability of Baicalin
YU Bo-tao, ZHANG Zhi-rong, LIU Wen-sheng , W ANG Ping , Y ANG Ting
( Huaxi School of Pha rmacy , Sichuan Univ e rsity , Chengdu Sichuan 610041, China)
Abstract: Object　 To investiga te the stability of baicalin in dif ferent condi tions. Methods　 The sta-
bi li ty of baicalin in w ater wi th di fferent pH values, methanol , ethanol, chlo rofo rm and in the mouse lung
homogenate, mouse liv er homogenate, mouse plasma and bovine serum was investig ated by the classical
isothermal method. Results　 The experiments show ed the baicalin w as stable in acidic w ater and these o r-
ganic solutions, but unstable in ba sic w ater and these bio logical media. Conclusion　 The stabi li ty of
baicalin in dif ferent media w as dif ferent , w hich should be considered in practice.
Key words: baicalin; stability; RP-HPLC; classical isoth erma l method
　　黄芩苷 ( baicalin)为黄酮类化合物 ,主要来源于
唇形科植物黄芩 Scutel laria baicalensis Georgi ,具
有抗菌、抗病毒、抗炎和抗过敏的药理作用。根据黄
芩苷的性质 [1 ] ,本研究设计并考察其在水溶液、有机
溶剂和生物样品中的稳定性 ,希望能为原料药的提
取、制剂的生产和体内外实验条件的筛选提供科学
依据。 目前尚未见这方面的报道。
1　实验材料与色谱条件
1. 1　仪器: Shimadzu 10ATVP型高效液相色谱仪 ,
CLASS-V P 5. 0色谱数据处理工作站 ,日本岛津 ;
Sar to rius BP211D型电子分析天平 ,德国赛多利斯 ;
T GL-16G型台式高速离心机 ,上海医用分析仪器
厂 ; QL-901型旋涡混合器 ,江苏海门麒麟医用仪器
厂 ; p HS-25型 pH计 ,上海精科雷磁。
1. 2　样品:黄芩苷原料 (成都华福来制药厂提供 ) ;
黄芩苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号为
0175-9909)。
1. 3　试剂:甲醇、乙醇、氯仿均为色谱纯 ;磷酸盐缓
冲液 ( A液:取磷酸 8. 3 mL加水至 500 mL; B液: 取
Na2HPO4 71. 63 g ,加水使溶解成 1 000 m L;取 A、 B
不同体积精确配制成 pH值分别为 2. 0, 3. 0, 4. 0,
5. 0, 6. 0, 7. 0, 7. 4, 8. 0的溶液 ) ;磷酸二氢钠缓冲液
( PBS) (用磷酸调 pH值为 4. 0)。
1. 4　材料:昆明种小鼠 (华西医科大学动物实验中心
提供 )肺、肝匀浆 (取健康小鼠肺、肝组织 ,置匀浆器
中 ,加 2倍重量的 pH= 4. 0的 PBS匀浆即得 ) ;昆明
种小鼠血浆 (取健康小鼠血液于肝素管中 ,振荡 ,
10 000 r /min离心 10 min,取上清液即得 ) ;新生小
·218· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 3期
收稿日期: 2001-08-20基金项目:国家杰出青年科学基金资助项目 ( 39925039)作者简介:于波涛 ( 1965-) ,男 ,江苏涟水人 ,博士 ,主要从事靶向制剂的研究 ,近年来在核心期刊上发表论文 10余篇。
Tel: ( 028) 5503808　 E-mai l: yub t@ 263. net
* 联系人　　* * 成都中医药大学药学院 2001届毕业生　　* * * 本校 2001届毕业生