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红花黄色素 A在大鼠体内的药动学研究
刘月庆 ,李　康 ,毕开顺
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳　 110016)
摘　要: 目的　研究红花黄色素 A在大鼠体内的药动学。方法　建立 RP-HPLC法定量测定大鼠血浆中红花黄色
素 A含量。色谱条件:色谱柱为 Hypersil ODS2柱 ( 200 mm× 4. 6 mm, 5μm) ;流动相为甲醇 -0. 2% 乙酸水溶液
( 24∶ 76);流速为 0. 8 m L /min;核黄素为内标 ;检测波长为 410 nm。健康大鼠禁食 24 h后 ,尾 iv红花黄色素 A生
理盐水溶液 ,测定不同时间的血药浓度。用 3P87药动学程序对血药浓度 -时间数据进行拟合。结果　大鼠 iv红花
黄色素 A后 ,其主要药动学参数为: Vc ( 0. 30± 0. 04) L /kg ,CL ( 1. 12± 0. 33) m L /mim, Ke ( 0. 91± 0. 19) h- 1 , t1 /2
( 0. 76± 0. 10) h ,曲线下面积 AUC ( 24. 97± 4. 83) (μg· h) /m L。 结论　红花黄色素 A在大鼠体内呈一室开放模
型 ,进入体内迅速分布 ,代谢消除也较快。
关键词: 红花黄色素 A; 反相高效液相色谱 ; 药动学
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 08 0000 00
Pharmacokinetics of safflower yellow A in rats in vivo
LIU Yue-qing, LI Kang , BI Kai-shun
( School of Pha rmacy , Shenyang Pharmaceutica l Univ er sity , Sh enyang 110016, China)
Abstract: Object　 To study the pharmacokinetics o f saff low er y ellow A, a major ingredient in the
crude drug of Carthamus tinctorius L. , in rats in vivo. Methods　 RP-HPLC method was set up used to de-
termine the content of saff low er yellow A in plasma o f ra t. The ch romatog raphic condi tion included Hyper-
si l ODS2 co lumn ( 200 mm× 4. 6 mm, 5μm); the mobi le pha se consisting of methanol-0. 2% acetic acid
( 24∶ 76) ; the flow ra te at 0. 8 mL /min; the detectiv e wavelength a t 410 nm. Ribof lavin w as used as inter-
nal standa rd. Saf f low er yellow A was injected into the rats through caudal v ein, and i ts concentra tions at
di fferent time w ere determined in heal thy ra t af ter 24 h fasting. The da ta w ere processed with the so ftw are
3P87. Results　 The prima ry pharmacokinetic pa rameters w ere: Vc ( 0. 30± 0. 04) L /kg , CL ( 1. 12± 0. 33)
m L /min, Ke ( 0. 91± 0. 19) h- 1 , t1 /2 ( 0. 76± 0. 10) h, AUC ( 24. 97± 4. 83) (μg· h ) /mL, respectiv ely in iv
saff low er yellow A to the ra ts. Conclusion　 The saf f low er yellow A in ra ts is fi ted to one-compar tment
model, and it is dist ributed and eliminated quickly.
Key words: saff low er yellow A; RP-HPLC; pharmacokinetics
　　红花系菊科红花属红花 Carthamus tinctorius
L. 的干燥花 ,是活血化瘀的传统中药。其活血通经、
祛瘀止痛功效在中药中具有一定的代表性。在现代
医学中是预防和治疗冠心病、心肌梗死和脑血栓等
中老年疾病的重要中药。研究表明 ,红花中起活血化
瘀作用的主要成分是红花黄色素 [ 1, 2]。红花黄色素的
·725·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-11-29作者简介:刘月庆 ( 1973— ) ,男 ,安徽怀宁人 ,沈阳药科大学药物分析专业 2000级研究生 ,研究方向:中药质量标准化研究。
* 通讯作者　 Tel: ( 024) 2384371-3363　 E-mail: ksbi@ mai l. sy. ln. cn
主要成分为红花黄色素 A ( saf f low er yellow
A)
[3, 4 ]。近年来 ,国内外学者曾用分光光度法对红花
黄色素在小鼠体内的分布特征和家兔体内药动学进
行探讨 [5, 6 ]。红花黄色素 A的药动学研究未见报道。
本实验建立了 RP-HPLC法测定大鼠血浆中红花黄
色素 A的浓度 ,并对红花黄色素 A在大鼠体内的
变化过程及特征进行初步探讨。
1　仪器与材料
1. 1　仪器: 岛津 LC-10AD型高效液相色谱仪 ;
SPD-10A型紫外检测器 ; C-R6A色谱积分记录仪 ;
BP210S电子天平 ; 800型离心沉淀器 ; CAY-1型液
体快速混合器。
1. 2　材料: 红花黄色素 A对照品从红花中分离提
纯得到 ,经核磁、质谱鉴定为红花黄色素 A,纯度>
98. 0% 。甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,乙酸为分析纯 ,
内标物核黄素为分析纯。
1. 3　动物: 健康 Wista r大鼠 ,雌雄兼用 ,体重
225～ 270 g,沈阳药科大学实验动物中心提供。
1. 4　溶液制备
1. 4. 1　内标溶液的制备:精密称取核黄素 7. 2 mg ,
置 50 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度。 精密
吸取 10 mL,置 50 mL量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,
即得内标物溶液。
1. 4. 2　红花黄色素 A系列对照品溶液的制备:精
密称取红花黄色素 A对照品 8. 9 mg,置 50 mL量
瓶中 ,加 60% 甲醇溶解并稀释至刻度。再分别精密
吸取 0. 25, 0. 5, 1, 2. 5, 8和 20 mL,置 50 mL量瓶
中 ,加 60% 甲醇稀释至刻度 ,即得浓度分别为
0. 89, 1. 78, 3. 56, 8. 90, 28. 48, 71. 20μg /mL 的红
花黄色素 A系列对照品溶液。
1. 4. 3　红花黄色素 A注射剂的配制: 精密称取红
花黄色素 A适量 ,加生理盐水溶解 ,配成浓度为
0. 84 mg /mL红花黄色素 A生理盐水溶液。
2　方法
2. 1　给药方案:大鼠禁食 24 h (不禁水 ) ,尾 iv红
花黄色素 A注射液 ,剂量 6. 72 mg /kg (剂量选择
依据:以正常人的用量换算成大鼠的给药剂量 )。
2. 2　采样时间: 大鼠 iv后 ,分别在 5, 10, 20, 50,
90, 150和 240 min,眼眶取血 0. 6 mL, 4 000 r /min
离心 10 min,取上层血清 0. 3 mL,冷冻保存 ,待测。
2. 3　色谱条件: 色谱柱: Htypersi l ODS2柱 ( 200
mm× 4. 6 mm, 5μm) ;流动相: 甲醇-0. 2% 乙酸水
溶液 ( 24∶ 76) ;流速: 0. 8 mL /min;检测波长: 410
nm;柱温: 25℃ ;内标物:核黄素。
2. 4　血浆样品处理: 精密吸取肝素抗凝血浆 200
μL于 10 mL尖底离心管中加入 60% 甲醇 100
μL,内标溶液 50μL和甲醇 0. 5 mL,涡旋 2 min,
4 000 r /min离心 10 min,精密吸取上清液 0. 5
mL,置另一 10 mL尖底离心管中 ,于 60℃ 水浴中
氮气吹干 ,残渣加水 200μL,超声溶解 30 s,涡旋混
合 1 min,取 20μL,注入色谱仪。
2. 5　系统适用性试验: 在上述色谱条件下 ,红花黄
色素 A和内标物核黄素分离度大于 2,理论塔板数
按红花黄色素 A计算大于 4 500。
2. 6　方法选择性试验: 通过大鼠的空白血浆色谱
图、空白血浆中加入红花黄色素 A和内标物核黄素
后得到的色谱图和给药后大鼠血浆色谱图进行比
较 ,在选定的色谱条件下 ,血浆内源性物质对红花黄
色素 A和内标物核黄素无干扰。 见图 1。
1-红花黄色素 A　 2-内标物
1-saf fl ower yellow A　 2-in ternal s tandard
A-空白血浆　 B-空白血浆+ 红花黄色素 A+ 内标物　 C-大鼠血浆
A-blank plasma　 B-blank plasma+ saf f low er yel low A+
in ternal s tandard　 C-plasma sample of rat s
图 1　大鼠血浆中红花黄色素 A的高效液相色谱图
Fig. 1　 HPLC chromatogram of saff lower
yellow A in rat plasma
2. 7　标准曲线的建立:取大鼠空白血浆 200μL,红
花黄色素 A系列对照品溶液各 100μL,配制成
0. 45, 0. 89, 1. 78, 4. 45, 14. 24, 35. 60μg /mL的对
照品溶液 ,除不加 60% 甲醇外 ,其余按“血浆样品
处理”项下依法操作 ,建立标准曲线。上述系列对照
品溶液的每个浓度平行进行 6个样品的分析 ,重复
进行 3个分析批。分别将红花黄色素 A与内标物核
黄素峰面积比对待测物浓度进行加权回归计算 ,即
得标准曲线方程。本法在 0. 45～ 35. 60μg /m L线性
关系良好 ,线性回归方程 Y= 0. 218 1 X+ 0. 024 7,
r= 0. 999 6。
2. 8　准确度与精密度试验: 取空白血浆 ,按 2. 7项
·726· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
方法操作 ,分别制成高、中、低 3个浓度 ( 0. 89,
4. 45, 35. 60μg /m L)的质量监控样品 ,每个浓度 6
份 ,依法测定。重复 3个分析批 ,并与标准曲线同批
进行测定 ,以当日的标准曲线计算样品浓度 ,求得方
法的准确度与精密度 ,结果见表 1。
表 1　红花黄色素 A在血浆中精密度和准确度试验结果
Table 1　 Precision and accuracy for determination
of saff lower yellow A in plasma
加药浓度
/(μg· mL- 1)
测定浓度
/ (μg· mL- 1 )
相对误差
/%
日　内
R SD /%
日　间
R SD /%
　　　 0. 89 　　　 0. 86 　 - 3. 4 6. 5 8. 5
4. 45 4. 37 - 1. 9 5. 4 6. 1
35. 60 35. 94 1. 0 3. 3 4. 0
2. 9　回收率试验:取 2. 8项中质量监控样品的色谱
图中红花黄色素 A与内标物核黄素的峰面积 ,与相
同浓度未经处理的标准溶液色谱图中红花黄色素
A与内标物核黄素峰面积相比较 ,求得绝对回收
率 ,见表 2。
表 2　红花黄色素 A在血浆中提取回收率试验结果
Table 2　 Extract recovery of saf f lower yellow A in plasma
组　份 加药浓度 /(μg· mL- 1 ) 回收率 /% RSD /%
红花黄色素 A　　　 0. 89 　　 78. 4 9. 6
4. 45 79. 6 2. 9
35. 60 80. 5 3. 2
3　结果
　　实验中所得红花黄色素 A在大鼠体内的血药
浓度 -时间曲线 ,见图 2。用 3P87药动学程序对血药
浓度 -时间数据进行拟合 ,表明大鼠在尾 iv红花黄
色素 A后 ,其血药浓度随时间变化符合一室开放模
型 ,主要药动学参数为: Vc ( 0. 30± 0. 04) L /kg , CL
( 1. 12± 0. 33) mL /min, Ke ( 0. 91± 0. 19) h- 1 , t 1 /2
( 0. 76± 0. 10) h,曲线下面积 AUC ( 24. 97± 4. 83)
(μg· h) /m L。
4　讨论
4. 1　红花黄色素 A在大鼠体内呈一室开放模型 ,
进入体内迅速分布 ,代谢消除也比较快 ,其生物半衰
期为 45 min。
4. 2　红花黄色素 A的极性大 ,在甲醇中溶解度较
小 ,为兼顾提高沉淀蛋白效率 ,故选用 60% 甲醇配
图 2　红花黄色素 A在大鼠体内的血药浓度-时间曲线
Fig. 2　 Blood concentration— time curve
of saf flower yellow A in rats in vivo
制标准溶液。另外 ,笔者比较了乙醇、乙腈、丙酮、甲
醇等溶剂沉淀蛋白的效果。发现乙醇、丙酮处理样
品 ,回收率低于 75% ;乙腈与甲醇效果接近 ,从成本
及毒性方面考虑 ,选用甲醇。
4. 3　本方法准确、专属性强、简单易行。样品处理直
接用甲醇沉淀蛋白 ,不需分离提取。进样前溶解样品
的溶剂对红花黄色素 A的峰形有较大影响 ,用甲醇
溶解样品 ,色谱峰前延变宽 ,用流动相溶解样品也有
一定影响 ,用水溶解则峰形较好 ,其原因可能是红花
黄色素 A在甲醇溶液中与甲醇生成缀合物 ,从而影
响峰形。
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热烈庆祝《中草药》杂志
荣获第 2届国家期刊奖
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