全 文 ：心脑通保护血管内皮细胞损伤的实验研究
梁中琴 1 ,朱　益 1 ,顾振纶 1 ,范盘生 1 ,周文轩 2 ,郭次仪 2
( 1. 苏州大学医学院 药理教研室、苏州中药研究所 ,江苏 苏州　 215007; 2. 香港保健协会 ,香港 )
摘　要:目的　研究心脑通对血管内皮细胞的保护作用。方法　体外培养人脐静脉内皮细胞 ( HUV EC) ,缺氧造成
内皮细胞损伤 ,通过放免法和比色法测定培养上清液中 ET、 NO水平。结果　 HUV EC缺氧 48 h后 , NO含量明显
下降 ,而 ET含量增加 ,不同浓度心脑通 ( 0. 25～ 2. 0 g /L )与 HUV EC预孵 48 h后 ,对缺氧造成的上述变化具明
显影响 ,用药后 NO含量增加 , ET含量下降。 结论　心脑通对血管内皮细胞具有明显的保护作用。
关键词: 心脑通 ;内皮细胞 ;内皮素 ;一氧化氮
中图分类号: R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 11 1006 03
Experimental study on protective effect of XINNAOTONG
on vascular endothelial cell damage
LIANG Zhong-qin
1 , ZHU Yi
1 , GU Zhen-lun
1 , FAN Pan-sheng
1 , ZHO U Wen-xuan
2 , GUO Ci-yi
2
( 1. Depa rtment o f Pharmacolog y, Medica l Co llege o f Suzhou Univ er sity , Suzhou 215007, China;
2. Hong Kong Healthca re Association, Hong Kong, China )
Abstract: Object　 To study the protectiv e ef fect of X INN AO TONG on vascular endothelial cell.
Methods　 Human umbilical v ein endo thelial cel ls ( HUV EC) w ere cultured in vi tro and thei r damages w ere
induced by hypoxia. Radioimmunoa ssay and co lorinerric methods w ere used respectiv ely to determine the
ef fect of ET and NO levels. Results　 HUV EC hypoxia in 48 h, NO content decreased significantly w hi le
ET content increased, 48 h pretreatment of XIN N AOTONG a t di fferent concentrations ( 0. 25-2. 0 g /L) in
HUV EC af fected the above-mentioned changes, NO content increased while ET decreased. Conclusion　
X INN AO TONG has the pro tectiv e effect on vascula r endothelial cell damage.
Key words: X INN AO TONG; edothelial cell; endo thelin; NO
　　心脑通系中药丹参 Salvia milt iorrhiza Bge.、
山楂 Crataegus pinnati tida Bge. 和银杏叶 Ginkgo
biloba L. 经科学提取后 ,按一定比例混合组成的纯
中药制剂 ,主要用于缺血性心脑血管疾病。实验研究
证实 ,心脑通对实验性脑缺血具有显著的保护作用 ,
其机制与抗自由基和激活纤溶系统有关 [1 ];并可抑
制血小板聚集、抑制内皮细胞和血小板表达粘附分
子 [2 ]。但对内皮素 ( endothelin-1, ET-1)和一氧化
氮 ( ni tric o xide, NO )的影响未见报道。 ET-1和
NO是一对效应相反的血管活性介质 [ 3, 4] , ET是由
血管内皮细胞 ( V EC)产生的一种作用强烈而持久
的血管收缩肽 ,是迄今所知体内最强的血管收缩因
子。 NO是细胞-细胞间信息传递的主要调节因子 ,
作为第二信使和神经递质在循环系统中的作用主要
是调节血管张力 ,使血管平滑肌松驰 ,引起血管扩
张 ,血压下降 ,并可抑制 ET生成和释放 ,被认为是
机体内源性 ET拮抗剂 [5, 6 ]。二者对血管舒缩效应在
血栓栓塞性疾病的发病中具有重要作用。从中药中
寻找保护血管内皮、抑制 ET缩血管效应的药物 ,是
研究抗血栓药物的方向。 本文观察了心脑通对培养
的脐静脉内皮细胞 ET和 NO水平的影响 ,旨在探
讨心脑通对血管内皮细胞的保护作用。
1　材料
1. 1　药物和试剂:心脑通系香港百草堂有限公司产
品 ,淡褐粉末 , 0. 1 g溶于 10 mL RPM I1640培养液
中 ,经无菌过滤后置冰箱保存 ; 125 I-ET-1放免测定
试剂盒、NO代谢产物硝酸盐测定试剂盒由北京东
亚免疫技术所提供。
1. 2　仪器: 721型分光光度计 ,上海第三分析仪器
厂产品 ; SN-628B型放免 γ-计数器 ,上海核福光电
仪器有限公司产品。
2　方法
·1006· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
收稿日期: 2002-04-07基金项目:国家自然科学基金资助课题 ( 39870945)作者简介:梁中琴 ( 1954-) ,女 ,山东福山人 ,教授 ,硕士 ,毕业于原苏州医学院 ,现任苏州大学医学院药理教研室主任 ,硕士生导师 ,主要从事中药抗肿瘤及免疫调节作用的研究。 Tel: ( 0512) 65125191
2. 1　内皮细胞培养:人脐静脉内皮细胞 ( HUV EC)
按 Jaf fa方法处理 [7 ]。 细胞用含 10% 小牛血清的
RPM I1640培养至融合单层后供实验用。
2. 2　内皮细胞缺氧模型的制备及实验分组:融合单
层 HUV EC,置密闭容器内充纯 N2 , 20 min /d,造成
缺氧。 缺氧密闭容器置 37℃ 生化培养箱。实验分
为正常对照组 ,单纯缺氧组 ,心脑通缺氧组 ,心脑通
( 0. 25～ 20 g /L)于缺氧前加入到培养液中 ,在缺氧
条件下 , 37℃ 孵育 48 h。
2. 3　 ET-1和 NO的测定:细胞培养液经离心取上
清液 ,上清液用 PBS 1∶ 10稀释后 ,按试剂盒说明
书在 γ-计数测定仪上测定 ET-1的含量 ,同时取上
清液按 NO测定试剂盒要求操作测 NO含量。
3　结果
3. 1　心脑通对缺氧内皮细胞培养上清液中 ET-1
含量的影响: 如表 1所示 ,单纯缺氧条件下 , HU-
V EC培养上清液中 ET-1含量与正常对照组相比
含量明显增高 ( P < 0. 01) ,提示缺氧可刺激 HU-
V EC分泌 ET。心脑通 0. 25, 0. 50, 1. 0, 2. 0 g /L可
不同程度地抑制 HUV EC产生 ET,其中 0. 50, 1. 0
g /L组抑制作用最明显 ,与单纯缺氧组相比差异显
著 ( P < 0. 05)。当剂量增大为 2. 0 g /L时 ,其抑制作
用虽有所减弱 ,但仍低于单纯缺氧组。
表 1　心脑通对 HUVEC培养上清液中
ET-1含量的影响 (x± s, n= 4)
组　别 剂　量 ( g /L) E T-1 ( pg /m L)
正常对照 - 　　 31. 26± 78. 14
单纯缺氧 - 85. 70± 11. 10△
心脑通　 0. 25 75. 00± 22. 76
0. 50 60. 22± 8. 08*
1. 00 66. 42± 9. 17*
2. 00 71. 35± 21. 31
　　与单纯缺氧组比较: * P < 0. 05;与正常对照组比较: △ P < 0. 05
3. 2　心脑通对缺氧 HUV EC培养上清液中 NO含
量的影响:见表 2。缺氧 48 h后 HUV EC上清液中
NO含量降低 ,但预先加入心脑通 0. 25, 0. 50, 1. 0,
2. 0 g /L共孵 ,可以剂量依赖性地增加 HUV EC培
养上清中 NO含量 ,其中 1. 0, 2. 0 g /L组与单纯缺
氧组相比差异显著 ( P < 0. 05)。提示心脑通可促进
缺氧内皮细胞分泌 NO。
4　讨论
　　内皮细胞 ( EC)是血管壁与血液之间的分界细
胞 ,它不仅在维持血液流动状态方面发挥作用 ,而且
还是机体重要的代谢和内分泌器官之一。 EC可释
放缩血管物质 ET和舒血管物质 NO,二者共同调
节血管的张力。在病理条件下 ,内皮功能紊乱介导血
表 2　心脑通对 HUVEC培养上清液中
NO含量的影响 (x± s, n= 4)
组　别 剂　量 ( g /L) NO ( nmol /L)　　
正常对照 - 　　 18. 60± 4. 90
单纯缺氧 - 13. 90± 3. 22
心脑通　 0. 25 15. 57± 4. 61
0. 50 19. 60± 4. 34
1. 00 35. 42± 6. 62*
2. 00 39. 22± 7. 08*
　　与单纯缺氧组比较: * P < 0. 05
管收缩 ,血小板、单核细胞粘附和平滑肌细胞
( SMC)增殖 ,最终引起动脉粥样硬化 ( AS) 性血管
疾病 [8 ]。 研究显示 ,内皮功能紊乱或丧失 ,可削弱
NO的释放 ,而 AS发生中最早出现的异常之一是
血管 NO活性降低 ,内皮依赖血管松弛减弱 [9 ] ,高胆
固醇或心脏缺血 /再灌注引起 NO释放减少 ,且与
PMN粘附增多有关 ,而给予 NO供体 ,则可有效地
预防 PMN粘附 ,明显改善血管功能 [ 10]。缺氧对血
管有许多不同的作用 ,有报道指出 ,缺氧可引起
HUV EC减少生成 NO,降低活性 NO释放 [11 ] ,还可
刺激 ET-1的基因表达 [12 ] ,大鼠冠脉结扎后血浆
ET-1浓度增加 ,心肌缺血再灌注在灌注期 ET-1释
放也有明显增加 [11 ]。其血 ET-1浓度的升高不仅使
循环血液粘滞度升高 ,而且还可能激活血小板及某
些凝血因子从而有利于血栓形成。
本实验中 ,采用体外培养 HUV EC,观察心脑通
对正常培养和缺氧状态下培养的 HUV EC表达
ET-1和 NO的影响 ,结果显示 ,在缺氧状态下 ,可
显著增加 HUV EC表达 ET-1,同时降低 NO的表
达。加入不同浓度的心脑通 ,与 HUV EC共孵 ,在
0. 25～ 2. 0 g /L范围内可使培养上清液中 ET-1含
量下降 ,而 NO含量增加 ,提示其对内皮细胞具有
明显的保护作用 ,可能是心脑通抗血栓形成的又一
个作用机制 ,表明心脑通有益于心脑血管性疾病及
硬皮病的防治。
参考文献:
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血竭总黄酮对血小板聚集、血栓形成及心肌缺血的影响
马建建 1 ,宋　艳 1 ,贾　敏 2 ,李长龄 1
( 1. 北京大学药学院 分子与细胞药理学系 ,北京　 100083; 2. 山西省大同市药品检验所 ,山西 大同　 037006)
摘　要: 目的　观察血竭总黄酮对大鼠及兔血小板聚集、血栓形成及心肌缺血的影响。 方法　采用体外血小板聚
集、大鼠体内深静脉血栓形成及结扎冠状动脉所致急性心肌缺血实验模型。结果　血竭总黄酮对体外 ADP诱导的
大鼠血小板聚集及 PAF诱导的兔血小板聚集有一定的抑制作用 ;可明显抑制大鼠实验性深静脉血栓形成及结扎
冠状动脉所致急性心肌缺血面积。 结论　血竭总黄酮具有一定的活血化瘀和抗血小板、抗血栓形成作用。
关键词: 血竭总黄酮 ;血小板聚集 ;血栓形成 ;心肌缺血 ;活血化瘀
中图分类号: R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 11 1008 03
Effect of total flavone in Sanguis Draconis on platelet aggregation,
thrombus formation and myocardial ischemia
MA Jian-jian
1
, SONG Yan
1
, JIA Min
2
, L I Chang-ling
1
( 1. Depa rtment o f Mo lecula r and Cella r Pha rmacolog y , School o f Pharmaceutica l Sciences, Peking
Univ e rsity , Beijing 100083, China; 2. Institute fo r Drug Cont ro l, Datong 037006, China)
Abstract: Object　 To investig ate the effect of to tal f lav one in Sanguis Draconis ( tFSD) on pla telet ag-
g regation, th rombus fo rmation and myocardial i schemia in rat and rabbi t. Methods　 Adopting the experi-
menta l models including in v itro pla telet agg regation in ra t and rabbi t , in vivo th rombus fo rmation in rat
internal v ein, and acute myocardial ischemia by ligating the co ronary a rtery. Results　 In v itro, t FSD
could, to a certain deg ree, inhibi t the platelet agg regation induced by ADP and PAF. Mo reover, t FSD
could markedly restrain ar ti ficial thrombus fo rmation in rat internal v ein and the area o f acute myocardial
ischemia af ter ligating the coronary ar tery. Conclusion　 tFSD has the function of promo ting blood ci rcula-
tion and remov ing blo od stasis, anti-thrombosis, together wi th platelet ag g rega tion inhibi tion.
Key words: to tal f lav one in Sanguis Draconis ( t FSD) ; pla telet ag grega tion; thrombus forma tion; my-
ocardial ischemia; promoting blood ci rculation and removing blood stasis
　　血竭为剑叶龙血树 Daemonorops cochinchinen-
sis ( Lour. ) S. C. Chen的含树脂木材的 95% 乙醇
提取物 ,是国家 1991年批准的一类新药材。具有活
血散瘀、止血、止痛、敛疮、生肌等功效。 内服主治瘀
血肿痛、闭经、痛经 ;外用主治外伤出血 ,溃疡不敛 ,
痔漏肿痛等。为了进一步探讨和提高血竭的药用价
·1008· 中草药　 Chinese Traditiona l and He rbal Drug s　 2002年第 33卷第 11期
收稿日期: 2002-05-10作者简介:李长龄 ( 1946-) ,男 ,教授 ,医学硕士 , 1982年毕业于中国协和医科大学 (中国医学科学院药物所 ) ,目前主要从事心血管药物药理研究。
* 通讯作者　 Tel: ( 010) 62091703