全 文 ：RP-HPLC 法测定槐角提取物中染料木素的含量
王剑波1, 郭　萍2, 赵小兵1, 谢艳华1Ξ
(11 第四军医大学药物研究所, 陕西 西安　710033; 21 武警四川消防总队医院 药械科, 四川 成都　610072)
摘　要: 目的　建立测定槐角提取物中染料木素含量的方法。方法　高效液相色谱法。采用L una C18柱 (250 mm ×
416 mm , 5 Λm ) , 甲醇2水 (60∶40)为流动相, 流速 110 mL öm in, 检测波长 260 nm。结果　染料木素与共存的杂质能
很好分离, 在 4012～ 201 ΛgömL 与峰面积呈线性关系, 平均回收率为 98193% , R SD 为 0181% (n= 5) , 最小检测量
为 0102 Λg。结论　该法简便、快速、准确, 适用于染料木素的含量测定。
关键词: 槐角提取物; 染料木素; 高效液相色谱
中图分类号: R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 04 0402 02
D eterm ina tion of gen iste in in F ructus Sop horae extract by RP-HPLC
W AN G J ian2bo 1, GUO P ing2, ZHAO X iao2b ing1, X IE Yan2hua1
(1. Inst itu te of M ateria M edical, Fourth M ilitary M edical U niversity, X i’an 710033, Ch ina; 2. D epartm ent
of M edicine and A pparatus, Sichuan P rovincia l F ire Contro l C rop s Ho sp ita l,
Ch inese Peop le’s A rm ed Po lice Fo rces, Chengdu 610072, Ch ina)
Key words: F ructus S op horae ex tract; gen istein; H PL C
　　染料木素为异黄酮类化合物, 具有明显防治骨
质疏松症、心血管疾病和抗肿瘤等多种药理作
用[1～ 3 ]。主要存在于豆科植物中。由于在大豆中含量
较高, 目前大多采取从大豆中提取获得染料木素的
方法。但大豆含植物蛋白和油脂太多, 得到高纯度染
料木素相当困难, 工艺复杂、成本高, 若作为药品开
发使用, 必然受到限制。
　　槐角为豆科植物槐 S op hora jap on ica L. 的果
实, 性寒、味苦、入肝经, 有清热泻火, 凉血止血的功
能。从槐角中提取染料木素早在 20 世纪 80 年代已
有研究[4, 5 ] , 但仅报道简易的分离、提纯、结晶方法和
对结果进行分析。本实验室采用特殊工艺从槐角中
提取开发染料木素, 方法简单, 收率高 (> 0154% ) ,
已申请专利并向国家食品药品监督管理局申报一类
中药新药。有关槐角提取物中染料木素的定量分析
及质量检测标准尚未见文献报道。为制定染料木素
质量控制标准, 本实验建立了R P2H PL C 法检测槐
角提取物中染料本素的方法。
1　仪器、试剂与药品
美国 Beckm an Go lden 系统高效液相色谱仪
(包括 125 高压双泵, 168 二极管阵列检测器)、
Go lden 色谱数据系统, SK250L H 超声清洗器 (上海
科导超声波仪器公司)。
染料木素对照品 (Sigm a 公司, 纯度> 98% ) , 甲
醇为色谱纯, 实验用水均为M illi2Q 去离子水, 槐角
提取物 (第四军医大学药物研究所植化研究室)。
2　方法与结果
211　色谱条件与系统适用性试验: 色谱柱: L una
C 18 柱 (250 mm ×416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇2水
(60∶40) ; 流速: 110 mL öm in; 检测波长: 260 nm ; 进
样量: 20 ΛL ; 灵敏度: 0102 AU FS; 柱温: 室温 (27
℃)。理论板数按染料木素峰计算应不低于 2 000。
212　溶液的配制
21211　对照品溶液的制备: 精密称取减压干燥至恒
重的染料木素对照品 1015 m g 于 25 mL 量瓶中, 加
甲醇 15 mL 超声处理 5 m in, 用甲醇稀释至刻度, 配
制成 402 ΛgömL 的染料木素母液。精密吸取适量于
10 mL 量瓶中, 加甲醇稀释成 120 ΛgömL 的溶液,
经 0145 Λm 滤膜滤过, 即得。
21212　供试品溶液的制备: 取槐角提取物适量, 精
密称定, 置 50 mL 量瓶中, 加甲醇 15 mL , 超声处理
5 m in, 用甲醇稀释至刻度, 制成 0112 m gömL 的供
试品溶液, 摇匀, 滤过, 取续滤液过 0145 Λm 滤膜,
即得。
·204· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 4 期 2004 年 4 月
Ξ 收稿日期: 2003206228
基金项目: 陕西省中医管理局资助课题 (2001053)
作者简介: 王剑波 (1965—) , 男, 四川宜宾人, 副主任药师, 药理学硕士, 主要从事药物分析与新药开发, 在国内刊物发表论文 20 余篇。
T el: (029) 83373752　E2m ail: yysw jb@fmm u. edu. cn
213　标准曲线和线性范围: 分别从染料木素对照品
母液中精密吸取 110, 210, 310, 410, 510 mL 于 10
mL 量瓶中, 以甲醇稀释至刻度, 摇匀, 经 0145 Λm
滤膜滤过, 依次进样 20 ΛL , 重复 3 次, 记录色谱图。
以峰面积对浓度进行线性回归, 得回归方程: A =
21678 2 C + 11022, r= 01999 9, 染料木素在 4012～
201 ΛgömL 与峰面积线性良好。染料木素的检出限
为 0102 Λg。
214　精密度试验: 精密吸取供试品溶液, 按选定的
色谱条件连续进样测定 5 次, 测定色谱峰面积, 结果
染料木素色谱峰面积的R SD 为 0171%。
215　稳定性试验: 取供试品溶液每 2 h 进样 1 次,
测定峰面积, 结果供试品溶液在 10 h 内稳定, 染料
木素峰面积的R SD 为 0136% (n= 6)。
216　回收率试验: 精密称取已知含量的样品 5 份
(含染料木素 310 m g) , 置于 50 mL 量瓶中, 分别加
入不同量的染料木素对照品 (约 310 m g) , 以适量甲
醇超声处理 5 m in, 再用甲醇定容于 50 mL 量瓶, 摇
匀, 过 0145 Λm 微孔滤膜, 进样测定, 记录色谱图。
采用外标法以峰面积计算染料木素的回收率, 结果
平均回收率为 98193% , R SD 为 0181% (n= 5)。
217　染料木素的含量测定: 分别取各供试品溶液和
对照品溶液, 各进样 20 ΛL , 记录色谱图, 按外标法以
峰面积计算, 测定样品, 结果见表 1。色谱图见图 1。
表 1　槐角提取物中染料木素的含量测定结果 (n= 3)
Table 1　Gen iste in in F ructus Sop horae extract (n= 3)
批号 染料木素ö% 批号 染料木素ö%
20001101 97. 110 20010102 99. 170
20001201 98. 435 20010106 97. 375
20001208 98. 245 20010110 99. 135
图 1　染料木素对照品(A)和槐角提取物(B)的HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram of gen iste in reference　
substance (A) and F ructus Sop horae extract (B)
3　讨论
311　提取溶剂的选择: 染料木素在一般的有机溶媒
中溶解度较差[6 ] , 而易溶于二甲基亚砜, 在甲醇、乙
醇中亦有一定的溶解度。但由于二甲基亚砜流动性
差, 对色谱柱和泵均有影响, 不宜作为溶媒。乙醇提
取率虽略高于甲醇, 但色谱峰峰形不好。甲醇作为液
相色谱测定常用的流动相配比之一, 更适合作为提
取溶液, 因此选择甲醇作为提取溶媒。
312　提取方法的比较: 在以甲醇为提取溶剂的基础
上进行提取方法的比较, 结果以峰面积计超声提
取> 静置浸泡> 热回流。故选择超声提取的方法。在
提取时间的考察上, 超声时间以峰面积计 10 m in>
20 m in> 5 m in, 可见, 以超声提取 10 m in 为佳。
313　流动相的比较: 参考有关文献[7, 8 ]中测定大豆
异黄酮的方法, 比较了甲醇2水2乙腈2磷酸 ( 23∶
59∶18∶011)、甲醇2水2甲酸 (30∶315∶6615) , 甲
醇2水 (45∶55)、甲醇2水 (60∶40)。结果发现: 流动
相在弱酸条件下, 色谱峰无明显改善, 但甲醇浓度过
高或过低, 分离效果均不理想, 按本实验建立的配
比, 样品峰保留时间适中, 峰形较好, 并可与杂质完
全分离。
314　根据本品含量测定的结果, H PL C 法可以较好
分离出染料木素的主成分峰和杂质峰, 能反映样品
的真实含量, 方法简便、准确、灵敏, 有利于药品质量
的控制。
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