全 文 ：碱性质稳定 ,水溶性好 ,一般条件不易被破坏 ,是野
罂粟全草的特有成分 ,可作为野罂粟药材的检测指
标 ,根据实验结果计算 ,野罂粟全草中野罂粟碱含量
的限量不应低于 0. 05% 。
References:
[1 ]　 Jiangsu New Medical Col lege. Dictionary of Chinese Materia
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不同来源桑白皮东莨菪内酯含量测定
孙静芸 ,周羽琪 ,李洪玉 ,章建民
(浙江省中医药研究院 ,浙江 杭州　 310007)
摘　要: 目的　研究不同来源桑白皮东莨菪内酯含量和测定方法。 方法　采用 HPLC法 ,以 MeOH-H2O-HAc
( 40∶ 60∶ 0. 25)为流动相 , 345 nm为检测波长。结果　东莨菪内酯平均回收率为 98. 88% , RSD 为 1. 91% ,线性
范围为 0. 025 6～ 0. 128μg。不同来源最高含量为 0. 017 3% ,最低含量为 0. 002%。结论　 HPLC测定法简便 ,稳定
可靠 ,重复性好 ,灵敏度高。
关键词: 桑白皮 ;东莨菪内酯 ; HPLC;含量测定
中图分类号: R282. 6　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0266 03
Determination of scopoletin inCortex Mori from different sources
SUN Jing-yun, ZHOU Yu-qi , LI Hong-yu, ZHANG Jian-min
( Zhejiang Academy of TCM , Hang zhou 310007, China)
Abstract: Object　 To study the contents and the determinating method o f scopoletin in Cortex Mori
f rom dif ferent sources. Methods　 Scopoletin w as determined by HPLC. The mobile phase was MeOH-
H2O-HAc ( 40∶ 60∶ 0. 25) . Detection w aveleng th was at 354 nm. Results　 The average recovery w as
98. 88% with RSD= 1. 91% and the linear range w as 0. 025 6— 0. 128μg. The highest content of scopo-
letin was 0. 017 3% and the lowest content w as 0. 002% from dif ferent producing a reas. Conclusion　 The
method is easy, accura te, reliable wi th good reproducibility and high sensi tiv ity.
Key words: Cortex Mori ; scopoletin; HPLC; content determination
　　桑白皮为桑科植物桑 Morus alba L. 的干燥根
皮。有关与泻肺平喘、利水消肿功效相吻合的活性成
分研究文献未见报道。我们以平喘、利尿作用为指
标 ,进行药理筛选 ,经分离、鉴定 ,其有效单体为东莨
菪内酯 ( scopoletin) , 与文献一致 [1 ]。为测定该成分
在不同来源桑白皮中的含量 ,进行了 HPLC测定方
法学的研究。
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂: 岛津 LC-10ATV P高效液相色
谱仪 ; SPD-10AV P紫外检测器 ;岛津 UV-265型紫
外分光光度仪 ; HS色谱工作站 ;色谱柱 Shim-
PackV P-ODS ( 150 mm× 4. 6 mm )。甲醇 (色谱
纯 ) ;重蒸水 ,东莨菪内酯对照品 (自制经 XRD,
M S, IR,
1
HNMR鉴定与文献一致 [1 ] ,经标定纯度为
99. 37% ) , 其余试剂均为分析纯。
1. 2　样品: 批号 A961111 (浙江昌化 )、 A970603
(湖北 )、 A980318 (四川成都 )、 B970600 (浙江嘉
兴 )、 A970601 (浙江嘉兴 )、 B970301 (浙江桐乡炉
头镇单桥村 )、 B970605 (浙江桐乡 )、 B970316 (山
东泰安南李村 )、 B970405 (江西樟树店下乡 )、
B980203 (浙江诸几 ) , 由高家鉴主任中药师鉴定均
为桑科植物桑 M. alba L.。
1. 3　含量测定
1. 3. 1　色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅
·266· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-05-18基金项目: “九五”国家重点科技攻关项目 ( 96-903-02-03)
烷键合硅胶为填充剂 ; MeO H-H2O-HAc ( 40∶ 60∶
0. 25) 为流动相 ;紫外检测波长 345 nm;理论塔板
数按东莨菪内酯峰计算 ,应不低于 5 000。
1. 3. 2　对照品溶液的制备: 精密称取东莨菪内酯
6. 4 mg , 置 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,精密量取 1 mL, 置 25 mL量瓶中 ,加甲醇
稀释到刻度 ,摇匀 ,制得每毫升含东莨菪内酯 25. 6
μg , 作为对照品溶液。
1. 3. 3　供试品溶液的制备: 取本品粉末 (过 3号
筛 )约 4 g (同时另取本品粉末测定水分 ) ,精密称
定 ,置于 500 mL具塞瓶中。精密加入 200 mL 30%
乙醇 ,称定重量 ,浸渍 24 h后 ,超声处理 (功率不少
于 150 W, 频率不少于 12 kHz) 1 h, 放至室温后 ,
称定重量 ,加 30%乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤
过 ,弃去初滤液 ,精密量取续滤液 100 m L, 置蒸发
皿中 ,挥去乙醇 ,残留液用氯仿萃取 5次 ( 20, 20,
10, 10, 10 mL) ,合并萃取液 ,挥去氯仿 ,残渣用甲醇
溶解 ,移入 5 mL容量瓶中 ,定容 ,摇匀 ,即得。
1. 3. 4　测定方法:精密吸取对照品溶液 2. 5μL与供试
品溶液 10μL,分别注入液相色谱仪,测定 ,计算 ,即得。
2　方法学考察
2. 1　样品处理条件选择: 桑白皮中东莨菪内酯提取率
的主要影响因素为超声时间、乙醇浓度、溶媒量、浸渍
时间 ,采用 L9 ( 34 )正交设计试验 ,以东莨菪内酯荧光
强度为评价指标 ,试验结果表明 ,桑白皮粉末用 50倍
30%乙醇浸 24 h、超声 1 h为最佳提取条件。
2. 2　检测波长的选择:精密称定适量东莨菪内酯对
照品 ,加甲醇溶解 ,制成浓度为 0. 025 6 mg /mL, 用
UV-265紫外 -可见分光光度计扫描测定 ,结果在
345 nm处有最大吸收峰。
2. 3　流动相及流速、进样量的选择: 曾采用流动相甲
醇-水 ( 75∶ 25)、甲醇-水 ( 50∶ 50)、甲醇-水-醋酸
( 30∶ 70∶ 0. 2)、 乙腈-水 ( 3∶ 7)、甲醇 -水 ( 3∶ 7)、
甲醇-水-乙腈 ( 22. 6∶ 11. 3∶ 66)、甲醇-水 ( 40∶
60)、甲醇-水-乙腈-冰醋酸 ( 40∶ 50∶ 10∶ 0. 25)、甲
醇-水-乙腈 ( 40∶ 50∶ 10)、甲醇-乙腈 -水 ( 24∶ 6∶
10)进行试验 ,结果样品的分离情况均不理想。采用甲
醇 -水-冰醋酸 ( 40∶ 60∶ 0. 25)为流动相 ,流速: 1. 0
m L /min,则样品分离较好。进样量 10μL,其理论塔板
数 5 024,分离度 1. 907。而进样量 20μL,则理论塔板
数 < 1 500,分离度 < 1. 5,故进样量确定为 10μL。
2. 4　对照品纯度测定:精密称取东莨菪内酯对照品 2. 7
mg,加甲醇溶解 ,制成浓度为 2. 70 mg /mL,采用以上
HPLC条件进行测定 ,进样量为 10μL。结果: 平均含量
为 ( 99. 365± 0. 12)% , RSD为 0. 12% 。
2. 5　标准曲线的绘制:在上述色谱条件下 ,分别取对
照品溶液 1, 2, 3, 4, 5μL,测得各峰面积。以东莨菪内
酯进样量为横坐标 ( A ) , 以峰面积 (Y ) 为纵坐标 ,
计算得回归方程: Y= 6. 832 8× 106A+ 8. 61× 103 ,
相关系数 r= 0. 999 9; 结果东莨菪内酯在 0. 025 6～
0. 128μg呈良好线性关系。
2. 6　精密度试验:取上述对照品溶液 ,重复进样 7
次 ,每次 12μL,连续测定 ,峰面积 RSD为 1. 46% 。
2. 7　重现性试验:精密称取同一批号药材粉末约 2
g (n= 5) , 照含量测定方法 ,RSD为 0. 46%。
2. 8　稳定性试验: 精密称取东莨菪内酯对照品适
量 ,加甲醇溶解配制成浓度为 13. 5μg /mL的对照
品溶液 ,按上述方法间隔一定时间 ( 0, 0. 5, 1, 1. 5,
2, 2. 5, 3, 4, 6 h)重复进样 ,每次进样 12μL,峰面积
RSD为 3. 691% ,表明在 6 h内基本稳定。
2. 9　回收率试验:精密称取已知含量的桑白皮样品
( n= 5) , 精密添加东莨菪内酯对照品 ,按样品制备
操作 ,测定计算平均回收率为 ( 98. 88± 1. 89)% ,
RSD为 1. 91%。
2. 10　不同来源桑白皮东莨菪内酯含量: 精密称取不
同来源桑白皮粗粉 (n= 2) ,照供试品溶液制备方法及
色谱条件 ,进行含量测定 ,结果各批号含量 (% )
A961111 ( 0. 002 0) , A970603 ( 0. 002 4) , A980318
( 0. 002 2) , B970600( 0. 017 1) , A970601( 0. 017 3) ,
B970301 ( 0. 017 1 ) , B970605 ( 0. 006 3) , B970316
( 0. 012 6) , B970405( 0. 012 5) , B980203( 0. 010 7)。
3　讨论
3. 1　样品选择: 由于桑白皮的来源复杂 ,对正品 35
批和 6个混淆品种样品均作了东莨菪内酯的含量测
定 ,根据含量摸清了市售、野生、产地收购、家种、混
淆品种含量差异 ,从中找出规律 ,再选择具有代表性
的 10批样品进行含量测定。
3. 2　根据 10批 20件样品测定结果 ,不同产地桑白
皮的东莨菪内酯含量不同 ,最高含量为 0. 017 3% ,
最低含量为 0. 002% 。以浙江嘉兴、桐乡、诸暨产的
桑白皮最佳。
3. 3　曾对 35批不同来源样品进行测试 ,结果表明
HPLC测定方法简便、稳定性好 ,灵敏度高、最小测
定值为百万分之一。
3. 4　对同科、同属不同品种的蒙桑、华桑、鸡桑的根
皮 ,照正文供试品制备方法和色谱条件 ,分别对其进
行东莨菪内酯的含量测定 ,发现其含量均小于
0. 000 1%。
·267·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
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紫丁香叶中丁香苦苷的 RP-HPLC法测定
王艳宏 ,李永吉 ,王艳芝* ,吕邵娃 ,杨志欣
(黑龙江中医药大学药学院 ,黑龙江 哈尔滨　 150040)
摘　要: 目的　建立紫丁香叶及其制剂的质量控制方法。 方法　采用 RP-HPLC法测定紫丁香叶中丁香苦苷的含
量。色谱柱: N ova-Pak○RC18 ( 3. 9 mm× 150 mm );流动相:甲醇 -水 ( 3∶ 7);流速: 1. 0 m L /min;检测波长: 221 nm;柱
温: 25℃。结果　紫丁香叶中丁香苦苷的含量为 1. 435 mg /g , RSD为 1. 24% (n= 3)。结论　本法灵敏度高 ,重现
性、稳定性好 ,测定迅速 ,结果准确。
关键词: RP-HPLC;紫丁香 ;丁香苦苷
中图分类号: R282. 6　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 03 0268 02
Quantitative determination of syringopicroside in leaves of Syr inga oblata by RP-HPLC
WANG Yan-hong , LI Yong-ji , WANG Yan-zhi , L U
··
Shao-wa, Y ANG Zhi-xin
( Colleg e o f Pharmacy, Heilong jiang Univ ersity o f TCM , Ha rebin 150040, China)
Key words: RP-HPLC; Syringa oblata Lindl. ; sy ringopicro side
　　紫丁香叶为木樨科植物紫丁香 Syringa oblata
Lindl. 的干燥叶。由于其抑菌谱广、抑菌力强 ,具有
对抗细菌耐药性的特点 ,现已收载入黑龙江省药品
标准。活性物质基础主要为酪醇、 3, 4-二羟基苯乙
醇、对羟基肉桂酸、 3, 4-二羟基苯甲酸、丁香苦苷
等 [1 ]。 20世纪 80年代后未见紫丁香叶及其制剂的
含量测定方法的报道。本研究采用 RP-HPLC法首
次建立了丁香苦苷的含量测定方法 ,从而为紫丁香
叶及其制剂的质量控制提供科学依据。
1　仪器与试药
HPLC色谱仪: Wa ters 680-DAD系统。丁香苦
苷对照品 (自制 ,纯度 98. 8% )。 甲醇 (色谱纯 ) ,超
纯水 ,乙醇、乙酸乙酯 (均为分析纯 ) ;紫丁香叶药材
(采自哈尔滨市郊的紫丁香叶。原植物经黑龙江中医
药大学生药教研室鉴定无误 )。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Nova-Pak○R C18 3. 9 mm× 150
mm;流动相: 甲醇-水 ( 3∶ 7) ;流速: 1. 0 m L /min;检
测波长 221 nm;柱温 25℃。 色谱图见图 1。
2. 2　线性关系: 精密称取减压干燥至恒重的丁香苦苷
对照品 5. 0 mg, 加甲醇使溶解 ,定容至 25 mL。 0. 45
μm微孔滤膜滤过。 分别精密吸取 2. 5, 5. 0, 10. 0,
15. 0, 20. 0μL,依次进样 ,按上述色谱条件测定峰面
积 ,以峰面积 ( Y )为纵坐标 ,丁香苦苷的进样量 ( X )为
横坐标 ,绘制标准曲线。回归方程为: Y= - 3 945. 4+
1 766 531. 4 X , r= 0. 999 5 ( 0. 5～ 4. 0μg )。
2. 3　样品溶液的制备: 取 20 g紫丁香叶粉 ( 60℃
干燥至恒重 ) ,精密称定 ,加 200 mL蒸馏水浸泡 30
min,沸水浴加热回流 2次 (每次均 200 mL, 1 h) ,
滤过 ,滤液合并 ,减压浓缩至 40 mL,调 70%醇沉静
置 24 h后离心取上清液 ,减压回收乙醇至 30 mL,
乙酸乙酯萃取 3次 ( 30, 30, 30 mL) ,合并萃取液并
回收至干 ,残渣加 50 mL甲醇溶解 ,定容至 100
mL。 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,备用。
2. 4　样品的测定:精密吸取样品溶液 10μL进样 ,按
上述色谱条件测定峰面积 ,以外标法计算含量 ,结果
·268· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 3期 2003年 3月
收稿日期: 2002-05-30基金项目: “十五”国家科技攻关项目 ( 2001AB701A07-15)作者简介:王艳宏 ( 1972- ) ,女 ,黑龙江省人 ,讲师 , 1995— 1998年在黑龙江中医药大学攻读硕士学位 ,毕业后一直在黑龙江中医药大学药学院从事教学和科研工作 ,主要从事经皮给药及中药注射剂的研究。 Tel: ( 0451) 2193439( 0)　 E-mail: w rdx@ sohu. com
* 2001年考入沈阳药科大学攻读博士学位